适用于海藻酸钠-壳聚糖微囊化肝细胞RNA提取的破囊方法

目的验证不同破囊液裂解载肝细胞海藻酸钠一壳聚糖（AC）微囊获取高纯度RNA的可行性。方法破囊液A基本成分为0．1mol／L二水合柠檬酸三钠;破囊液B的基本成分为0．2mol／L碳酸氢钠和0．06mol／L二水合柠檬酸三钠。将载可逆性永生化人肝细胞（Hepli4）的AC微囊分别用破囊液A（A组,n=5）和破囊液B（B组,n=5）处理。破囊后,Trizol法提取总RNA,RT-PCR法检测肝脏特异性功能基因。结果A组细胞中可见微囊碎片残留．而B组细胞中基本观察不到微囊碎片。A组和B组RNA样品的A—A。差异无统计学意义（P〉0．05）,A260/A230差异有统计学意义（P〈0．05）。B组RNA获得率为（8．69±0．59）μg／10。细胞,A组为（2．39＋0．32）μg／10。,两组比较差异有统计学意义（t=21．09,P〈0．05）。以B组的RNA为模板,可检测到谷氨酰胺合成酶（GS）、尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶（UGTIAl）、白蛋白（ALB）等肝脏特异性功能基因。结论以碳酸氢钠-二水合柠檬酸三钠破囊液处理载肝细胞AC微囊,能避免微囊成分污染,获得高纯度RNA。该破囊液可应用于AC微囊化肝细胞的基因表达研究。     

非生物人工肝支持系统治疗肝功能衰竭的血清氨基酸谱变化

Objective To analyze the patterns of amino acid changes in liver failure patients treated with non-bioartificial liver support system (ALSS), and to explore the efficacy of ALSS in liver failure treatment. Methods A total of 146 liver failure patients treated with ALSS from June 2009 to August 2010 were recruited in this study. Paired blood samples were collected from every patient and serum amino acids and ammonia were tested by automatic amino acid analyzer. The changes of amino acids in patients with different prognoses, different types/phases of liver failure were evaluated.Measurement data were compared by paired t test. Results After ALSS treatment, liver failure patients experienced a significant decrease in serum glutamic acid and lysine [(395.62±200.24)μmol/Lvs (260. 05±169.56) μmol/L and (436. 73±326. 18)μmol/L vs (407. 12±292.01) μmol/L,respectively; t= 8. 611 and 2. 659, respectively; both P＜0.01)], while experienced greatly increases in threonine and branched-chain amino acids/aromatic amino acid ratio [( 1302. 90 ±1288.70) μmol/L vs (1406.70 ±1272. 34) μmol/L and 1. 23 ± 0. 53 vs 1. 36 ± 0.57, respectively; t = 2. 895 and 1. 061,respectively; both P＜0. 01)]. The changes of glutamic acid, tyrosine, arginine and methionine before and after ALSS treatment in patients with different prognoses, different types/phases of liver failure were all significantly different. Conclusions ALSS treatment could improve the serum amino acid disorder in liver failure patients. The amino acids in patients with different types/phases or different prognoses of liver failure change significantly after ALSS treatment.     

核苷(酸)类似物序贯干扰素治疗乙型肝炎病毒e抗原阳性慢性乙型肝炎患者的临床观察

目的 观察HBeAg阳性慢性乙型肝炎(CHB)患者在核苷(酸)类似物抗病毒治疗基础上序贯聚乙二醇干扰素α-2a(PEG IFNα-2a)治疗48周血清HBsAg的变化.方法 6例HBeAg阳性CHB患者中,3例采用核苷(酸)类似物序贯PEG IFNα-2a治疗48周,3例维持原核苷(酸)类似物治疗方案,每12周采用实时PCR定量检测HBV DNA,采用时间分辨免疫荧光分析法检测HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe及抗-HBc.结果 核苷(酸)类似物序贯PEG lFNα-2a治疗48周后,3例序贯治疗患者血清HBsAg均消失,而维持原核苷(酸)类似物治疗患者血清HBsAg效价为100～320 IU/mL.结论 对核苷(酸)类似物治疗产生较好应答反应且伴有血清HBsAg效价明显下降的HBeAg阳性CHB患者,在核苷(酸)类似物抗病毒治疗基础上序贯PEG IFNα-2a治疗48周能有效促进血清HBsAg下降,并出现血清HBsAg消失的现象.     

细菌性脑膜炎动物模型的脑脊液早期细菌动力学变化

目的 建立细菌性脑膜炎动物模型,了解细菌感染后48 h内脑脊液(CSF)细菌载量变化规律,为疾病的诊疗及预后判断提供参考依据.方法 以新西兰大白兔作为研究对象,通过小脑延髓池穿刺建立细菌性脑膜炎动物模型,观察不同菌量的大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌(金葡菌)建立模型时动物的死亡情况.明确CSF感染菌量与动物死亡率间的对应关系.选择合适的接种菌量,进行脑膜炎CSF细菌载量观察实验.将实验动物分为4组(每组12只):大肠埃希菌脑膜炎模型组,大肠埃希菌脑膜炎+头孢曲松治疗组、金葡菌脑膜炎模型组、金葡菌脑膜炎+万古霉素治疗组,在建立模型后0、12、24、36和48 h分别进行CSF细菌定量培养、CSF及外周血WBC计数,进而分析细菌性脑膜炎CSF细菌载量的变化规律,及其与动物早期死亡率、抗菌药物治疗、CSF的WBC计数间的关系.CSF细菌载量、WBC计数曲线的显著性检验采用协方差分析,相关性检验采用偏相关分析.结果 CSF感染菌量与动物死亡率间呈现S型曲线关系,CSF细菌载量在蛛网膜下腔接种细菌12～24 h达到高峰,而后逐步下降,有效的抗菌药物治疗可显著加快下降过程,大肠埃希菌脑膜炎模型组与大肠埃希菌脑膜炎+头孢曲松治疗组相比(F=27.10,P<0.01),金葡菌脑膜炎模型组与金葡菌脑膜炎+万古霉素治疗组相比(F＝5.97,P=0.016),差异均有统计学意义.大肠埃希菌脑膜炎模型组和金葡菌脑膜炎模型组中的CSF的WBC计数与CSF细菌载量之间存在正相关性(r＝0.89、0.84;P=0.046、0.049).结论 在细菌性脑膜炎的治疗中,应早期,足量地使用有效抗生素,以控制CSF细菌载量,降低死亡率.CSF的WBC计数可作为反映CSF细菌载量的指标,指导临床治疗.     

