两种从陈旧血中抽提基因组DNA方法的比较

目的 比较盐析法和磁珠法从陈旧血中抽提基因组DNA的效果和特点,以便常规用于骨髓库HLA基因分型.方法 使用TECAN全自动工作站为平台,分别用Gentra盐析法DNA抽提试剂盒和Promega磁珠法DNA抽提试剂,从48份陈旧全血样本中抽提基因组DNA,提取的基因组DNA均溶于100 μlTE中;然后用紫外分光光度计测定其产量和纯度,并用琼脂糖凝胶电泳法测定DNA样本的完整性.结果 从400 μl陈旧全血中提取基因组DNA,用盐析法获得的DNA含量为28.6±8.7 ng/μl,A260/A280值平均为1.63±0.209;用磁珠法获得的DNA含量为94.2±10.3 ng/μl,A260-A320/A280-A320值平均为1.821±0.102;琼脂糖电泳法检测表明两种方法提取的DNA的分子量均大于15 kb.结论 使用磁珠法从陈旧血中所获得的DNA的产量和纯度明显高于盐析法,适合于骨髓资料库陈旧血样本的常规HLA基因分型实验以及下游的分子生物学实验.     

HLA新等位基因A*3018的序列分析和确认

为了识别和确认中国汉族人群中的HLA新等位基因,使用PCR-SSP、FLOW-SSO以及PCR-SBT等HLA分型技术,发现样本A位点的杂合结果A*240201,300101在外显子2有3个位置与数据库不相符。用组特异性引物分别扩增A*24及A*30基因,对外显子2、3、4进行双向测序,发现1个与A*300101序列相近的新等位基因。分析该等位基因与A*300101序列的差异。用EB病毒感染外周血B淋巴细胞,建立该等位基因的无限增殖化B淋巴细胞系。结果表明:该基因与A*300101相比在外显子2有3个碱基的改变,碱基121A→C、123T→C导致密码子17AGT->CGC,17S(丝氨酸)→R(精氨酸);碱基126A→G导致密码子18GGA→GGG,18G(甘氨酸)→G(甘氨酸),该氨基酸是同义突变。成功建立了该等位基因的无限增殖化B淋巴细胞系,该基因序列已提交GenBank,编号为DQ872509。结论:该等位基因为新的HLA-A等位基因,已于2006年8月被世界卫生组织HLA因子命名委员会正式命名为HLA-A*3018(上报编号HWS10004039)。     

Flow-rSSO与PCR-SSP方法在骨髓库HLA基因分型中的应用比较

目的 比较流式反向序列特异性寡核苷酸探针方法(Flow-rSSO)与聚合酶链式反应-序列特异性引物方法(PCR-SSP)在骨髓库人类白细胞抗原(HLA)分型中的应用价值.方法 4769例中华骨髓库质控样本中,已采用PCR-SSP方法分型的3509例标本应用FLOW-rSSO方法复检,而1260例已采用FLOW-rSSO方法分型样本则应用PCR-SSP方法复检,结果不一致样本采用PCR-测序分型方法(SBT)进行确认.结果 PCR-SSP方法HLA分型错误率(6.84‰)明显高于Flow-rSSO方法(1.59‰),其中PCR-SSP方法中75%的错误结果是由于漏检造成;PCR-SSP方法的模棱两可分型结果比例(2.56%o)明显低于Flow-rSSO方法(16.67%o).结论 PCR-SSP方法和FLOW-rSSO方法均适合应用于中华骨髓库供者的HLA分型,但HLA分型实验室有必要同时建立两种HLA分型方法.     

6965名汉族骨髓供者HLA多态性分析

目的　分析中国汉族骨髓供者的人类白细胞抗原 (HLA)多态性 ,并寻找和鉴定新的HLA等位基因。方法　采用序列特异性引物聚合酶链反应、DNA测序技术以及分子克隆等以DNA为基础的HLA基因分型技术。结果　共鉴定 6 96 5人份无关汉族骨髓供者的HLA A、B、DRB1座位上的等位基因 ,其中 4 70 7人份为南方汉族个体 ,2 2 5 8人份为北方汉族个体。在受检群体中共检出 72种HLA特异性 ,包括过去很少在汉族人群中被检测到的HLA A2 5、A34、A74、B4 1、B4 2、B5 3、B73、B81等。HLA A、B、DRB1座位上尚未被检测出的空白基因频率分别小于 0 .2 0 % ,0 .2 5 %和 0 .70 %。发现 3个新等位基因 ,已被WHO命名为HLA A 0 2 5 3N ,HLA A 1114和HLA B 5 6 10。结论　在骨髓供者HLA分型中使用以DNA为基础的基因分型技术 ,可以得到精确可靠的基因频率以及发现新的等位基因。一些HLA基因在南北汉族人群中的分布有明显的差异 ,为了能最大限度地募集到带有不同HLA分型的骨髓供者 ,有必要在我国南北多个地区筛选骨髓供者     

