三氧化二砷逆转人乳腺癌MCF-7/ADM细胞耐药的机制研究

目的　探讨三氧化二砷 (As2 O3 )对人乳腺癌MCF 7/ADM细胞耐药性的逆转作用及其相关机制。方法　采用MTT法检测As2 O3 的细胞毒性及非细胞毒性剂量 ,对MCF 7/ADM细胞药敏性的影响。以荧光分光光度计测定细胞内药物浓度的改变 ,明确As2 O3 对MCF 7/ADM的逆转作用。同时 ,于逆转前后分别采用生化方法测定谷胱甘肽S 转移酶 (GSTs)酶活性 ,RT PCR方法检测GST πmRNA表达水平的改变。结果　As2 O3 的非细胞毒性剂量为 0 .2 μmol/L ,低毒剂量为 0 .8μmol/L。0 .2 μmol/LAs2 O3 可增加MCF 7/ADM细胞内阿霉素 (ADM)浓度 ,使细胞MCF 7/ADM的IC50 由原来的5 3.74 μmol/L降低至 2 5 .0 μmol/L ,其逆转倍数为 2 .1倍。在 0 .2 μmol/L、0 .8μmol/LAs2 O3 作用前后 ,GSTs酶活性有显著性改变 ,由 2 9.6 8± 0 .2 9(U/ml)分别降低为 19.2 9± 2 .10 (U/ml)、12 .6 6± 2 .78(U/ml) ,P <0 .0 5 ,而GST πmRNA的表达水平也呈不同程度的下调。结论　As2 O3 可部分逆转人乳腺癌MCF 7/ADM细胞对ADM的耐药性 ,其逆转机制可能与细胞内GST π的改变有关。     

台盼兰排染法用于细胞凋亡或坏死观察的可靠性研究

台盼兰排染法用于细胞凋亡或坏死观察的可靠性研究于丽敏郝立宏卢步峰杨佩满（大连医科大学组胚教研室）研究细胞存活及死亡的方法很多，一般实验室常用的方法有普通光镜下的台盼兰排染法和荧光显微镜下的Ｈｏｅｃｈｓｈ３３３４２及碘化丙啶（简称ＰＩ）荧光染色法。通常...     

肿瘤细胞多耐药性的研究进展

肿瘤细胞对细胞毒药物产生耐药性是临床化疗失败的主要原因之一。在肿瘤细胞的各种耐药类型中,以多耐药性(mutidrug resistance,MDR)最为重要。所谓多耐药性就是肿瘤细胞与化疗药物接触后,不但能够获得对这种药物的耐药性,     

山麦冬对HL_(60)细胞诱导分化作用的初步研究

本文以山麦冬水溶提取物为诱导分化剂,观察其对HL_(60)组胞的诱导分化作用,发现HL_(60)细胞在山麦冬作用下,细胞形态变得不规则,细胞核呈杆状或分叶状,核仁消失,胞质出现特殊颗粒,NBT阳性细胞率明显升高,c-myc原癌基因表达下降。上述结果表明,山麦冬具有明显的促分化作用,值得进一步研究。     

营养组合物对再生障碍性贫血小鼠骨髓造血细胞线粒体形态及跨膜电位的影响

目的研究营养组合物对再生障碍性贫血(aplasbic anemia,AA)小鼠骨髓造血细胞线粒体形态及跨膜电位的影响,探讨其治疗再生障碍性贫血的作用机制。方法 BALB/c小鼠100只,适应性喂养1w后,随机分为:正常对照组、再障模型组及不同剂量的营养组合物组。采用皮下注射乙酰苯肼100mg/kg,次日X射线2.0Gy照射后,于试验第5天环磷酰胺80mg/kg腹腔注射,第15天重复以上步骤但不给予射线处理,建立再生障碍性贫血小鼠模型,以铅砖屏蔽施以假照射及单纯等量生理盐水相应部位注射为正常对照组。试验第7天开始,营养组合物高、中、低剂量组小鼠每天灌胃,分别给予1445.55,963.7,674.59mg/(kg·d)营养组合物,直至第45天,颈椎脱臼法处死小鼠,观察试验小鼠的骨髓象、透射电镜观察骨髓造血细胞线粒体超微结构,流式细胞术检测线粒体跨膜电位。结果①骨髓透射电镜显示,再障模型组小鼠造血细胞内线粒体数目较正常对照组明显减少(P0.01),线粒体肿胀变性,呈空泡样变或髓样变,嵴不清楚或消失,内质网及核模有不同程度扩张。而各营养组合物组与再障模型组比较,此类细胞内线粒体数目明显增多,线粒体肿胀变性显著减轻。对照组骨髓造血细胞线粒体结构无明显异常。②各营养组合物组骨髓造血细胞随着营养组合物剂量的升高,线粒体膜电位明显升高,呈量效关系,抑制细胞的凋亡,而再障模型组细胞膜电位明显降低。结论营养组合物能够明显改善AA小鼠骨髓造血细胞线粒体数量和结构,抑制跨膜电位下降及细胞凋亡,此可能为其治疗AA的作用机制之一。     

