肿瘤攻防战——肿瘤细胞多药耐药性产生机制及逆转的研究进展

在肿瘤的治疗手段中，化疗一直占据着不可替代的地位。联合化疗虽然对少数恶性肿瘤(如睾丸癌和儿童急性白血病)有明显的治疗效果，但对大多数恶性肿瘤却收效甚微，这其中一个很重要的原因就是肿瘤细胞对化疗药物产生了耐药性。     

二次PCR检测HL_（60）细胞系PML－RAR_α融合mRNA

急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）具有染色体易位ｔ（１５；１７）而产生的特异的融合基因ＰＭＬ－ＲＡＲ_α。本研究应用二次聚合酶链反应（ｂｏｏｓｔｅｒＰＣＲ）技术检测了ＡＰＬ细胞系ＨＬ_（６０）细胞中ＰＭＬ－ＲＡＲ_α融合ｍＲＮＡ。结果表明，ＨＬ_（６０）细胞系中同时具有二种ＰＭＬ－ＲＡＲ_α融合ｍＲＮＡ异构体（Ｌ型和Ｓ型）。本实验的敏感度可达１０￣（－６）个细胞水平，同时检测了结果具有高度的特异性。提示本方法可作为今后检测ＡＰＬ微量残留白血病细胞一种灵敏、有效的手段。     

P-170糖蛋白在多药耐药(MDR)K562/ADM细胞中的定位研究

目的：确定P-170糖蛋白在多药耐药（MDR）K562/ADM细胞中表达的位置，方法：通过免疫反应并利用流式细胞仪（FCM）检测表达P-170糖蛋白细胞的百分含量；用免疫电镜技术检测P-170糖蛋白在细胞中的位置及其表达水平。结果：敏感株K562细胞与耐药株K562/ADM细胞对P-170糖蛋白的表达有非常明显的差异；不同的K562/ADM细胞表达P-170糖蛋白的量差别较大；少量的K562细胞也有极少的P-170糖蛋白的表达，细胞表达的P-170糖蛋白位于细胞膜上，结论：多药耐药K562/ADM细胞表达的P-170糖蛋白最终被镶嵌在细胞膜上；在该蛋白质从被表达，修饰和转运到细胞膜上的过程中，该蛋白质不具有成熟P-170糖蛋白的特异构象。     

VEGF-AsiRNA对人肝癌HepG2细胞体外增殖、侵袭及化疗敏感性的影响

目的本研究应用RNA干扰技术下调人肝癌细胞株HepG2中VEGF-A的表达,观察该细胞的体外增殖、侵袭能力,进一步研究调节VEGF-A的表达对肿瘤细胞药敏性的影响。方法采用RT-PCR、Western Blot分析干扰前后HepG2细胞中VEGF-A的表达情况;体外侵袭实验检测干扰前后HepG2细胞的侵袭能力;MTT法分析干扰前后HepG2细胞的增殖情况及该细胞的药敏性。结果HepG2/RNAi细胞中VEGF-A的表达与未给予RNA干扰处理的对照组及RNA干扰对照组相比出现明显下调;该细胞的增殖及穿过基质胶的侵袭能力下降;同时上调该细胞对化疗药物的敏感性。结论人肝癌细胞中VEGF-A的表达与肿瘤细胞的增殖、侵袭及对抗肿瘤药物的敏感性密切相关,为肿瘤的化学治疗提供新靶点。     

Aurora-A激酶在肺癌中的表达

[目的]探讨Aurora-A基因在不同组织类型肺癌中的表达及其与临床的相关性.[方法]采用RT-PCR、Western-blot与免疫组化方法检测肺癌组织标本行Aurora-A的mRNA与蛋白表达.[结果]肺癌30例标本中RT-PCR检测Aurora-A mRNA的表达,19例(63%)肺癌表达水平高于相应癌旁组织,其中Western blot方法检测20例中,13例(65%)蛋白表达水平高于相应癌旁组织.免疫组化检测48例肺癌中32例高表达(66.67%).肺癌Aurora-A mRNA的表达水平与肺癌患者的性别,吸烟史以及病理特征无明显相关性.肺鳞癌的Aurora-A的蛋白水平高表达程度与肿瘤转移有相关性.[结论]肺癌组织Aurora-A表达明显高于其癌旁组织,提示Aurora-A基因的过表达与肺癌的发生有相关性.     

