SPA菌体协同ELISA及其在检测血清抗HCV·IgM中的初步应用

采用HCV_1合成抗原多肽,SPA 菌体及酶标记抗人IgM 等建立血清抗HCV.IgM 检测SPA菌体协同ELISA(SPA-ELISA)。以多重替代试验、阻断试验及其2-巯基乙醇破坏试验证实其方法的特异性.将其用于一组临床标本的检测,并对该法检测血清抗HCV-IgM 的优点进行了探讨。     

全血与血液制品中HCV RNA检测及其基因分型的初步研究

对一组临床应用的全血（配血用标本）、血液制剂与丙种球蛋白制剂进行检测。血浆制剂抗ＨＣＶ阳性率显著高于全血（３２．６４％与１１．６８％、Ｐ＜０．０１）。三组标本中抗ＨＣＶ阳性者ＨＣＶ ＲＮＡ检出率基本相似。但丙球制剂组ＨＣＶ ＲＮＡ阳性标本在ＰＣＲ中的反应强度显著低于前两者。对部份标本作ＨＣＶ基因亚型检测，三组总体ＨＣＶ亚型表达频率为，原型：２．９４％；Ｋ１：４７．０６％；Ｋ２ａ：３２．３５％；Ｋ２     

用免疫转印技术检测流行性出血热病人特异性抗体的探讨

采用免疫转印技术检测了147份临床诊断为EHF病人血清中的特异性IgG抗体,结果133份血清可检出针对分子量在68和66kd左右两种病毒多肽的抗体,检出率为90.4％,略高于免疫荧光试验(88.4％),两种抗特异性多肽抗体的几何平均滴度分别为荧光法的4倍和2.1倍。本法具有特异性强、敏感性高和重复性较好等特点,并能检出针对不同抗原亚基成份的抗体,可作为EHF特异性诊断的方法之一。     

流行性出血热病毒抗原及其免疫复合物在发病机理中的作用

流行性出血热(EHF)是一种严重危害我国劳动人民身体健康的急性传染病,但至今其发病机理尚未完全阐明。同济医科大学附属同济医院临床免疫研究室自1986～1992年围绕EHF病毒抗原组份     

抗HRP多种系性PAP复合物制备与鉴定的进一步研究

为进一步克服PAP 复合物在应用中的种系限制,我室根据其分子结构特点研制出一种新的多种系性PAP 复合物、现报道如下。材料与方法辣根过氧化物酶(HRP)为中国科学院上海生化研究所生产、羊抗HRP、兔抗HRP、鼠抗HRP 单克     

用ELISA法检测乙肝患者血清抗—HRC/IgA

最近,一些作者报道在乙肝发病过程中血清IgA型抗—HBC(抗—HBC/IgA)与肝脏的损伤程度及乙肝病毒的复制有密切关系,并对急性肝炎与暴发性肝炎的诊断具有较高参考价值。我室在采用捕获法进行抗—HBC/IgM 检测的基础上建立了检测血清抗—HBC/IgA 的ELISA 法。现报道如下.     

人宫颈癌基因反义核酸抑制肝癌细胞生长作用的实验研究

目的探讨针对人宫颈癌基因(HCCR)反义核苷酸影响肝癌细胞增殖、凋亡的作用。方法构建pcD-NA3.1-HCCR反义真核表达质粒,转染HepG2细胞,实时定量PCR检测HCCR mRNA表达水平,Western blot检测其蛋白表达水平,流式细胞仪观察HepG2细胞凋亡和细胞周期的变化,MTT法检测细胞的增殖活性。结果HCCR反义核酸可有效抑制HepG2细胞HCCR的表达,与转染前相比,转染后24小时HCCR mRNA水平下降到16%,其蛋白表达水平在24小时也明显降低。对细胞的增殖与凋亡活性检测显示:转染HCCR反义质粒后,HepG2细胞增殖受到抑制,转染后24小时抑制率为47.62%(P<0.05),细胞凋亡率为14.34%±0.91%,较对照组明显增多(t=21.799,P<0.05),细胞分裂多停止在G0G1期。结论HCCR反义核酸可以抑制HepG2细胞中HCCR的表达,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,使细胞停滞于G1期。HCCR反义核酸用于肝癌细胞的基因治疗具有一定的潜在意义。     

鼠IgG定量ELISA实验参比品的制备及其应用

目的 制备一组用于小鼠IgG定量ELISA检测的实验参比品。方法 将三株杂交瘤细胞制备的小鼠腹水等体积混合,以葡萄球菌A蛋白（SPA）亲和层析纯化IgG,凯氏定氮法测定IgG含量,SDS-聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）电泳作纯度鉴定并据此校正其IgG浓度,以特定保存液将其稀释成既定浓度系列,根据其在ELISA中的反应特征,制备浓度（自然对数）-A450值标准曲线,并将其用于对一组杂交瘤细胞培养上清中鼠单克隆抗体的IgG定量测定。结果提纯的鼠IgG经鉴定纯度达97．1％,且反应特性良好,其IgG含量与ELISA检测信号间有高度的相关性（r=0．990）。不同浓度的稀释系列经8次反复冻融,检测信号无显著变化,变异系数（CV）为1．87％～6．47％。将标准曲线计算所得浓度对设定浓度做回收实验分析,回收率89．1％～108．3％。并用其测得一组杂交瘤细胞培养上清的鼠IgG含量为8．0～51．5mg／L。结论 鉴定结果显示制备物定量准确,浓度范围适中,稳定性好,对于早期杂交瘤细胞分泌能力以及抗体稳定性的评价、单抗制剂的鉴定具有一定的应用价值。     

肝细胞癌几种相关性标志的免疫组织化学研究

本文用PAP法定位研究了22例肝细胞癌(HCC)和18例其它肝病肝组织内乙肝病毒抗原(HBAg)、甲种胎儿蛋白(AFP)、α_1-抗胰蛋白酶(A_1AT)、α_1-酸性糖蛋白(A_1AG)和转铁蛋白(TF)。结果表明,AFP和A_1AT作为HCC的相关性标志有助于HCC的临床诊断,但不能鉴别HBAg阳性和阴性的HCC,同时检测AFP和A_1AT有助于提高HCC的诊断率。A_1AG和TF的特异性较差,不宜作为HCC的临床诊断指标。     

丙型肝炎病毒感染的分子和临床流行病学研究

1.在国内较早地建立了巢式多聚酶链式反应(nested—PCR)用于检测HCV RNA,并采用特异性探针和特异性引物两种方法对我国的HCV基因型别、构成特征及其流行病学意义进行了研究、发现我国HCV基因型构成特征是多种基因型共存,但以K1/1b和K2a/2a 型为主,混合型感染亦较多见。急性肝炎、慢活肝、重症肝炎、肝硬化、肝细胞肝癌和肾衰透析者HCV其因型以K1型为主,而慢迁肝者以K2型较多见。提示不同基因型别与疾病的发展和结局有一定关系。