雄黄诱导MCF-7/ADM细胞凋亡及逆转其耐药性的研究

目的探讨雄黄诱导人乳腺癌MCF-7／ADM细胞凋亡及逆转其耐药性的调节机制。方法经MTT法探讨雄黄对人乳腺癌MCF-7／ADM细胞药物敏感性的影响;用透射电镜观察凋亡细胞形态改变;应用流式细胞术,探讨凋亡抑制基因bcl-2的编码蛋白Bcl-2的改变及凋亡百分率的改变;通过荧光分光光度法观察雄黄对细胞内化疗药物阿霉素积累的影响。结果雄黄对MCF-7／ADM的耐药性有明显的逆转作用,无毒剂量（15mg,L）及低毒剂量（25mg,L）雄黄作用后,逆转倍数分别为2．3倍及2．8倍;出现凋亡细胞,凋亡百分率由0．6％分别增至2．0％（P〈0．05）及3．4％（P〈0．01）;Bcl-2表达由90．2％分别降至63．6％（P〈0．01）及52．7％（P〈0．01）;MCF-7／ADM的细胞内阿霉素浓度明显增加（P〈0．01）。结论雄黄通过降低Bcl-2表达,促进细胞凋亡,增加耐药细胞内阿霉素积累量等耐药机制的调节,部分逆转了MCF-7／ADM细胞对阿霉素的耐药性。     

β-榄香烯对K562/阿霉素细胞多药耐药性的逆转及其对P-糖蛋白表达的影响

目的探讨β-榄香烯（β-elemene）对多药耐药细胞株K562／阿霉素（ADM）的耐药逆转及其对该细胞P-糖蛋白（P-gp）表达的影响。方法采用MTT法检测细胞的药敏性及耐药逆转,免疫组织化学及免疫电镜观察P-gp的表达,流式细胞术进行定量分析,应用SPSS（10．0 production pacility）软件包对实验结果进行统计学处理。结果1．非细胞毒性浓度的β-elemene（4．0mg／L）可显著降低ADM对K562／ADM细胞的IC50（P〈0．01）,逆转倍数为2．18倍;2．P-gp在耐药细胞株K562／ADM中呈高表达,而在敏感细胞株K562中表达很低,进一步定位研究结果表明,P-gp主要分布于细胞膜上;3．非细胞毒性浓度的β-elemene（4．0mg／L）能够显著降低耐药细胞P-gp的表达。结论β-elemene能够明显逆转K562／ADM细胞对ADM的耐药性,降低该细胞P-gp的表达是其主要逆转机制之一。     

20(R)人参皂甙Rg3逆转K562/ADM细胞MDR及诱导其凋亡的研究

目的　观察抗癌新药 2 0 (R) 人参皂甙Rg3(2 0 (R) ginsenoside ,Rg3)对K5 6 2 /ADM多耐药细胞株逆转MDR机制。方法　应用MTT法确定ADM和Rg3的细胞毒 ;用荧光分光光度仪测定K5 6 2 /ADM细胞内阿霉素 (Adriamycin ,ADM )的浓度 ;流式细胞仪检测细胞凋亡率和表达P 170糖蛋白 (P glycoprotein ,Pgp)的K5 6 2 /ADM的细胞含量。 结果　 (1)K5 6 2 /ADM细胞对阿霉素 (Adriamycin ,ADM )的抗性比K5 6 2细胞高 11倍 ,但两者对Rg3的IC50 分别为 11 76± 0 33μg/ml、10 4 9± 0 30 μg/ml,无显著性差异 (P >0 0 5 )。(2 )无毒剂量和低毒剂量的Rg3能显著提高K5 6 2 /ADM细胞内ADM的浓度 ,使该细胞对ADM的敏感性明显提高。 (3)Rg3对K5 6 2 /ADM细胞有较强的抑制生长和诱导凋亡作用 ,并有时间和浓度依赖性。(4)Rg3对表达P 170糖蛋白的K5 6 2 /ADM细胞的百分含量无显著性影响。结论　 2 0 (R) 人参皂甙Rg3不仅是抑制肿瘤生长和转移的抗瘤剂 ,也是一种有效的MDR逆转剂和细胞凋亡诱导剂     