CXCR4对小鼠腹水型肝癌细胞淋巴转移潜能的影响

目的探讨趋化因子受体CXCR4表达水平对小鼠腹水型肝癌细胞淋巴转移潜能的影响。方法采用RT-PCR,流式细胞仪检测趋化因子受体CXCR4在小鼠腹水性肝癌细胞株Hca-F和Hca-P细胞的表达。通过归巢实验测定用抗体封闭CXCR4表达前后细胞特异性的向淋巴管迁移能力。结果CXCR4及其mRNA在高转移潜能小鼠肝癌细胞系Hca-F的表达高于低转移潜能小鼠肝癌细胞系Hca-P的表达。CX-CR4中和抗体能够抑制Hca-F细胞在体内向淋巴结转移。结论CXCR4在Hca-F、Hca-P细胞表面表达水平不同,可能是导致它们向淋巴管转移的潜能不同的影响因子之一,CXCR4表达水平与Hca-F、Hca-P细胞的特异性淋巴管转移潜能有关。     

RNA干扰技术在肿瘤研究中的应用

RNA干扰(RNAi)是由双链RNA(dsRNA)引起的与其同源的mRNA特异性降解,导致转录后基因沉默。RNAi技术比传统的反义寡核苷酸技术更加有效,为在体内、外研究基因的功能提供了快速而相对简便的途径,并可能成为治疗肿瘤等疾病的有效手段。RNAi技术可以通过各种策略直接靶向肿瘤治疗。RNAi可以抑制癌基因、生长因子及其受体的过表达而抑制细胞生长;通过干扰细胞周期蛋白及其相关基因的表达可以抑制细胞增殖;靶向耐药基因的RNAi有利于肿瘤治疗。     

L-选择蛋白可能介导小鼠肝癌HCa-F细胞经淋巴道转移的研究

目的观察L-选择蛋白是否介导小鼠肝癌HCa-F细胞与淋巴结黏附,探讨HCa-F细胞特异性向周围淋巴结转移的分子机制。方法应用免疫细胞化学方法验证小鼠肝癌HCa-F细胞为非淋巴细胞来源;用免疫印迹分析、RT-PCR及流式细胞术检测L-选择蛋白在HCa-F细胞的表达;并用L-选择蛋白的抗体抑制HCa-F细胞与冰冻淋巴结切片间的黏附实验(Stamper-Woodruff method)检测L-选择蛋白的功能。结果HCa-F细胞为非淋巴细胞来源的肝癌细胞,在其表面有L-选择蛋白的表达,且HCa-F细胞与淋巴结之间的黏附可被L-选择蛋白的抗体抑制。结论非淋巴细胞来源的HCa-F细胞表面表达功能性L-选择蛋白分子,并可协助其与淋巴结黏附,从而可能介导HCa-F细胞向淋巴道转移。     

三氧化二砷逆转人乳腺癌MCF-7/ADM细胞耐药的机制研究

目的　探讨三氧化二砷 (As2 O3 )对人乳腺癌MCF 7/ADM细胞耐药性的逆转作用及其相关机制。方法　采用MTT法检测As2 O3 的细胞毒性及非细胞毒性剂量 ,对MCF 7/ADM细胞药敏性的影响。以荧光分光光度计测定细胞内药物浓度的改变 ,明确As2 O3 对MCF 7/ADM的逆转作用。同时 ,于逆转前后分别采用生化方法测定谷胱甘肽S 转移酶 (GSTs)酶活性 ,RT PCR方法检测GST πmRNA表达水平的改变。结果　As2 O3 的非细胞毒性剂量为 0 .2 μmol/L ,低毒剂量为 0 .8μmol/L。0 .2 μmol/LAs2 O3 可增加MCF 7/ADM细胞内阿霉素 (ADM)浓度 ,使细胞MCF 7/ADM的IC50 由原来的5 3.74 μmol/L降低至 2 5 .0 μmol/L ,其逆转倍数为 2 .1倍。在 0 .2 μmol/L、0 .8μmol/LAs2 O3 作用前后 ,GSTs酶活性有显著性改变 ,由 2 9.6 8± 0 .2 9(U/ml)分别降低为 19.2 9± 2 .10 (U/ml)、12 .6 6± 2 .78(U/ml) ,P <0 .0 5 ,而GST πmRNA的表达水平也呈不同程度的下调。结论　As2 O3 可部分逆转人乳腺癌MCF 7/ADM细胞对ADM的耐药性 ,其逆转机制可能与细胞内GST π的改变有关。     

台盼兰排染法用于细胞凋亡或坏死观察的可靠性研究

台盼兰排染法用于细胞凋亡或坏死观察的可靠性研究于丽敏郝立宏卢步峰杨佩满（大连医科大学组胚教研室）研究细胞存活及死亡的方法很多，一般实验室常用的方法有普通光镜下的台盼兰排染法和荧光显微镜下的Ｈｏｅｃｈｓｈ３３３４２及碘化丙啶（简称ＰＩ）荧光染色法。通常...