CD161流式细胞术对活动性肺结核诊断效能的评价

目的 探讨以淋巴细胞表面分子CD161为标识的流式细胞术对活动性肺结核的诊断价值。方法 回顾性研究2020年4—12月在该院住院的活动性肺结核患者268例,其中痰涂片结果为阳性的患者170例作为涂阳组,3次或以上痰涂片结果未见结核分枝杆菌(TB)的患者98例为涂阴组。另选取该院的体检健康者138例为对照组。采用流式细胞术检测各组淋巴细胞、单核细胞和CD161阳性淋巴细胞比例。基于流式细胞术建立深度学习网络模型对活动性肺结核进行诊断,并与GeneXpert、TB-DNA、酶联免疫斑点(Elispot)试验的诊断效能进行比较。结果 各组淋巴细胞、单核细胞和CD161阳性淋巴细胞比例及OR比较,差异有统计学意义(P<0.05);GeneXpert、TB-DNA、痰培养、Elispot在涂阳患者中的检出率分别为87.65%、81.18%、60.00%、85.29%,深度学习网络模型在涂阳结核、涂阴结核患者中的检出率分别为77.05%、71.42%;深度学习网络模型鉴别涂阳组和对照组的受试者工作特征曲线下面积(AUC)为0.87(95%CI 0.84～0.91),准确率为0.82,灵敏度为...     

γ-干扰素释放试验在儿童肺结核中的诊断价值

目的 探讨γ-干扰素释放试验（interferon-γ release assay,IGRA）在儿童肺结核中的检测效果,评价其用于儿童结核的诊断价值。方法 选取深圳市第三人民医院儿童肺结核患者507例为儿童肺结核组、52例儿童非结核肺部疾病组和247例健康儿童对照组,采用IGRA方法,并比较三组IGRA的阳性率,评价IGRA在结核病诊断中的应用价值。结果 在健康儿童IGRA阳性率为21.05%（52/247）,其中有结核病人接触史儿童IGRA阳性率为30.76%（16/52）,无结核接触史儿童IGRA阳性率为18.46%（36/195）,差异有统计学意义（χ²=3.74,P<0.05）;结核病患儿和肺炎患儿IGRA阳性率分别为72.39%（367/507）和17.31%（9/52）,差异有统计学意义（χ²=64.97,P<0.01）;菌阳结核病患儿和菌阴结核病患儿IGRA阳性率分别为82.28%（209/254）和62.45%（158/253）,差异有统计学意义（χ²=24.94,P<0.01）。结论 IGRA对有结核病人接触史儿童IGRA阳性率较高,显示可用于诊断结核潜伏感染,且显示对菌阳结核病患儿也有较高的阳性率,也可用于儿童结核病诊断。IGRA可在儿童结核病中成为一种的辅助检查手段。     

结核病患者外周血和胸水T细胞中CD161表达差异的研究

目的 检测结核病患者外周血（PBMC）和胸水（PFMC）T细胞CD161水平,比较PBMC和PFMC T细胞 CD161表达水平的差异,明确结核病人外周及感染部位T细胞CD161表达的差异。方法 以流式细胞仪检测51例健康对照者、41例潜伏性结核感染患者、57例肺结核患者PBMC CD3⁺CD161⁺、CD4⁺CD161⁺和CD8⁺CD161⁺ 细胞的表达水平,比较其在不同人群中的差异;检测21例结核性胸膜炎患者PBMC和PFMC CD3⁺CD161⁺、CD4⁺CD161⁺和CD8⁺CD161⁺ 细胞的表达水平和差异,比较CD161在外周和感染局部的表达差异。结果 利用流式细胞仪检测CD161在PBMC和PFMC中表达,并且分别在T细胞（CD3⁺、CD4⁺和CD8⁺细胞）中表达;结核患者PBMC CD3⁺CD161⁺、CD4⁺CD161⁺和CD8⁺CD161⁺ 细胞表达均低于健康对照和潜伏感染者; 结核性胸膜炎患者PFMC中CD3⁺CD161⁺和CD4⁺CD161⁺细胞表达均高于PBMC（P<0.01）,但在PFMC中CD8⁺CD161⁺细胞则高于在PBMC中的表达（P<0.01）。结论 CD161均在PBMC和PFMC 中表达,并且CD161能区分结核患者、潜伏感染者以及健康人。另外CD3⁺CD161⁺和CD4⁺CD161⁺细胞表达在结核病感染局部增加,结果提示CD161可作为早期诊断结核患者的分子标识。     

结核分枝杆菌早期分泌抗原ESAT-6的高效表达及其在结核分枝杆菌特异细胞免疫检测中的应用

目的 获得纯化的MTB早期分泌抗原ESAT-6,并对其抗原性及在MTB特异性细胞免疫检测中的应用价值进行评价.方法 采用基因工程技术表达MTB ESAT-6蛋白,通过Western blot法分析ESAT-6与特异性抗体的反应性.以纯化ESAT-6为抗原,用酶联免疫斑点技术(Elispot)检测肺结核患者、健康医务工作者、自然村居民外周血γ-干扰素的应答水平,同时与用于隐性结核感染及结核病诊断的QFT-G检测法进行平行比较,对其在MTB感染细胞免疫检测中的应用价值进行评价.结果 成功表达和纯化了 ESAT-6重组蛋白,所表达的蛋白能被特异性抗ESAT-6抗体识别,同时与肺结核外周血单核细胞反应,刺激后者产生γ-干扰素.Elispot技术检测肺结核患者、健康医务工作者、自然村居民的阳性率分别为36/49(73.5%)、11/62(17.7%)、17/194(8.8%),同时用QFT-G法对肺结核患者和健康医务工作者进行检测阳性率分别为38/49(77.6%)、14/58(24.1%),两种检测方法比较敏感度(73.5%,77.6%;χ2=0.381,P>0.05)和特异度(82.3%,75.9%;χ2=0.406,P>0.05),差异无统计学意义.结论 利用pET原核表达系统可成功地表达和纯化MTB ESAT-6重组蛋白,以ESAT-6为抗原建立的Elispot外周血IFN-γ检测技术与QFT-G的特异性和敏感性相当,可用于结核病的辅助诊断.     