蝙蝠葛碱逆转K562/ADM细胞多耐药性的研究

目的：研究具有钙拮抗作用的中药蝙蝠葛碱对多耐药性的逆转作用。方法：选用异搏定作阳性对照，观察其对多药耐药细胞株K562/ADM多药耐药性的逆转作用。结果：蝙蝠葛碱在非细胞毒性剂量下能使K562/ADM对阿霉素的浓度升高，但对细胞表面的糖蛋白P-170却没有影响。结论：蝙蝠葛碱具有逆转白血病细胞株K562/ADM多药耐药性的作用。     

雄黄与β-榄香烯联合用药逆转MCF-7/ADM细胞对阿霉素耐药性的研究

目的 探讨不同作用机制的雄黄(REA)与β-榄香烯(β-ELE)联合应用,从不同环节逆转人乳腺癌MCF-7/ADM细胞对阿霉素(ADM)的耐药性.方法 联合用药后,经MTT法测定对MCF-7/ADM细胞药物敏感性的影响,通过荧光分光光度法检测对细胞内化疗药物阿霉素积累的影响,应用流式细胞术检测P-GP、Bcl-2蛋白表达的改变.结果 联合用药对MCF-7/ADM的耐药性有明显的逆转作用,逆转倍数约为4.2倍,明显好于两者单独应用(P<0.01).联合用药后,MCF-7/ADM细胞内阿霉素浓度明显增加(P<0.01),P-GP表达由(95.90±3.02)%降至(76.50±5.16)%(P<0.01),Bcl-2表达由(90.20±3.99)%降至(50.00±1.63)%(P<0.01).结论 雄黄与β-榄香烯联合用药可显著增强对MCF-7/ADM细胞的耐药逆转作用,逆转机制与增加细胞内药物积累,降低P-GP、Bcl-2的表达有关.     

鬼臼叉甙诱导HL－60细胞分化时c－myc蛋白的表达

目的：观察小剂量鬼臼叉甙对ＨＬ－６０细胞的诱导分化作用和对ｃ－ｍｙｃ蛋白表达的影响。方法：应用加入鬼臼叉甙（ＶＰ－１６）和维甲酸（ＲＡ）的含２０％小牛血清的培养基培养人类早幼粒细胞株（ＨＬ－６０），分别在培养后１、２、４、６ｄ测定细胞各时相的ｃ－ｍｙｃ蛋白水平。结合细胞形态、细胞化学和氯化硝基四氮唑蓝（ＮＢＴ）还原试验，观察ＶＰ－１６、ＲＡ对ＨＬ－６０细胞的诱导分化作用及其与ｃ－ｍｙｃ蛋白表达的关系。结果：与ＲＡ一样，小剂量ＶＰ－１６能诱导ＨＬ－６０细胞向粒系分化。并且在ＨＬ－６０细胞分化过程中ｃ－ｍｙｃ蛋白水平明显降低。ＶＰ－１６处理的ＨＬ－６０细胞其ｃ－ｍｙｃ蛋白降低与其诱导分化作用呈负相关。结论：实验结果提示，ｃ－ｍｙｃ原癌基因表达的变化可能是ＶＰ－１６诱导ＨＬ－６０细胞分化的机制之一。     

