问号赖型钩端螺旋体重组质粒pDL121及其表达产物的初步研究

目的:探讨问号赖型钩端螺旋体重组质粒pDL121外源基因及其表达产物23 kDa蛋白的特点。方法:用6种内切酶对pDL121行酶谱分析,用Digoxin标记的pDL121外源基因片段作探针对不同种属的钩体进行杂交,用SDS-PAGE制备23 kDa蛋白,Western blot鉴定其免疫原性。结果:pDL121外源基因没有6种内切酶的酶切位点,重组探针与致病性钩体(serovar lai strain 017,serovar hebdomadis strain56610,serovar pomona strain 56608)有杂交信号,与非致病性钩体(serovar patoc strain Patoc I,serovar illini strain 3055)无杂交信号,亦不识别大肠杆菌。23 kDa兔抗血清可识别pDL121体外表达的23 kDa蛋白带和赖型钩体017株超声抗原成份;其抗体滴度为1/12800;用pDL121细菌裂解液主动免疫豚鼠,可使豚鼠抵抗强毒力株钩体攻击。结论:pDL121外源基因可能是赖型钩体的一个新基因;该重组探针能鉴别致病性钩体和非致病性钩体;23 kDa抗原有良好的免疫原性,可能是赖型钩体017株的保护性抗原。     

兔骨髓间充质干细胞诱导分化为软骨组织的实验研究

目的：探索兔骨髓间充质干细胞向软骨组织转化的条件,为组织工程寻找新的工程化软骨。方法：用密度梯度离心法和贴壁法分离纯化骨髓问充质干细胞．并传代扩增后．用离心三维培养法在成软骨诱导剂下进行诱导培养,并分别在诱导培养第7、14、21天取出标本并进行组织切片,对标本行免疫组织化学、原位杂交柃测。结果：骨髓间充质干细胞经7、1l、21d的离心三维诱导培养后．培养管出现软骨外观组织块,纠织学切片可见软骨陷窝,进行Ⅱ型胶原的免疫组织化学、原位杂交检测均为阳性。结论：兔骨髓间充质干细胞在软骨诱导剂和离心管培养条件下可成功生成软骨组织。     

钩体内鞭毛蛋白基因重组质粒的构建、表达和免疫保护性研究

对钩端螺旋体病的有效预防亟需广谱、高效、安全、价廉的疫苗。为了获得重组表达的钩体内鞭毛亚单位蛋白抗原,以探讨制备新疫苗的途径,我们设计一对引物（Ｐ１＝５’－ＧＣＣＧＴＣＧＡＣＡＴＧＡＴＴＡＴＣＡＡＴ－３’,Ｐ２＝５’－ＧＧＣＴＡＧＣＴＡＴＴＡＧＡＴＡＴＧＣＴＧＣＡＧ－３’）,以赖型０１７株钩体ＤＮＡ为模板,利用ＰＣＲ扩增其编码基因完整的开放阅读框架,扩增产物经ＳａｌＩ、ＣｌａＩ双酶切消化后定向克隆于ｐＴ７－７载体上,构建原核表达重组质粒ｐＬＦ２。将该质粒转化入大肠杆菌ＪＭ１０９（ＤＥ３）中,经Ｉ…     

中国钩端螺旋体强毒株017膜蛋白基因的质粒载体构建及表达

目的构建表达我国钩体强毒赖型０１７株外膜蛋白的重组质粒。方法用ＰＣＲ方法扩增并回收０１７株钩体外膜蛋白基因片段ＯｍｐＬ１,将其与质粒ｐＢＫ－ＣＭＶ重组,通过菌落颜色和酶谱分析筛选出重组质粒。然后从该重组质粒切下ＯｍｐＬ１基因片段,重新克隆至质粒ｐＢＶ２２０中,酶谱分析和ＤＮＡ杂交鉴定出正向重组质粒。将含有正向重组质粒的宿主菌诱导表达生长后,提取全菌总蛋白进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析。结果筛选出４个与ｐＢＶ２２０正向重组的质粒,其中一株带重组质粒ｐＢＬＭ１的菌株表达了一相对分子质量为３３．５×１０３的新蛋白。结论重组质粒ｐＢＬＭ１的构建和表达成功说明扩增得的ＯｍｐＬ１基因具有完整的阅读框架,并使简便获得大量天然的０１７株钩体ＯｍｐＬ１蛋白成为可能,为新型钩体疫苗的研究奠定了基础     

中国延吉市和南朝鲜江华岛朝鲜族精神障碍终生患病率的比较研究

本文采用DIS-Ⅲ朝鲜文版诊断性面谈工具,按着美国流行学集合区域研究(ECA)方法在中国吉林省延吉市和南朝鲜江华岛以随机整群方法对朝鲜族分别进行了精神科流行学调查。延吉市样本为1532名,江华岛为1450名。精神障碍的终生患病率如下: (1) 居民终生患病率中频度最高的前三位是在江华岛,酒使用障碍(26.77％)、病理性赌博(6.28％)、焦虑症(5.95％);在中国,酒使用障碍(18.46％)、焦虑症(5.71％)、恐怖症(4.57％)。 (2) 两个地区的酒使用障碍皆为男性高于女性,男女两性之比:江华岛,49.4％比2.9％,延吉市,36.89％比0.12％。两个地区焦虑症和抑郁症患病率皆为女性高于男性,延吉市女性恐怖症高于男性。 (3) 患病率高峰:两个地区的焦虑症、抑郁性神经症患病率高峰见于高年龄组,在江华岛抑郁症、强迫症高峰见于低年龄组,精神发育迟滞高峰见于高年龄组;在延吉市病理性赌博高峰见于低年龄组,洒使用障碍、强迫症高峰见于高年龄组。 (4) 两个地区既婚者患病率高于未婚者。 (5) 两个地区高学历组的酒使用障碍患病率高,低学历组焦虑症患病率高;在江华岛抑郁性神经症和精神发育迟滞的患病率高峰见于低学历组。 (6) 除恐怖症、强迫症以外,其余精神障碍的患病率,在江华岛高于延吉市。 (7) 本文终身患病率与其他地区的ECA资料比较,除酒使用障碍以外,其它精神障碍均低于ECA     

