人CD81胞外区EC2基因的克隆和原核表达

CD８１是一种跨膜的非糖基化蛋白。在人类和黑猩猩中,CD８１胞外区EC２区氨基酸序列高度保守。CD８１可影响细胞的粘附、激活、增殖和分化,改变细胞形态及抑制合胞体形成等生物学功能〔１〕。近年研究发现,CD８１可能作为HCV的受体引导病毒进入细胞内〔２〕。进一步研究发现,CD８１胞外区EC２是CD８１与HCVE２相互作用的部位,是HCV感染的关键因素〔３〕。目前,CD８１的功能及作用机制尚有待进一步研究,我们采用分子生物学技术,构建了CD８１胞外区EC２原核表达载体,为今后进一步研究CD８１与HCV感染的关系奠定了基础…     

三种他克莫司测定试剂盒测定移植病人全血中他克莫司浓度的比较

目的:比较国产他克莫司测定试剂盒(微粒子酶联免疫法检测法,MEIA)、进口他克莫司测定试剂盒(微粒子酶联免疫法检测法,MEIA)以及进口他克莫司测定试剂盒(化学发光微粒子免疫法,CMIA)在检测移植病人全血中他克莫司血药浓度时的异同与相关性。方法:用国产和进口他克莫司测定试剂盒(微粒子酶联免疫法检测法,MEIA)分别测定147例移植后服用他克莫司的病人全血样品,用进口他克莫司测定试剂盒(化学发光微粒子免疫法,CMIA)测定其中49例样品,对检测结果进行统计学分析,考察三种试剂盒的等效性与相关性。结果:三种方法中任意两种方法的检测结果用配对t检验进行检测,均无显著差异,用Ex-cell进行相关性分析,其相关系数均大于0.9,相关性好。结论:三种试剂盒均可用于他克莫司的血药浓度检测,且相关性高。     

AMA-M2阳性的原发性胆汁性肝硬化患者生物化学指标特点分析

目的分析抗线粒体M2亚型抗体阳性（AMA-M2）的原发性胆汁性肝硬化（primary biliary cirrhosis,PBC）患者生物化学指标特点,为临床PBC诊治提供帮助。方法对本院2010年8月-2012年3月280例AMA-M2阳性的PBC患者分别检测血清蛋白、脂类、胆红素及酶类等16项血清生物化学指标。采用毛细电泳技术,分析患者6种血清蛋白变化情况。采用光电比色法和发色（吸光度）法分别检测患者WBC、RBC、HGB、PLT以及PT等临床血液学指标。采用魏氏法检测患者血沉变化。结果生化指标检测结果显示,血清蛋白及脂类以ALB、TC异常率最高,分别为52%、40%。超过50%的患者出现酶类及胆红素代谢结果异常,异常率由高到低分别为GGT（96%）、ALP（93%）、TBA（81%）、AST（73%）、DB（66%）、CHE（66%）、LAP（63%）、ALT（61%）、TB（54%）,其中以DB、GGT、TBA变化幅度最高[≥2倍正常值上限（ULN）],其次为ALP、TB、ALT、AST（1倍ULN）,LAP低于1倍ULN。患者血清蛋白电泳结果异常主要体现在γ球蛋白和白蛋白百分比,异常率分别为71%和57%,且前者出现低于1倍ULN升高。近半数患者出现临床血液学指标变化,异常率由高到低是：ESR、HGB、RBC、PT、PLT、WBC,其中以ESR的异常率最为突出84%,其余依次为HGB（49%）、RBC（46%）、PT（44%）、PLT（41%）、WBC（39%）,变化幅度以ESR最高（1倍ULN）,其次为RBC、HGB、PT（≤1倍ULN）。结论 PBC患者血清蛋白和脂类、酶类和胆红素代谢以及血清蛋白分布等多种生化指标变化特点,结合临床血液学特点,将为PBC的临床诊断提供重要帮助。     

庚型肝炎病毒(HGV RNA)基因的定量检测

目的 :建立庚型肝炎病毒基因 (HGVRNA)的定量检测方法。方法 :采用荧光转换原理 ,应用特异荧光物质标记的引物进行逆转录PCR(RT_PCR) ,检测 4 1例临床血清标本的HGVRNA。结果 :与巢式定性PCR结果比较 ,两者具有相关显著性。以定量实验为标准定性实验的阳性漏检率为 3.33% ,阴性漏检率为 18.1% ,两者相对符合率为 92 .6 8%。结论 :定量检测HGVRNA在定性的基础上提供了量的结果 ,而且具有特异性强、结果稳定、操作简便等特点     

HBsAg和抗HBs双阳性患者S基因新增N-糖基化突变的意义

目的 分析乙型肝炎病毒(HBV)HBsAg+抗HBs双阳性患者S基因主要亲水区(MHR)新增N-糖基化突变的特点,探讨HBsAg+抗HBs双阳性的发生机制和临床意义.方法 对284例HBsAg+抗HBs双阳性和314例HBsAg单阳性的慢性HBV感染者S基因进行测序分析.对1例携有MHR区双N-糖基化新型突变株的慢性乙肝患者样本进行随访收集和研究.构建双N-糖基化突变和对照前S/S基因重组质粒,转染HepG2细胞,分析突变对病毒复制力和抗原性的影响.结果 HBsAg+抗HBs双阳性患者MHR区新增N-糖基化突变的检出率为11.3％(32/284),显著高于HBsAg单阳性患者的2.9％(9/314)(P＜0.01).HBsAg+抗HBs双阳性组中,72例肝细胞癌(HCC)在N-糖基化突变阳性和阴性患者中所占比例分别为46.9％(15/32)和22.6％(57/252) (P＜0.01).从1例患者中检出的新型株突变形式为s116-118TST→NST+s 131-133TSM→NST,并联合sP120缺失+G145D突变,在3份随访样本中该突变株分别占98.0％、2.0％和2.5％,第2份样本中检出s130-132GTS→NSS单N-糖基化突变株,占17.6％,但无sP120缺失+G145D联合突变.与野生株相比,新型突变株复制力提高31％,但HBsAg定量降低99％.免疫荧光结果显示,双N-糖基化定点回复突变株可部分恢复HBsAg检出水平,提示除双N-糖基化突变外,sP120缺失+G145D联合突变对HBsAg抗原性减弱也有明显影响.结论 HBV S基因MHR区新增N-糖基化突变与HBsAg+抗HBs双阳性相关,两者同时出现可能是HCC发生的高风险因素;S基因MHR区新增双N-糖基化+sP120缺失+sG145D联合突变共同影响HBsAg的抗原性.     

