逆转录病毒载体介导IL—2导入MCF—7细胞基因表达及对LAK细…

用逆转录病毒载体介导人ＩＬ－２基因导入人乳腺癌细胞系ＭＣＦ－７并获得表达。原位杂交结果证实，转染的ＭＣＦ－７细胞中有ＩＬ－２ｍＲＮＡ的表达，用ＩＬ－２依赖细胞系ＣＴＬＬ－２以ＭＴＴ比色法测定ＭＣＦ－７细胞培养上清液中有ＩＬ－２活性，其活性平均为１０ＩＵ／１０＾６细胞，转导后的ＭＣＦ－７细胞对ＬＡＫ细胞的杀伤敏感性降低。     

蜂肽对人肝癌细胞系细胞及人LAK细胞的影响

蜂肽对人肝癌细胞系细胞及人ＬＡＫ细胞的影响任蕴芳，董燕，李秀森，毛宁（北京军事医学科学院基础医学研究所北京１００８５０）为了探索蜂毒应用的前景，我们观察了蜜蜂毒的不同组分ＢＶ１（透明质酸酶），ＢＶ２（磷脂酶Ａ２）和ＢＶ５（Ｍｅｌｉｔｔｉｎ，蜂肽）对体...     

熊胆对HL-60细胞系的分化诱导作用

本文首次报道熊胆对人早幼粒白血病细胞系HL-60的分化诱导作用.HL-60细胞(1.6×10~5/ml)在含有熊胆(400μg/ml)的RPMI 1640培养液中37℃孵育5天左右,80%以上的细胞分化为具有单核-巨噬细胞特征的细胞.细胞增殖明显受到抑制.分化的细胞具有还原硝基蓝四唑和贴壁能力,显示吞噬乳胶颗粒的功能,并基本失去自发形成集落的能力.细胞的α-萘酚醋酸酯酶(α-NAE)和酸性磷酸酶(ACP)活性显著增加.     

间充质干细胞移植抑制小鼠急性移植物抗宿主病的实验研究(英文)

目的研究间充质干细胞的体内免疫调节活性。方法将C57/BL脾脏细胞输注入受亚致死量照射的BALB/c小鼠,建立急性移植物抗宿主病模型,受体小鼠或同时接受密质骨骨髓来源的间充质干细胞,流式细胞技术检测脾细胞表面表达的活性分子。结果模型经输注间充质干细胞后,鼠脾脏CD11b+细胞表达的CD86和CD69减少,提示抗原呈递细胞的成熟度下降。此外,作为一种效应T细胞早期活化和发育的标记,CD3+CD69+细胞/CD3+细胞的比值降低,导致脾内CD3+细胞的绝对和相对数目减少。但是,在同系脾细胞输注模型中,CD11b+细胞表面的CD69和MHCⅡ表达以及CD3+细胞表面的CD69不受影响。结论 MSCs可以分3个阶段抑制急性移植物抗宿主病,有望成为急性移植物抗宿主病的有效治疗手段,但仍需进行深入研究。     

TPA 对人早幼粒白血病细胞系 HL-60诱导分化的超微结构研究

对经 TPA 诱导分化的人早幼粒白血病细胞系 HL-60细胞在透射和扫描电镜下进行了观察。TPA 诱导后 HL-60细胞向巨噬样细胞分化,在诱导后1d 大部分细胞已在细胞形状表面构型和突起等方面出现了变化。细胞核、细胞膜及线粒体等细胞器均有改变。TPA 的亲脂性与细胞膜相结合有可能改变细胞受体的构型。推测线粒体等的明显变化将导致细胞的能量代谢、蛋白质合成活动的障碍,而且可能通过抑制肿瘤细胞的能量代谢和蛋白质合成系统促使白血病细胞发生退变和死亡。     

维生素A酸诱导分化的人早幼粒白血病细胞系HL-60的呼吸爆发功能

借助于自旋捕集剂DMPO,用电子自旋共振波谱仪直接定量检测了经维生素A酸(RA)诱导的人早幼粒白血病细胞HL—60受12—O—十四烷酰—佛波醇13—醋酸酯(TPA)刺激引起氧消耗爆发性增加(呼吸爆发)时主要产生的活性氧—羟基自由基(·OH).诱导分化的细胞产生·OH的量随刺激剂TPA在反应体系中量的增加(50～400 ng)而增高,并和RA诱导时间相关,在诱导d3达峰值,和硝基蓝四氮唑(NBT)还原反应及细胞生长曲线的时间过程一致.同时用自旋探针CTPO和TEMPOL及加宽剂Crox现察到RA诱导分化的HL—60细胞呼吸爆发过程中消耗细胞外介质中的氧.同样实验条件下,未经诱导的HL—60细胞不具有呼吸爆发功能,而人多形核白细胞(PMN)呼吸爆发时也消耗细胞外介质中的氧,检测到的活性氧自由基主要为超氧化物阴离子(O_2)。     

