常规尿检整合分类作为肾病理损伤的标志物

目的：探讨常规尿检整合分类是否能预测肾病理损伤。方法：采集北京大学第一医院肾内科住院患者肾活检当日晨尿标本146份,行位相差显微镜检查尿沉渣,查尿蛋白定量（g/24 h）,进行尿检整合分类。尿沉渣谱整合蛋白定量后分3类,Ⅰ类：蛋白尿,多细胞及管型;Ⅱ类：蛋白尿,少细胞,透明/细颗粒管型;Ⅲ类：少量蛋白,肾小管上皮细胞和/或有核细胞管型。对肾活检标本常规处理,行光镜（HE、PASM、Masson染色）、免疫荧光和电镜检查做出病理诊断。将常规尿检资料整合与分类的关系及分类与肾病理诊断的符合率进行统计学处理,采用kappa检验,配对χ²检验,P<0.05为差异有统计学意义。结果：（1）肾活检组织病理诊断：肾小球增殖性病变95例、非增殖性病变46例、小管间质病5例。（2）常规尿检资料整合对分类的影响：单凭尿沉渣镜检,146例中有67例（46%）归于Ⅰ 类,79例（54%）不能确定;再整合尿蛋白定量可从79例中再确认75例,4例仍不能确定。（3）尿检分类与肾组织病理诊断符合率：肾小球疾病符合率为77.7%。结论：常规尿液检查整合分类可在一定程度上判断肾病理损伤。     

高倍油镜与相差显微镜分辨尿红细胞形态的比较

血尿是常见的临床症状,在健康人群调查中呈现蛋白尿和镜下血尿者约为2％,肾小球肾炎病人呈现血尿而不伴红细胞管型或蛋白尿者可占21％,因此,血尿来源的研究是人们关心的问题。近年的研究工作表明尿中红细胞形态可反映血尿的来源。我室以相差显微镜清晰观察到尿中红细胞形态,经肾穿刺病理检查等手段证实,其区分血尿来源的可靠性达92％。我室又应用扫描电镜观察红细胞表面更微     

肾炎临床分型的探讨——附肾病与肾病型肾炎81例临床分析

按1977年北戴河肾脏病会议肾炎分型方案,将我院四年来住院患者81例分为肾病34例,肾病型肾炎47例(以下称肾炎组),分析对比了两组的临床表现,生化检查,肾功能测定,免疫学检查及治疗效果。发现在浮肿、蛋白尿,低白蛋白血症及高胆固醇血症上,两组几无区别。高血压与肾功能减退:肾病组较少,经治疗后全部恢复正常;肾炎组较多,且程度较重,经治疗后多数不能恢复正常。肾炎组的尿纤维蛋白降解产物(+)与非选择性蛋白尿较多。肾病组对激素与细胞毒类药物敏感,缓解率是肾炎组的9.4倍。肾病组发病年龄较肾炎组轻。 目前,普遍开展肾穿刺来明确诊断还有困难,因此,肾炎的临床分型尚有其实用价值,在估价患者对治疗反应与判断予后有一定的帮助。     

低氧诱导肌成纤维细胞生成并通过ERK1/2途径促进Ⅰ型胶原的表达

目的：探讨低氧能否激活成纤维细胞转化为肌成纤维细胞,以及低氧环境对肾皮质肌成纤维细胞表达Ⅰ型胶原（Col-Ⅰ）的影响及其可能的信号通路。方法：（1）采用正常大鼠肾成纤维细胞系（NRK-49F），应用Western blotting方法检测低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达;比较低氧和正常氧条件下α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白水平。（2）原代培养正常大鼠肾皮质肌成纤维细胞，Western blotting方法检测低氧和正常氧条件下，HIF-1α和Ⅰ型胶原蛋白水平以及ERK1/2的活化及其特异阻断剂 PD98059的阻断效应；RT-PCR方法检测Ⅰ型胶原mRNA表达水平；细胞免疫化学法检测HIF-1α胞内表达部位的变化；明胶酶谱法检测细胞上清中基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和基质金属蛋白酶-9（MMP -9）的活性。结果：（1）低氧刺激6 h，NRK-49F细胞和肌成纤维细胞胞内和核内均有HIF-1α蛋白表达，核内更明显。（2）低氧培养12 h,NRK-49F细胞表达α-SMA蛋白明显增高，是正常氧组的187%±32%（P<0.05），验证了低氧可引起成纤维细胞表型转化。（3）低氧刺激原代培养的正常大鼠肾皮质肌成纤维细胞6 h、12 h上清中Ⅰ型胶原蛋白水平增加，分别为正常氧组的171%±27%（P<0.05）和256%±61% （P<0.05）；低氧刺激4 h、6 h，Ⅰ型胶原mRNA表达增加，为正常氧组的189%±28%（P<0.05）和221%±44%（P<0.05）。（4）低氧刺激肌成纤维细胞6 h、12 h、24 h，培养上清液中MMP-9、MMP-2活性无明显变化。（5）低氧刺激肌成纤维细胞15 min 即可使ERK1/2活化，阻断实验显示，PD98059可以使低氧12 h引起Ⅰ型胶原增加（低氧刺激组为正常氧对照组的273%±51%，P<0.05)显著减少（PD98059 +低氧组为正常氧组的108%±19%，P>0.05)。结论： 低氧促肾纤维化可能与其诱导肾成纤维细胞转化为肌成纤维细胞并经ERK1/2途径增加Ⅰ型胶原蛋白的表达有关。     