组织块法培养人胃成纤维细胞及其结缔组织生长因子的表达

[目的]探索人胃成纤维细胞体外培养的技术方法及其结缔组织生长因子表达情况。[方法]采用组织块贴壁培养法进行人胃成纤维细胞体外培养并传代,倒置相差显微镜下观察成纤维细胞形态,并用免疫细胞化学法检测培养细胞的波形蛋白与角蛋白表达。用RT-PCR法检测人胃成纤维细胞结缔组织生长因子(CTGF)mRNA表达,免疫细胞荧光染色法检测人胃成纤维细胞CTGF蛋白表达情况。[结果]人胃成纤维细胞培养成功传代,表现为长梭形或星形细胞,免疫细胞化学鉴定细胞波形蛋白阳性,角蛋白阴性。RT-PCR法与免疫细胞荧光染色法证实体外培养的人胃纤维细胞表达CTGF。[结论]组织块法培养的人胃成纤维细胞可在体外稳定培养、传代,人胃成纤维细胞能合成CTGF。     

多耐药性肿瘤细胞系与其亲代药敏细胞系的核型比较研究

实验发现多耐药性肿瘤细胞系ＣＥＭ／ＶＬＢ与其亲代药敏细胞系ＣＣＲＦ－ＣＥＭ间存在明显核型差异。核型中出现两条独特标记染色体，它们来源于１号染色体和２号染色体，其臂分别含均染区和异常显带区，这表明ＣＥＭ／ＶＬＢ细胞内可能存在基因扩增，结合对耐低浓度药物细胞系ＣＥＭ／ＥＲ的核型分析，进一步阐明肿瘤细胞在产生多耐药过程中存在的核型演变过程及特征。     

川芎嗪脂质体对人白血病细胞株K562多药耐药逆转作用的研究

目的:研究川芎嗪脂质体在体外对肿瘤细胞的细胞毒作用和对多药耐药的逆转作用,并研究脂质体剂型对上述作用的影响.方法:MTT法检测川芎嗪脂质体以及川芎嗪原料对照组、空白脂质体对照组对耐阿霉素的人白血病细胞株(K562/ADM)的细胞毒性和多药耐药逆转作用.结果:川芎嗪脂质体对K562/ADM有明显的细胞毒作用.非细胞毒性剂量(生长率≥95%)为2.0μg·ml-1,该浓度下可显著降低ADM对K562/ADM细胞的IC50(P＜0.01),抗药性逆转为11.2倍.低毒剂量(生长率85～90%)为2.6μg·ml-1,抗药性逆转为178倍.2.0μg·ml-1的川芎嗪原料对照组可显著降低ADM对K562/ADM细胞的IC50(P＜0.01),抗药性逆转为7.9倍;同比稀释的空白脂质体对照组可显著降低ADM对K562/ADM细胞的IC50(P＜0.01),抗药性逆转为4.9倍.结论:川芎嗪脂质体体外对人白血病细胞K562/ADM有明显的细胞毒作用和MDR逆转作用;在一定浓度范围内川芎嗪脂质体的细胞毒性与逆转作用有剂量依赖性;脂质体本身对逆转有增效作用.     

β-榄香烯诱导K562白血病细胞凋亡

目的 探讨β-榄香烯诱导人红白血病K562细胞株凋亡作用的机制。方法 采用Hoechst33342和PI荧光染色电镜、DNA电泳、免疫组化以及流式细胞术分析法,对K562细胞凋亡的定性与定量以及凋亡抑制基因编码蛋白bcl-2在肿瘤细胞内的表达进行检验。结果 经β-榄香烯处理的K562细胞出现核固缩,染色质边集, 凋亡小体形成,琼脂糖凝胶电泳呈现出细胞凋亡特征性的DNA梯状带,凋亡细胞发生率与药物浓度和作用时间呈正相关,即药物浓度为40ug/ml(48h),凋亡细胞的发生率从2.3%上升至58.4%,经β-榄香烯处理的K562细胞的bcl-2表达较对照组降低。结论 β-榄香烯对肿瘤细胞的杀伤主要是通过诱导细胞凋亡,其抑制细胞内Bcl-2的表达,是诱发肿瘤细胞凋亡的主要机制之一。