WO-1对成骨细胞的生物学效应研究

目的 了解WO-1在体外环境中对人成骨细胞增殖、分化的影响，为骨组织工程学研究提供更多的方法。方法 采用培养人胚成骨细胞，以生长曲线和。HTdR法分析WO-1与成骨细胞生物学效应的量效关系，在最佳作用浓度下，以接种细胞克隆形成率，流式细胞技术分析细胞周期，透射电镜观察细胞形态学，了解WO-1对细胞活性和细胞增殖的影响；以ALP活性检测，^3H-Proline掺入实验，放射免疫法测骨钙素合成及I型胶原和骨钙素mRNA的表达等，从蛋白质和mRNA两个水平观察WO-1对细胞功能的影响。结果 WO—1在高浓度时对人胚成骨细胞增殖有抑制作用，低浓度时对人胚成骨细胞增殖有促进作用，最佳作用浓度8μg／ml，在0．25～8μg／ml浓度范围内存在量效关系。在8μg／ml WO-1作用下，实验组人胚成骨细胞接种克隆形成率增加，克隆体积增大；群体倍增时间明显缩短，电镜下见细胞器较对照组发达；而ALP活性、I型胶原合成、骨钙素合成等，在蛋白质及mRNA两个水平均有增加，且与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论 低浓度WO-1，可促进体外培养的人胚成骨细胞活性及增殖，加强细胞合成I型胶原、骨钙素等基质的功能，可用作成骨细胞增殖及分化的促进剂。     

脑源性神经营养因子基因转染培养肌母细胞的表达

目的了解含脑源性神经营养因子(BDNF)基因的表达质粒PSVCEP BDNF-CAT在培养肌母细胞中的表达情况及Lipofeot AMINE阳离子脂质体介导的转染效率.方法按每2μg表达质粒PSVCEP BDNF-CAT由20μl Lipofect AMINE包裹后转染至细胞浓度为2×108个/L的3.5 cm培养皿培养的肌母细胞中,连续观察细胞形态,48 h后用免疫细胞化学和免疫电镜的方法来检测其表达情况.结果培养肌母细胞在转染6 h吞噬脂质体最显著,转染48 h后,40%的肌母细胞胞质内有BDNF基因表达,免疫电镜结果证实表达在细胞质近胞膜处.结论含BDNF微基因的表达质粒PSVCEP BDNF-CAT可以在培养肌母细胞中表达,脂质体转染的方法简便、有效.     

版纳微型猪近交系外周血淋巴细胞cDNA文库的构建

[目的]构建版纳微型猪近交系(BMI)外周血淋巴细胞中cDNA文库.[方法]取新鲜BMI外周血,分离淋巴细胞,并进行体外诱导培养,提取总RNA,纯化mRNA.按照SMART cDNA library construction kit提供的方法构建BMI外周血淋巴细胞cDNA初始文库,进行滴度测定及文库扩增.[结果]初始文库和扩增文库的滴度分别为1.1×106 pfu/ml和2.5×109 pfu/ml,重组率分别为98.2%和89.1%,插入片段平均长度大于1200bp.[结论]成功地构建了BMI外周血淋巴细胞cDNA文库.     

端粒酶催化亚单位转染血管内皮细胞的实验研究

目的 探讨端粒酶催化亚单位转染血管内皮细胞后,血管内皮细胞增生活性的变化。方法 应用胶原酶消化法培养脐静脉血管内皮细胞(UE),ABC法检测内皮细胞CD34表达。脂质体介导内皮细胞转染,MTT法测定细胞代谢活性并测定细胞生长曲线。基于逆转录聚合酶链反应的端粒重复末端扩增分析法检测端粒酶活性表达。结果 培养的细胞贴壁后为单层呈铺路石状排列。细胞爬片CD34染色呈阳性,pBABE-HYGRO-hERT转染内皮细胞测定端粒酶活性的吸光度为0.889。MTT实验表明:在各个时间点转染阳性细胞(HC)的吸光值都高于脐静脉血管内皮细胞(UE)(P<0.05)。UE与HC的细胞生长曲线形态相似,8 d内HC数量增长了约4倍。在各个时间点:HC较UE细胞数多(P<0.05)。结论 pBABE-HYGRO-hTERT转染内皮细胞后,提高了内皮细胞端粒酶的活性和增殖能力。     

延吉市朝鲜族成人精神障碍终生患病率的流行病学调查

本文用DIS—Ⅲ朝文版以整群随机抽样法对吉林省延吉市朝鲜族成年居民1532人进行精神障碍终生患病率的流行病学调查。结果表明:在各种精神障碍中,以酒使用障碍居首位(18.46％),以下依次为:焦虑症5.71％,恐怖症4.57％、病理性赌博0.58％、精神分裂症0.57％,抑郁症0.41％。