急性肾功能衰竭及其常见病因的诊断与治疗

急性肾功能衰竭(ARF)是常见内科急症,涉及范围广。80年代初期,国内在此领域的诊断和治疗方面尚存在很多困难和问题,致使一些可逆性肾损伤丧失治疗良机,成为不治之症,甚至死亡。此外,对国外文献及专著中介绍的引起ARF的多种基础疾病,除肾小管坏死外,人们均缺乏感性认识。本课题在王海燕教授领导下,经14年努力,于国内领先对ARF进行了较全面的临床及部分实验     

高糖对足细胞表达结缔组织生长因子及其受体蛋白的调节

目的:研究长期高糖对体外培养的足细胞表达结缔组织生长因子(CTGF)及其受体--低密度脂蛋白受体相关蛋白(LRP)的影响以及可能涉及的信号途径.方法:以体外培养的小鼠肾小球足细胞为研究对象,应用Western印迹分析技术,检测高糖刺激不同时间对足细胞表达CTGF蛋白的影响.观察高糖对丝裂素激活蛋白激酶(MAPKS)信号途径活化的影响以及MAPKS信号途径在高糖调节足细胞表达CTGF中的作用,同时检测高糖对足细胞CTGF的受体LRP蛋白的影响.结果:体外培养足细胞表达基础水平的CTGF蛋白,高糖刺激2天后足细胞表达CTGF水平开始升高,第4天达高峰,第6天下降,第8天降至对照组水平.正常糖和甘露醇组CTGF蛋白没有明显变化.高糖可以激活足细胞外信号调节激酶(ERK1/2),于刺激30 min时ERK1/2即开始活化,6 h达高峰,持续至24h,48 h接近基础水平.正常糖和甘露醇在各个时间点均不活化ERK1/2.应用ERK1/2活化特异抑制剂PD98059可以消减高糖刺激CTGF表达增加的效应.在各个时间点,长期高糖环境对足细胞CTGF的受体LRP蛋白没有明显作用.结论:短期(2～4 d)高糖通过活化ERK1/2信号通路刺激足细胞CTGF的表达,高糖继续培养(6～8 d)对足细胞内的CTGF蛋白表达水平没有影响.长期高糖环境对足细胞上CTGF的受体LRP蛋白的表达无影响.     

低氧通过p38丝裂素激活蛋白激酶途径刺激人肾间质成纤维细胞表达结缔组织生长因子

目的:研究低氧条件下人肾间质成纤维细胞表达结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)及其可能的信号途径,从而探讨低氧导致肾间质纤维化的分子机制.方法:以人肾间质成纤维细胞TK173作为研究对象,应用Western blot技术,检测低氧标记蛋白分子,低氧诱导因子-lα(hypoxia induced factor-lα,HIF-1α)蛋白作为低氧标记物;比较低氧(1%O2,体积分数)和正常氧(21%O2,体积分数)条件下TK173细胞培养12,24,48 h后CTGF蛋白水平;低氧刺激TK173细胞30 min,1 h,6 h和12 h,运用抗磷酸化抗体检测丝裂素激活蛋白激酶(MAPKs)活化;在低氧刺激半小时前分别加入p38、细胞外信号调节激酶(ERK1/2)、c-Jun-N末端蛋白激酶(JNK)信号通路特异阻断剂SB203580,PD98059,SP600125,低氧培养24 h后检测细胞CTGF蛋白水平.用RT-PCR技术分析CTGF mRNA水平变化.结果:TK173细胞正常氧组仅有HIF-1α蛋白微弱表达,低氧组有高水平HIF-lα蛋白表达.在低氧条件下培养12 h后细胞CTGF蛋白增加,24 h时CTGF蛋白表达最强,是正常氧组的(2.1±0.1)倍,至48 h降至对正常氧组水平;同时低氧培养刺激CTGF mRNA表达,在1 h时开始增加,6 h时达高峰为正常氧组的(6.6±1.0)倍,24 h后恢复基础水平.低氧可以活化MAPKs,JNK在30 min达到高峰,ERK1/2、p8在刺激1 h时达高峰,6 h减弱,12 h减至基础水平;应用ERK1/2抑制剂PD98059和JNK抑制剂SP00125不能减弱低氧刺激CTGF蛋白表达增加的效应,但应用P38活化抑制剂SB203580可以明显减少低氧刺激的CTGF蛋白和mRNA的增加.结论:低氧可刺激人肾间质成纤维细胞表达CTGF,并且该作用依赖p38通路的活化.