熔解曲线法快速分析我国常见三种葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因突变

葡萄糖 6 磷酸脱氢酶 (G6PD)缺乏症是我国长江流域以南常见的一种遗传病。G6PD缺乏症的主要原因是基因的点突变 ,引起我国人群G6PD缺乏症的主要突变有 12种 ,其中最为常见的是G1376T、G1388A、A95G[1] 。研究G6PD基因的突变类型和发生频率对临床诊断、群体遗传学、人类学和基因地理学等都有积极意义。我们应用荧光共振能量转移(FRET)结合荧光探针熔解曲线法设计出两对探针可检测我国常见的三种G6PD基因突变类型 ,现报道如下。病例和方法1　病例选择及标本制备　病例为一组有溶血表现并收治入院的患者 ,临床诊断为G6PD缺乏症 ,…     

高压球囊扩张术治疗良性输尿管多节段狭窄

目的探讨高压球囊扩张术治疗良性输尿管多节段狭窄的疗效。方法采用高压球囊扩张术治疗良性输尿管多节段狭窄15例（17侧）,男11例,女4例,平均年龄40岁;单侧多节段狭窄13例,双侧多节段狭窄2例;手术后瘢痕狭窄7例,先天性狭窄5例,炎性狭窄3例;经尿道插管逆行法13侧,经皮肾穿刺顺行法4侧。结果所有手术均成功,术后15例全部随访,治愈9侧,有效5侧,无效3侧,总有效率82．4％。结论高压球囊扩张术治疗良性输尿管多节段狭窄安全有效。     

彩超诊断卵巢巧克力囊肿113例体会

目的:探讨卵巢巧克力囊肿的超声表现特征和彩色多普勒血流信号及鉴别诊断.方法:使用彩色多普勒超声诊断仪对经手术病理证实的113例卵巢巧克力囊肿采用腹部或阴道常规切面扫查,以二维图像清晰显示出子宫及两侧附件,并测量病灶大小,再对病灶进行彩色多普勒血流显像.结果:113例病例中超声提示为卵巢巧克力囊肿的101例,单纯性卵巢囊肿1例,卵巢畸胎瘤3例,盆腔炎性包块3例,宫外孕1例,卵巢实质性肿瘤4例.经手术病理证实为卵巢巧克力囊肿的99例,14例经超声导向穿刺送病理检查证实,手术病理对照诊断符合率为89.38%,误诊率为10.62%.结论:结合包块的二维回声、彩色多普勒血流显像等超声特征能提高卵巢巧克力囊肿的诊断.     

球囊扩张治疗输尿管狭窄172例临床观察

目的 评价逆行球囊导管扩张输尿管狭窄的治疗效果.方法 采用球囊导管对172例输尿管狭窄患者进行扩张治疗,以上病例分为两组,原发性输尿管狭窄组与继发性狭窄组,均采用逆行法,扩张后均留置双J管.结果 155例扩张成功,症状和肾积水缓解,肾功能改善,17例拔山双J管后发生再狭窄,其中6例患者严重再狭窄,肾积水加重需手术治疗.结论 腔内球囊扩张治疗输尿管狭窄是一种安全有效、简便易行的方法.     