乙型肝炎病毒E抗原肝细胞作用蛋白AK026018表达谱芯片的研究

目的 应用基因芯片技术,筛选能被乙型肝炎病毒E抗原（HBeAg）肝细胞作用蛋白AK026018反式调节的靶基因,初步研究该蛋白的生物学功能.方法 应用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术,从HepG2细胞中扩增编码AK026018蛋白的全基因,构建真核表达载体,转染肝母细胞瘤系HepG2,提取总mRNA,逆转录为cDNA,与转染空白表达载体pcDNA3.1的HepG2细胞进行DNA芯片分析并比较.结果 经限制性内切酶分析和DNA序列测定鉴定构建的重组表达载体正确.在8464个基因表达谱的筛选中,发现有122个基因有差异表达,其中78种基因表达水平显著下调,45种基因表达水平显著上调.结论 成功地应用DNA芯片技术筛选出HBeAg结合蛋白新基因AK026018的反式调节蛋白,证明该基因对于肝细胞基因表达谱有显著影响.     

乙肝患者外膜蛋白血清学检测及对于判定HBV DNA复制的意义

目的探讨HBV感染者血清中PreS1-Ag、PreS2．Ag、大蛋白（LP）的检测意义及其对判定HBV复制的意义。方法应用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测201例HBV感染血清的PreS1-Ag、PreS2-Ag、HBV-LP及HBVM，同时应用荧光定量PCR方法检测HBVDNA。结果PreS1-Ag、PreS2-Ag、LP、HBsAg阳性率差异有统计学意义，PreS2-Ag、LP检出阳性率均高于HBeAg；LP的检出阳性率与HBVDNA的检出阳性率相关性有统计学意义，且HBV DNA拷贝数的对数值与HBV-LP表达呈正相关。结论PreS1-Ag、PreS2-Ag、LP较准确的反映乙肝病毒的复制情况，是HBVM有益的必要补充；血清中HBV-LP的含量与HBVDNA的拷贝数具有较好的相关性。     

慢性硬膜下血肿微创治疗体会

目的探讨微创治疗慢性硬膜下血肿疗效.方法对19例慢性硬膜下血肿确诊病例采用YL-1型一次性颅内血肿粉碎穿刺针进行穿刺、抽吸、冲洗、引流治疗.结果颅内血肿微创穿刺清除术治疗慢性硬膜下血肿恢复良好、效果满意.结论微创颅内血肿穿刺清除术具有痛苦小、损伤轻、效果好、住院时间短、费用低廉等优点,是慢性硬膜下血肿首选治疗方案     

丙肝病毒高变区1相关基因免疫小鼠诱导细胞免疫反应的研究

1临床资料我院1998年1月至2004年7月因副乳腺住院治疗者共53例,其中男性3例.例1:男,47岁,专科检查发现右腋下-4 cm× 6 cm包块,表面无红肿、溃破,质软,无明显分界,无压痛,无波动感,活动度大,基底未扪及.患者家族中有多人患副乳腺.例2:男,51岁,因"右侧腋下肿大3个月余"入院.无意中发现右侧腋下肿大,无疼痛等不适感,自觉肿物逐渐增大.     

口腔黏膜渗出液检测HIV1/2型抗体的方法评价

目的 评价口腔黏膜渗出液检测艾滋病病毒Ⅰ/Ⅱ型(HIV-1/2)抗体的敏感性和特异性,及其与血液HIV-1/2抗体检测试剂的一致性.方法 分别取已知HIV感染者及未感染者餐前及餐后10分钟、餐后1小时,饮酒前、饮酒后,牙周疾病患者、健康志愿者的口腔黏膜渗出液标本,检测HIV-1/2抗体.同时平行采集上述人群的血清标本,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HIV-1/2抗体.并进一步通过ELISA方法检测标准血清转换盘,同时用此试剂检测该感染者的口腔黏膜渗出液标本中的HIV-1/2抗体.结果 15例已知HIV感染者(餐前、餐后10分钟、餐后1小时,饮酒前、饮酒后)口腔黏膜渗出液标本为阳性,其余口腔黏膜渗出液标本均为阴性;15例已知HIV感染者血清标本均为阳性,1例健康志愿者血清标本呈阳性(后经Western Blot试验确认为阴性),余血清HIV抗体均为阴性.该口腔黏膜渗出液HIV抗体检测试剂的敏感性为100%,特异性为100%,与ELISA检测的一致性为99.85%.血清转换盘实验结果显示,血清标本于感染后的33天检出阳性,口腔黏膜渗出液于感染后的28天检出阳性.结论 利用口腔黏膜渗出液检测HIV-1/2型抗体与现行的血液ELISA检测结果相近.口腔黏膜渗出液标本采集方便而且危险性小,在采血较困难的人群、基层医疗机构、艾滋病自愿咨询检测(VCT)门诊等,可考虑使用口腔黏膜渗出液进行HIV抗体的初筛检测.