慢性乙型肝炎防治指南（2010年版）

为规范慢性乙型肝炎的预防、诊断和治疗,中华医学会肝病学分会和感染病学分会于2005年组织国内有关专家制定了《慢性乙型肝炎防治指南》[1]。近5年来,国内外有关慢性乙型肝炎的基础和临床研究取得很大进展,为此我们对该指南进行更新。     

肝衰竭临床治疗中的难点和热点

肝衰竭是临床比较常见的严重肝病症候群,是临床治疗中的难点和热点.肝衰竭常由病毒、细菌感染以及药物、酒精中毒等各种不同病因引起,在我国尤以乙型肝炎病毒(HBV)导致的重型肝炎肝衰竭最为常见.由于肝脏组织发生大块或亚大块坏死,肝衰竭病情危笃,进展迅速,预后极差,是导致我国乙型肝炎患者死亡的主要原因之一.2006年10月,中华医学会感染病分会肝衰竭与人工肝学组和肝病学分会重型肝病与人工肝学组制订了我国第一部《肝衰竭诊疗指南》,从定义,诱因、分类、诊断和治疗等方面对肝衰竭进行了系统而精要的阐述,既与国际接轨,又独具中国特色,诊断分型突出了实用性,进一步指导和规范了我国肝衰竭的临床诊疗.2007年,亚太肝脏研究协会(Asian Pacific Association for the Study of the Liver,APASL)推出了《(慢加急性肝衰竭共识》;2011年,美国肝病研究学会(American Association for the Study of Liver Diseases,AASLD)发布了《急性肝衰竭指南更新》.     

青霉素类的临床应用

青霉素对多数常见病原菌有抗菌作用,目前仍广泛应用,但由于许多病原菌都能产生β—内酰胺酶,因而临床价值已下降。在英国,90%金黄色葡萄球菌(下称金葡菌)菌株对青霉素耐药,35%大肠杆菌菌株对氨苄青霉素耐药。在所有抗生素中,青霉素的毒性可能最低。IgE介导的过敏反应,嗜中性白细胞减少,血小板减少、伪膜性肠炎是其严重的副     

人端粒酶逆转录酶诱导的猪肝细胞初步鉴定

目的观察应用四步灌流法分离后原代猪肝细胞的数量和活力,初步鉴定人端粒酶逆转录酶(hTERT)诱导的猪肝细胞的生物学特性。方法四步灌流法分离12只猪肝脏组织中的猪肝细胞,采用锥虫蓝拒染法测定其肝实质细胞数量和活力;将含hTERT真核表达的载体转染到原代猪肝细胞,经G418硫酸盐筛选,获得耐药性的猪肝细胞克隆并传代3代。观察原代猪肝细胞和hTERT诱导后的猪肝细胞的形态,检测两种猪肝细胞不同时期培养上清液中白蛋白、尿素氮的浓度。结果每只肝脏的肝细胞产量约为2.0×1010个,具有活力的肝细胞所占百分比为(95.5±3.2)%。原代猪肝细胞和hTERT诱导的猪肝细胞培养上清中分泌白蛋白和尿素氮在前3天无统计学差异(P>0.05),第4、5天差异有统计学意义(P<0.05)。结论四步灌流法分离获取的猪肝细胞产量高、功能活性好。hTERT诱导的猪肝细胞具有正常肝细胞的基本功能,可作为生物人工肝及细胞移植等的理想的细胞源。     

乘改革之风 扬时代之帆——写在《卫生经济研究》杂志创刊20周年之际

1979年的春天,作为中国改革开放的里程碑注定被写入史册;1984年的秋天,在改革开放大潮的涌动中,位居我国东南的华东地区,引领卫生改革之先,在全国率先成立了华东卫生经济研究协作会,作为协作会的刊物--<卫生经济研究>杂志也在钱塘江畔扬帆起航了.从此,<卫生经济研究>杂志像一只小帆舨,迎着"八月十八潮,天下壮观无"的钱江潮,从钱塘江驶向杭州湾,从杭州湾驶向浩瀚的东海,融入浩浩荡荡的改革大潮中.     

2018至2019年度全国血流感染细菌耐药监测报告

目的:通过研究血流感染的病原菌分布及对其耐药性监测,准确掌握我国细菌耐药状况。方法:收集全国血流感染细菌耐药监测联盟成员单位2018年1月至2019年12月所有按操作规程分离自血培养的感染病原菌,按美国临床和实验室标准化研究所推荐的琼脂稀释法或肉汤稀释法进行抗菌药物药敏性测定。采用WHONET5.6进行统计分析。结果:...