HE切片中苏木素沉渣去除方法探讨

目的：探讨去除HE染色切片中苏木素沉渣的方法.方法：采用下列三种方法去除HE染色切片中的苏木素沉渣并比较其效果：（1）陈旧苏木素染色液加热至40℃;（2）滤纸过滤陈旧苏木素染色液;（3）石蜡切片经1.0%NaOH浸泡8 min、1.0%NaHCO3浸泡2 min、200 U/ml糜蛋白酶浸泡8 min后在陈旧苏木素染色液中染色.此外,在AB/PAS染色前和染色后用1.0%NaOH、1.0%NaHCO3、200 U/ml糜蛋白酶浸泡切片,观察该化学处理对粘液染色效果的影响.结果：经过1.0%NaOH、1.0%NaHCO3或200 U/ml糜蛋白酶浸泡的切片,HE染色后无苏木素沉渣附着;陈旧苏木素染色液加热后染色,切片中仍有大量苏木素沉渣附着,过滤后染色则切片中苏木素沉渣消失.在AB/PAS染色后、苏木素衬染前1.0%NaOH、1.0%NaHCO3或200 U/ml糜蛋白酶处理切片,粘液区呈强阳性染色;AB/PAS染色前用上述方法处理切片,粘液染色强度略有减弱.结论：陈旧苏木素染色液过滤经1.0%NaOH、1.0%NaHCO3、200 U/ml糜蛋白酶浸泡均可有效去除HE染色切片中的苏木素沉渣.     

bcl-2基因转染对大鼠胰岛细胞培养的影响

目的探讨bcl-2基因转染对培养的胰岛细胞凋亡和生物活性的影响。方法用腺病毒介导的基因转染方法把bcl-2转染人胰岛细胞，用RT—PCR和免疫细胞化学方法检测转染细胞中bcl-2的表达，原位末端标记（TUNEL）检测细胞凋亡，台盼蓝测定细胞活度，放免法测定培养液巾胰岛素水平了解胰岛功能。结果转染的胰岛细胞中70％的细胞有bcl-2蛋白的表达，转染细胞的凋亡率为6％，对照组为22死，转染胰岛细胞的活度为91％，对照组为68％，转染胰岛细胞在高糖培养基中胰岛素水平高于对照组。结论腺病毒介导的基冈转染方法能成功转染胰岛细胞，bcl-2基因转染能降低细胞凋亡率，改善胰岛细胞功能。     

血管内皮生长因子基因在兔股骨头滑膜细胞的表达

目的:观察血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)基因在兔股骨头滑膜细胞的表达,以期为股骨头缺血性坏死的基因干预提供实验依据。方法:实验于2002-12/2004-08在中国医学科学院昆明医学生物学研究所和解放军成都军区昆明总医院中心实验科完成。选择健康成年24周龄以上的日本大耳兔12只,对照组和基因组各6只。将重组VEGF基因的真核表达载体(pcDNA/VEGF)和空载体pcDNA各200μg分别注入基因组和对照组兔髋关节腔,采用免疫组化法检测pcDNA/VEGF和pcDNA在滑膜细胞中的表达。结果:VEGF基因转染7d后,可见pcDNA/VEGF在滑膜细胞高效表达,而对照组(空质粒pcDNA)则无。结论:重组VEGF基因可在兔股骨头滑膜细胞中表达,促进股骨头缺血坏死处新生血管形成和侧支循环建立,为基因干预股骨头缺血性坏死提供了理论基础。     

H-ras、c-erbB-2、p53蛋白在乳腺增生病中的表达及意义

我们通过检测Ｈｒａｓ、ｃｅｒｂＢ２、ｐ５３蛋白在乳腺增生病和乳腺癌中的表达，探讨不同增生程度的乳腺增生病与乳腺癌的关系。一、材料与方法１．标本：取自成都军区昆明总医院病理科１９９０～１９９６年的存档蜡块，包括导管上皮轻度增生、导管上皮中重度增生、导管上皮不典型增生和导管癌各６０例，共２４０例。标本均经４％甲醛固定，逐级乙醇脱水和常规石蜡包埋。２．乳腺增生病的分级标准：参照Ｐａｇｅ分类［１，２］、李维华和纪小龙［３］提出的标准将导管增生分为轻度增生、中重度增生和不典型增生３级。轻度增生指导管…     