采用干扰素释放反应试验和PPD皮试对深圳市高校学生结核分枝杆菌潜伏感染筛查的研究

目的采用结核分枝杆菌特异性IFN-γ免疫酶联斑点法（ELISPOT）和传统的结核菌素皮试（PPD皮试）对深圳市高校学生结核分枝杆菌潜伏感染现状进行筛查,并比较两种方法的差异。方法采用自主研制的Elispot试剂盒（简称Elispot）和PPD皮试,对133例健康志愿者进行平行检测。结果A高校99例志愿者中PPD皮试有49例阳性（49.5％）,Elispot检测有20例阳性（20.2％）;B高校34例志愿者中PPD皮试有27例阳性（79.4％）,Elispot检测有2例阳性（5.9％）。对两种方法进行平行比较分析,结果有统计学差异（X^2=41.31,P〈0.005）;在PPD（卅）组中Elispot阳性率最高为28.57％;在（廾）-（-）组中分别为22.2％、12.5％及12.28％。结论结核菌特异性IFN-γ Elispot试剂盒在健康人群中检测阳性率比传统的PPD皮试要低,在诊断结核分枝杆菌潜伏感染的价值优于PPD皮试,在结核分枝杆菌潜伏感染早期诊断有较好的发展前景。     

儿童肺结核患者支气管肺泡灌洗液免疫细胞检测与分析

目的 采用流式细胞仪检测肺结核患者支气管肺泡灌洗液淋巴细胞亚群,探讨肺结核患者支气管肺泡灌洗液淋巴细胞免疫功能状态的变化。方法 选取19例儿童肺结核患者作为观察组,根据痰涂片结果分为菌阳组(11例)和菌阴组(8例)。同期选取就诊的21例成人肺结核患者作为对照组。通过流式细胞术对其进行检测,检测两组研究对象的支气管肺泡灌洗液T淋巴细胞、CD4⁺T淋巴细胞、CD8⁺T淋巴细胞、单核细胞和B淋巴细胞比例的变化,并比较其差异性。结果 儿童肺结核患者的支气管肺泡灌洗液中各免疫细胞的比例分别为：T淋巴细胞(54.57±5.28)%、CD4⁺T淋巴细胞(66.14±4.08)%、CD8⁺T淋巴细胞(33.80±4.07)%和B淋巴细胞(13.54±2.53)%与成人肺结核患者的T淋巴细胞(53.30±4.76)%、CD4⁺T淋巴细胞(65.45±3.49)%、CD8⁺T淋巴细胞(34.55±3.49)%和B淋巴细胞(14.70±2.83)%比较,两组差异均无统计学意义(...     

结核病人外周血CD_4~+T细胞TLR2的表达

目的研究结核患者与正常人Toll样受体TLR2的表达情况。方法选取肺结核(PTB)患者39例,结核性胸膜炎(TP)患者22例为研究组,38例健康者为对照组。通过流式细胞仪分析TLR2在结核病人中的活化的CD_4~+TT细胞和静息CD_4~+TT中及健康者中的表达,用实时定量PCR检测健康者和结核病人中的TLR2 mRNA的相对含量。结果在活化的CD_4~+TT细胞中TLR2阳性CD_4~+TCD+8T细胞,较静息CD_4~+TT细胞表达较高,TLR2在结核病人中的活化的CD_4~+TT细胞和静息CD_4~+TT中的表达量都明显高于健康者(P0.001,P0.05);在结核病人中TLR2 mRNA相对含量要明显高于健康者(P0.01)。结论对TLR2的测定对于结核病的诊断有一定指导意义,可作为于结核的诊断的辅助手段。     

鼻拭子和痰标本在新型冠状病毒核酸检测的对比研究

目的 分析新型冠状病毒肺炎(coronavirus disease 2019,COVID-19)患者鼻拭子和痰标本病毒核酸检测结果,为临床采样方式的选择提供参考依据.方法 收集深圳市第三人民医院新型冠状病毒肺炎78例患者共170例次同一天鼻拭子与痰配对标本,进行实时荧光PCR核酸检测,分析比较鼻拭子和痰标本检测情况.结...     

比较结脑病人血液和脑脊液IFN-γ的表达水平

目的采用结核分枝杆菌特异性IFN-γ酶联免疫斑点(Elispot)检测结核性脑膜炎病人外周血和脑脊液细胞中IFN-γ的表达,评价该方法在结核性脑膜炎诊断中的应用情况。方法采用自建立的结核分枝杆菌特异性IFN-γElispot检测技术(简称Elispot)检测16例结核性脑膜炎病人PBMC和脑脊液中结核菌特异性IFN-γ水平。结果 ELISPOT检测两种细胞分别在ESAT6蛋白和Pool A多肽的作用下,释放的IFN-γ水平均没差别(P0.05);两种标本ELISPOT检测阳性率没有差异(P0.05)。结论建立的结核特异性的Elispot检测诊断方法适用于脑脊液标本的检测,并且其检测效果与外周血细胞的检测是基本一致。