补骨脂素加长波紫外线照射对白血病K562细胞的杀伤作用

目的:探讨补骨脂的提纯物补骨脂素(psoralen)加长波紫外线(ultraviolet-A light)照射光化学疗法,亦称PUVA(psoralen plus ultraviolet-A light)疗法,对慢性粒细胞白血病红白病变细胞株K562细胞的杀伤作用.方法:以传代培养的K562细胞为模型,采用四甲基偶氮唑盐比色法(monotetrazolium test, MTT)测定单纯补骨脂素、单纯紫外线照射及PUVA疗法对白血病细胞的杀伤作用;采用流式细胞仪对其进行DNA含量分析,并用早期凋亡试剂盒Annexin-Ⅴ-FITC和碘化丙啶(propidine iodide, PI)双染法测定单纯补骨脂素对白血病细胞的作用;采用电镜技术对其进行形态学观察.结果:单纯补骨脂素或单纯紫外线照射对K562细胞均有杀伤作用,PUVA比单纯补骨脂素或单纯紫外线照射对K562细胞的杀伤作用有明显增强(P＜0.05).PUVA处理后的白血病细胞通过流式细胞仪可以检测到亚二倍体凋亡峰.电镜下可见:细胞体积变小,胞浆浓缩,胞核染色质聚集或边集,核小体碎裂,大部分细胞呈典型的凋亡形态.结论:中药补骨脂提纯物补骨脂素对人白血病细胞K562具有杀伤作用.补骨脂素具有光敏活性,结合360 nm波长紫外线照射治疗对K562细胞的杀伤作用有明显增强.紫外线照射时间以10 min为最佳;补骨脂素适宜的终浓度为40 μg/ml.PUVA对人白血病细胞K562杀伤作用的机制主要是诱导细胞凋亡.     

染色体提前浓集技术及其应用

染色体提前浓集技术(Premature Chromosome Condensation),简称 PCC,是近十几年来在细胞融合和染色体技术的基础上发展起来的一种新技术。PCC 的概念是 Johnson 和 Rao 于1970年根据其实验结果提出来的。他们认为,PCC 就是用间期细胞与分裂期细胞融合,使间期染色质在间期内提前浓集成染色体的现象。这种提前浓集的染色体称为 PC 染色体。1977年 Lau 用化学融合剂聚乙二醇代替生物融合剂仙台病毒,获得了大量的融合细胞,简化了操作,使这项技术逐渐得到广泛应用。     

β-榄香烯吗素与阿霉素联合应用对CEM/ADM细胞生长的影响

应用台盼蓝排染法,Wirght-Giemsa混合染色法,Hoechst3342荧光染色法及碘化丙啶(Propidiumiodide,PI)与Hoechst-33342共染计数坏死细胞的PI阳性率测定法,研究β-榄香烯吗素(PIC-BE)及其与阿霉素(ADM)联合应用对CEM/ADM细胞生长的影响.结果显示:①PIC-BE能够显著抑制CEM/ADM细胞的生长,并诱导该细胞凋亡,其作用强度在一定范围内呈浓度和时间依赖性.②低毒剂量的PIC-BE与ADM联合应用可显著增强ADM对CEM/ADM细胞的生长抑制和凋亡诱导作用,其作用强度在一定范围内亦呈浓度和时间的依赖性.提示:PIC-BE主要以诱导肿瘤细胞凋亡而表现其抗肿瘤作用,并且其对ADM的抗肿瘤作用具有协同效果.     

川芎嗪与β-榄香烯联合应用诱导K562/ADM细胞凋亡及逆转其MDR的实验研究

目的:探讨不同作用机制的川芎嗪(Tetrainethylpyrazine,TMP)与β-榄香烯(β-elemene)联合应用,从多环节逆转耐药细胞K562/ADM的多药耐药(multidrug resistance,MDR),以期进一步提高逆转效果.方法:采用MTT法检测细胞的药敏性及抗药性逆转,流式细胞术及透射电镜检测细胞凋亡,应用SPSS(10.0 Production Pacility)软件包对实验结果进行统计学处理.结果:1)非细胞毒性浓度的TMP(350μg/ml)及β-榄香烯(4.0μg/ml)可显著降低ADM对K562/ADM细胞的IC50(P＜0.01),逆转耐药倍数分别为2.03倍及2.18倍.β-榄香烯(4.0μg/ml)具有诱导该细胞凋亡的作用.2)上述两种药物以非细胞毒性浓度联合应用,对ADM的逆转倍数为4.65倍,明显高于二者单独应用,而且也高于两者单独应用之和.其主要逆转机制是两药的联合应用通过升高细胞内ADM的浓度,诱导该细胞凋亡的途径,实现提高逆转效果的目的.结论:TMP和β-e榄香烯联合应用能明显逆转K562/ADM细胞对ADM的耐药性和诱导该细胞的凋亡.