乳腺癌发生过程中NOEY2基因启动子区甲基化及mRNA表达

目的 探讨乳腺癌发生过程中抑癌基因NOEY2启动子区甲基化状态及其对mRNA表达的影响。方法 应用甲基化特异性PCR及双亚硫酸钠基因测序技术检测MCF10模型中乳腺增生细胞系MCF10A、癌前细胞系MCF10AT、导管内癌细胞系MCFIODCIS．com、浸润癌细胞系MCF10CA1a、MCF10CA1d、MCF10CA1h及正常乳腺组织中NOEY2基因启动子区CpG岛Ⅰ甲基化状态,然后用RT-PCR和实时PCR技术检测上述样品的mRNA表达水平。结果 MCF10模型的增生细胞系、癌前细胞系、导管内癌细胞系、浸润癌细胞系均发生该基因启动子区CpG岛Ⅰ高度甲基化;与正常乳腺组织相比,上述细胞系mRNA表达显著减少。结论 NOEY2基因启动子区高度甲基化及相应的mRNA表达减少是乳腺癌发生过程中的早期事件,与乳腺癌发生有关,可能成为早期诊断乳腺癌的潜在分子生物学标记。     

Ig基因重排检测在B细胞性淋巴瘤诊断中的应用

目的探讨Ig基因重排检测在B细胞性淋巴瘤中的诊断价值。方法选取B细胞性淋巴瘤30例、淋巴组织反应性增生30例,提取DNA,应用BIOMED-2引物系统中的47条引物进行PCR扩增,核酸分子异源双链凝胶电泳分析Ig基因重排结果。结果 30例B细胞性淋巴瘤中检测出Ig克隆性重排,包括IGH(A+B)克隆性重排23例,IGK克隆性重排23例,IGL克隆性重排5例,IGH(A+B)+IGK克隆性重排30例,IGHA+IGK克隆性重排29例;在30例淋巴组织反应性增生中未检测到Ig克隆性重排。结论 Ig基因重排是诊断B细胞性淋巴瘤的有用工具。     

白血病骨髓细胞中p53蛋白的表达及其意义

采用人类特异的p53单克隆抗体pAB1801,用ABC免疫组化法即生物素-抗生物素法对36例白血病骨髓细胞进行了免疫组化检测,结果突变p53蛋白表达阳性率为55.56％。p53突变与白血病的类型有重要关系:在急性粒细胞白血病中p53有较高表达,在急性淋巴细胞白血病中p53表达较低,在慢性粒细胞白血病的慢性期突变p53的表达很低,而急变期可出现类似急性粒细胞白血病的突变p53基因表达。研究结果提示p53蛋白表达有可能作为慢性粒细胞白血病急变期的早期诊断指标之一。     

抗DESMOPLAKIN I单克隆抗体的制备

作者从水牛鼻表皮中分离桥粒,提取桥粒中的Desmoplakin I(DPI)。用DPI作免疫原,免疫BALB/C小鼠,建立了一株分泌抗DPI单抗的细胞AD-1。免疫组化染色证实,该单抗与上皮组织呈阳性反应,与非上皮性组织呈阴性反应。提示该单抗可作为区分上皮性肿瘤与非上皮性肿瘤的免疫组化探针。     

乳腺增生病p53基因第5外显子突变及其蛋白表达

目的：探讨p53基因在乳腺癌发生早期的作用。方法：用免疫组化方法检测36例乳腺单纯性增生、31例不典型增生、14例原位癌和16例浸润癌中p53蛋白的表达，用PCR－SSCP检测了上述组织中p53基因第5外显子突变。结果：p53蛋白在单纯性增生、不典型增生、导管内癌、浸润癌中的表达率分别为0、22.6%(7/31)、42.8%(6/14)、50％（8／16），PCR－SSCP在各组中均未检测到该基因第5外显子突变。结论：乳腺癌发生早期阶段有p53基因的参与，但与第5外显子突变无明显关系。     

不同时程吗啡依赖大鼠依赖相关脑区的病理组织学观察

目的:观察不同时程吗啡依赖大鼠脑内依赖相关脑区的病理组织学变化.方法:背部皮下递增注射吗啡建立吗啡依赖大鼠模型,应用光镜和透射电镜对吗啡依赖鼠依赖相关脑区兰斑核、中脑导水管周围灰质、黑质、豆状核、杏仁核、海马进行观察,并与空白对照组进行比较.结果:吗啡依赖组大鼠六个依赖相关脑区神经细胞固缩或肿胀,神经纤维肿胀,线粒体肿胀、畸形,内质网扩张,多聚核糖体解聚,轴突、树突数量增多;胶质细胞、脑膜下淋巴细胞增多,随依赖时间的延长而更加显著,并可见胶质结节形成.结论:随着依赖时间的延长,依赖相关脑区病理组织学损害更加明显;胶质细胞与吗啡依赖存在有一定的关系.