重组TACE前肽蛋白对小鼠内毒素血症抑制作用的实验研究

目的 建立小鼠内毒素血症模型,观察肿瘤坏死因子前体转换酶(TACE)前肽结构域对其催化结构域的自身抑制作用,为人工干预炎症过程提供依据和手段.方法 首先利用DNA重组技术分别构建含前肽结构域和催化结构域的重组载体:用PCR方法扩增出TACE的胞外结构域(T1300)和前肽结构域(T391),并克隆至载体pET-28a(+)中,转化至大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达出带有His-tag的目的 蛋白,两者均为包涵体,变性复活后经Ni2+-NTA亲和层析柱对表达的重组蛋白进行纯化.对纯化后的蛋白进行Western印迹分析.构建TACE信号肽+前肽结构域(T648)的真核表达质粒(pEGFP-N1/T648),将其瞬时转染HeLa细胞,通过观察绿色荧光蛋白的表达观察pEGFP-N1/T648转染后在细胞中分布情况.建立小鼠内毒素血症模型组,前肽重组蛋白治疗组和PRS对照组,通过流式细胞术检测小鼠腹腔巨噬细胞mTNF-a的表达,并取肝,肺,肾组织行HE染色,观察纯化的前肽蛋白对炎症的抑制作用.结果 成功构建了pEGFP-N1/T648真核表达载体,在体外转染HeLa细胞,可见荧光主要分布在细胞膜上.流式细胞技术证明重组前肽蛋白可明显对抗LPS诱发的sTNF-a分泌增加,使小鼠腹腔巨噬细胞膜表面mTNF-a增加,常规病理切片HE染色显示该蛋白可降低LPS诱发的小鼠肝,肾,肺组织的炎症反应.结论 TACE前肽重组蛋白降低了sTNF-a的分泌,对炎症有明显的抑制作用,为抗炎药物的设计和改造提供了新的依据和方法.     

NF-κB决定小鼠胎肝激酶-1基因启动子的基本活性

为克隆小鼠胎肝激酶-1（fetal liver kinase-1，FLK-1）基因上游启动子序列，并观察其不同截短片段在小鼠血管内皮细胞中的启动子活性，以小鼠全基因组为模板，通过PCR扩增方法获得-258～＋299bp、-96～＋299bp、-71～＋299bp、-36～-299bp大小的FLK-1启动子片段，将其定向克隆入pGL3-Basic，构建荧光素酶报告基因载体，并制备NF-κB结合位点的突变或缺失体。     

寡核苷酸的化学修饰及其在分子生物学的应用

本文将着重介绍寡核苷酸化学修饰的方法、寡核苷酸偶合物的设计原理,并简单的介绍了寡核苷酸偶合物在分子生物学中的应用。     

Rh血型D抗原弱表现型基因分型和序列分析

目的 探讨Ｒｈ血型Ｄ抗原弱表现型Ｄ抗原数目和（或）Ｄ抗原表位数减少形成的分子基础。方法 常规ＰＣＲ技术检测３名Ｄ抗原弱表现型非血缘关系个体Ｄ基因的第４内含子,多重ＰＣＲ技术分析第３、第６和第９外显子,并分别对３名个体的Ｄ基因部分序列进行分析。结果 ３名Ｄ抗原弱表现型个体Ｄ基因第４内含子,第３、第６和第９外显子检测结果与正常Ｄ基因完全一致,部分序列分析未发现基因突变和Ｄ／ＣＥ基因交换。结论 Ｄ抗原数     

两类金属蛋白酶在炎性细胞模型中的变化及中药RDQ的天然抑制效应

目的探讨金属蛋白酶(MPs)家族的MMPs和ADAMs两亚类成分在前体TNF-α(mTNF-α)向成熟型TNF-α(sTNF-α)转化过程所起的作用,MMPs在炎症过程中活性的变化和中药RDQ抗炎保护功效的分子机制,为人工干预炎症过程提供依据和手段。方法以LPS刺激HL-60细胞为天然模型,用细胞学和分子生物学技术在蛋白质和mRNA水平上研究MMPs、ADAM17、TNF-α在炎症过程中的表达和活性变化。结果①LPS刺激后,HL60细胞上清中MMPs的活性随刺激时间延长逐渐减弱,胞浆裂解物中的MMPs则随刺激时间延长活性增加但LPS刺激对MMPs mRNA的表达影响不大;②LPS刺激能使HL-60细胞中ADAM17mRNA和TNF-αmRNA表达在6h同时达高峰;③RDQ能明显降低LPS诱导的ADAM17 mR- NA的增加,并能抑制sTNF-α的分泌。结论①ADAM17对sTNF-α的产生起主导作用;②纯中药注射液热毒清(RDQ)能调节TACE的表达,最终抑制TNF-α的分泌。