逆转录病毒介导IL-2基因转移对K562细胞增殖周期的影响

应用逆转录病毒载体将IL-2基因导入人红白血病细胞系K562细胞中。转导18天后,细胞DNA周期分析发现空载体转导的细胞K562/neo及含IL-2基因载体转导的细胞k562/IL-2的G0/G1期比例降低,而G2 M期增高。转导30天后K562/neo DNA周期分布恢复至转导前水平,而K562/IL-2细胞G0/G1期比例仍低于未转导细胞,G2 M期仍高于未转导细胞。MTT法检测细胞增殖活性观察到K562/IL-2从培养第4天起增殖活性明显落后于未转导细胞,核分裂指数亦低于水转导细胞。光学显微镜观察见K562/IL-2细胞中出现较多巨大细胞及多核巨细胞,细胞核数目可多达20余个,推测多核巨细胞的形成可能与细胞核反复分裂而胞质不能分裂有关。进一步形态计量学分析证实IL-2基因修饰的K562细胞体积增大,巨大细胞出现率显著高于未转导的K562细胞。结果提示K562/IL-2细胞体积增大与G2 M期细胞比例增高有关,推测IL-2基因修饰可能导致K562细胞周期滞留于G2期。     

532名大学生心理健康水平与成就动机考察

目的：考察大学生的心理健康水平与成就动机及其相互关系。方法：运用心理卫生自评量表(SCL-90)及学业成就动机量表对532名学生进行了测查。结果：发现17．29％的被调查学生有一定程度的心理问题；被调查学生在自我取向成就动机上得分非常显著地高于社会取向上的平均得分；被试的SCL-90总分与社会取向成就动机得分呈非常显著的正相关，学业成就低的学生的SCL-90总分与自我取向成就动机得分呈显著的负相关。结论：自我取向成就动机可能有利于维护心理健康。     

阻断CD40/CD40L相互作用延长移植物抗宿主病小鼠存活时间

目的：克隆表达人CD40-Ig融合蛋白，并在小鼠移植物抗宿主病（GVHD）模型中研究利用其阻断CD40/CD40L相互作用的保护性效果。方法：利用RT-PCR技术自人Daudi细胞系中克隆CD40基因胞外区，并插入含有人IgG1Fc段基因的pIG1载体中，构建携带CD40-Fc融合基因的瞬时表达载体转染COS-7细胞，间接夹心ELISA法检测CD40-Ig融合蛋白的表达，再将CD4-Fc融合基因连接入pcDNA3.1的相应位点构建稳定表达载体转染CHO细胞，筛选分泌CD40-Ig融合蛋白的阳性重组CHO细胞并进行无血清大规模培养，收获培养上清利用ProteinA亲和层析法纯化融合蛋白。SDS-PAGE，Western blot和配基结合实验鉴定CD40-Ig的性质，将C57BL6/J（H-2^b)小鼠的脾细胞经尾静脉注射入亚致死剂量照射的BALB/c(H-2^d)小鼠体内建立急性GVHD模型。通过体内注射CD40-Ig融合蛋白评价其对急性GVHD小鼠的保护效果。结果：按上述方法分别构建了哺乳动物表达载体pIG/40Ig和p3.1/40Ig。ELISA和Western blot确定在COS-7和CHO细胞中表达了CO40-Ig融合蛋白，SDS-PAGE结果显示该蛋白具有通过二硫键结合的二聚体结构并以同源二聚体的形式存在，纯化的CD40-Ig可与CD40L结合，体内应用CD40-Ig融合蛋白治疗可延缓小鼠GVHD病情发展并显著延长小鼠的平均存活时间。结论：CD40/CD40L相互作用在GVHD的病理过程中可能扮演了十分重要的角色，提示人CD40-Ig融合蛋白在临床预防和治疗GVHD方面的巨大应用潜力。     

人CD40—Ig融合蛋白表达载体的构建及其在COS—7细胞的表达

ＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌ途径是除Ｂ７／ＣＤ２８途径之外的重要的共刺激信号转导途径,在Ｔ细胞活化过程中扮演着十分关键的角色。因而,该途径可能在同种移植排斥的诱导和效应阶段的不同时期发挥关键作用。本研究旨在获得人ＣＤ４０分子胞外区和人ＩｇＧ１Ｆｃ段的融合蛋白,以探索阻断ＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌ共刺激途径在免疫治疗中的潜在应用。首先,从人Ｂ淋巴瘤细胞系Ｄａｕｄｉ中提取细胞胞总ＲＮＡ,利用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增人Ｃ