上海市外科住院医师规范化培训10年实践与经验

目的总结上海市开展外科住院医师规范化培训10年的实践与经验,为今后进一步提高外科住院医师规培化培训质量提供理论依据。方法统计2010—2021年上海市32家外科住院医师规范化培训基地的基本情况、外科床位数、带教师资人数、研究生导师人数,招录及出站人数、性别、年龄、学历背景、培训年限,结业综合考合格率、申请课题及发表论文情况、就业情况等信息。结果上海市共有32家外科专业基地,以三级甲等综合性医院为主,目前累计招录了住培医师4597名,已结业3162名,绝大多数外科住培医师达到培训要求并通过考核结业。上海市外科住院医师规范化培训工作在建立健全制度建设,开展教学活动,推广信息化管理,师资培训与督导检查,临床科研培养等方面取得了满意的成效。同时现阶段工作中仍有不足之处,包括规范教学活动、加强医学人文及思政教育、落实外科培训细则、待遇保障等方面。结论外科住院医师规范化培训已成为培养高水平外科医学人才的重要途径,后续住院医师规范化培训重点应进一步加强各外科基地培训效果的同质化、标准化、规范化,注重内涵建设和质量建设。     

红花注射液对冠心病患者甲襞微循环作用的观察分析

目的观察冠心痛患者甲襞微循环的变化,探讨红花注射液对冠心痛的治疗效果及微循环机制.方法冠心病患者50例,应用红花注射液进行治疗;健康体验者30例作为对照组.采用微循环显微镜,于治疗前后常规检查左手第四指甲襞第一排管袢,按田牛加权积分法对16项指标综合定量分析,判断疗效和甲襞微循环的变化.结果冠心病组治疗前均出现甲襞微循环障碍,表现为轻度或中度异常.治疗后甲襞微循环障碍明显改善,由治疗前的中度异常恢复到大致正常,总积分值由治疗前的(3.55±0.89)降为(1.59±0.73),P＜0.01.结论红花注射液对冠心病具有明显的疗效,其治疗机制与改善微循环障碍有关.     

降浊止呕颗粒对慢性肾衰竭胃肠机能调节的临床观察

慢性肾衰竭的患者往往表现为恶心呕吐、食少纳呆、倦怠乏力等胃肠机能失调的症状,轻者恶心欲呕,重者食入即吐,药入即吐.不仅增加患者的痛苦,还影响饮食的摄入,导致体内氨基酸代谢的失衡,增加氮质的潴留、水电解质紊乱和营养不良,而且又为治疗疾病的口服给药带来困难.我科采用本院生产降浊止呕颗粒治疗40例慢性肾衰竭(氮质血症期、肾衰竭期)的患者,取得了满意疗效,尤其是恶心、呕吐症状得到了很好的控制,且BUN、Cr也有所改善,现报告如下.     

云南籍葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症基因突变研究

目的研究云南籍葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）基因突变型特点，探讨检测G6PD缺乏症基因突变型的有效方法．方法应用硝基四氮蓝（NBT）纸片法进行G6PD缺乏症定性筛查，等位基因特异抗突变系统（ARMS），聚合酶链反应-单链构象多态性分析（PCR—SSCP），变性梯度凝胶电泳（DGGE）和DNA测序分析46例云南籍G6PD缺乏症患者的G6PD基因突变类型．结果46例样本经PCR—ARMS法发现nt-1388G→A18例（39．13％），nt-1376G→T2例（4．30％）；经PCR—SSCP法发现有22例样本有电泳迁移率异常，其DNA测序结果与PCR—ARMS法的结果吻合，并发现2例nt-1311c→T；经PCR—DGGE法分析G6PDexon12发现有30例样本发现异常泳动条带，DNA测序证实26例（56．52％）为nt-1388G→A，4例（8．7％）nt—1376G→T．而PCR—DGGE法分析G6PDexon2未发现有异常泳动条带的样本．结论（1）nt—1388G→A、nt—1376G→T是云南省主要的基因突变型也是中国人中最常见的两种突变型，揭示中华民族有着共同的起源；（2）在检测突变的PCR—ARMS法、PCR—SSCP法和PCR—DGGE法三种方法中，以PCR—DGGE法结合DNA测序，阳性检出率高，简便、快捷、灵敏、结果准确可靠．     

新时期法医病理学专业双语教学实践与展望

双语教学在高等医学教育评估工作中具有重要的地位．从法医病理学专业双语教学工作的实际出发，对双语教学在高等医学教育中的重要意义、教学过程中存在的问题和解决的方法等方面的问题进行探讨，以期提高认识、改进方法，达到提高双语教学质量和提升双语教学水平的目的．     

法医病理鉴定中的医学伦理学问题探讨

法医学属于医学和法学的交叉性学科,它是一门与社会科学密切相关的自然科学.在现有的法医学检验与司法鉴定过程中,涉及医学伦理学问题最多的还是法医病理学尸体检验与司法鉴定工作.因此,法医病理学司法鉴定工作是与人文社会环境紧密联系的社会学工作.结合具体的司法鉴定实际案例,就司法鉴定纠纷产生的常见的原因以及如何最大程度地预防和减少法医病理学司法鉴定纠纷问题作一阐述.