耻垢分枝杆菌蛋白酶体辅助因子 A 的敲除和功能探讨

目的：用同源重组方法构建耻垢分枝杆菌 MC2155蛋白酶体辅助因子 A(proteasome accessory factor A,PafA)基因敲除菌株,初步探究 PafA 基因的缺失对耻垢分枝杆菌的生长活力及药物敏感性的影响。方法对耻垢分枝杆菌基因组中 PafA 两侧序列分别进行扩增,连接载体及目的片段构建自杀载体,电击转入耻垢分枝杆菌中,与基因组中的 PafA 进行同源交换,通过蓝白斑筛选出基因敲除菌株。对敲除菌株与野生菌株每隔3 h 测定其正常条件、厌氧条件下及加不同浓度异烟肼、利福平和乙胺丁醇条件下菌液的吸光度(A580)值,比较其生长活力,连续2 d,绘制生长曲线。结果通过同源重组方法成功得到了耻垢分枝杆菌的 PafA 基因敲除株,不同药物浓度及生长条件下两者的生长曲线呈“S”形,两者之间的生长速度未见明显差别。结论 PafA 虽然是原核细胞类泛素-蛋白酶体系统中的重要组成部分,但它的缺失并未引起显著的菌株生长活力和药物敏感性的变化,提示 PafA 的主要功能可能不在于此,菌株另外还有代偿的途径,PafA 基因功能并不是影响耻垢分枝杆菌生长及药物作用效果的唯一因素,对它的功能研究需要更加深入。     

MBL免疫治疗结核病小鼠的实验研究

目的 观察甘露聚糖结合凝集素(mannan-binding lectin,MBL)对结核分枝杆菌感染小鼠的免疫治疗作用.方法 将BALB/c小鼠18只随机分成MBL免疫治疗组、微卡治疗组和结核菌感染对照组,每组6只.小鼠感染结核分枝杆菌后第14、21、28 d各组腹腔内分别注射MBL、微卡和生理盐水.治疗结束后第3周处死小鼠,观测各组小鼠体质量以及肺、脾脏湿重,观察肺脏病理改变,取肺、脾组织进行结核菌培养和菌落计数.结果 治疗后第3周,治疗组小鼠体质量和脾脏质量高于对照组,肺脏质量低于对照组,且肺部病变较轻.MBL减轻结核病小鼠体质量下降,减少结核病小鼠肺和脾脏结核菌数量.结论 MBL对结核病小鼠具有一定的免疫治疗作用.     

结核分枝杆菌北京基因型菌株rpoB基因突变特征研究

目的分析结核分枝杆菌临床分离株北京基因型的rpoB基因突变特点。方法同时采用IS6110-限制性片段长度多态性（IS6110-RFLP）,间隔区寡核苷酸分型（Spoligotyping）方法对102株结核分枝杆菌临床分离株进行基因分型,确定北京基因型。采用反相斑点杂交方法检测ropB基因突变。结果 73.5%（75/102）的临床分离株是北京基因型,62株（60.8%,62/102）利福平耐药株中有52株（83.9%,52/62）为北京基因型,10株为非北京基因型;40株利福平敏感株中北京基因型23株,非北京基因型17株。47株北京基因型和7株非北京基因型存在ropB基因突变,最普遍的点突变发生在526位点。结论尽管北京基因型与非北京基因型在ropB基因突变特征上无显著性差别,但北京基因型菌株利福平耐药率和rpoB基因突变率显著高于非北京基因型菌株;以PCR为基础的反相斑点杂交方法具有较高的敏感度和特异度,适用于大批量结核分枝杆菌利福平耐药性的初筛。     

藏族肺结核患者140例的溶质转运蛋白家族11成员1基因单倍型研究

目的 研究溶质转运蛋白家族11成员1(SLC11AI)基因单倍型与中国藏族人群肺结核易感性的关系.方法 2004年6月至2005年1月选取藏族肺结核患者140例,感染MTB未发病的藏族对照139例,用变性高效液相色谱检测和PCR限制性片段长度多态性分析方法对SLC11A基因4种多态性[5'(GT)n、INT4、D53N和3'UTR]进行基因分型,用SHESIS软件进行连锁不平衡与单倍型分析,以X2检验研究基因单倍型与肺结核易感性的关系.结果 病例组5'(CT)9/INT4 G单倍型频率(181/280,64.8%)显著低于对照组(217/276,78.1%),差异有统计学意义(X2=11.026,P<0.01);病例组3['UTR TGTG/D543N G单倍型频率(215/280,76.6%)显著低于对照组(235/276,84.4%),差异有统计学意义(X2:6.547,P<0.05);3'UTR TGTG缺失/D543N A单倍型频率(34/280,12.0%)显著高于对照组(18/276,6.4%),差异有统计学意义(X2=6.547,P<0.05).结论 SL11AI摹闪中5'(GT)/INT4 G、3'UTR TGTG/D543N G及其3'UTR TGTG缺失/D543N A单倍型与中国藏族人群肺结核易感性有关.     

实时荧光定量PCR检测耐药结核分枝杆菌中耐药相关基因whiB7的表达

目的探讨结核分枝杆菌耐药性与whiB7基因表达水平之间的关系。方法以耐受利福平、异烟肼、链霉素、乙胺丁醇和氟喹诺酮的结核分枝杆菌临床分离株为研究对象。利用实时定量PCR的方法．检测药物刺激结核分枝杆菌后whiB7基因表达水平的变化。结果除利福平刺激相应的菌株后。whiB7基因的表达水平变化不明显外．其余药物的刺激均会引起结核分枝杆菌耐约株的whiB7基因表达水平发生显著变化。结论结核分枝杆菌的whiB7基因是对多种抗生素刺激发生反应的基因。推测whiB7的表达参与结核分枝杆菌的耐药过程。     

外侧裂区脑挫裂伤早期手术疗效分析

目的 探讨早期手术对外侧裂区脑挫裂伤预后的影响.方法 回顾分析54例外侧裂区脑挫裂伤早期手术患者的临床及影像学资料.结果 术后死亡6例.48例随访3～6个月,平均4个月,根据GOS标准:良好36例,轻残8例,中残3例,重残1例.结论 外侧裂区脑挫裂伤患者采取严密观察病情变化,尽早手术及术后综合处理可获得良好的预后.     

实时荧光定量PCR检测耐药结核分枝杆菌中耐药相关基因whiB7的表达

目的探讨结核分枝杆菌耐药性与whiB7基因表达水平之间的关系。方法以耐受利福平、异烟肼、链霉素、乙胺丁醇和氟喹诺酮的结核分枝杆菌临床分离株为研究对象,利用实时定量PCR的方法,检测药物刺激结核分枝杆菌后whiB7基因表达水平的变化。结果除利福平刺激相应的菌株后,whiB7基因的表达水平变化不明显外,其余药物的刺激均会引起结核分枝杆菌耐药株的whiB7基因表达水平发生显著变化。结论结核分枝杆菌的whiB7基因是对多种抗生素刺激发生反应的基因,推测whiB7的表达参与结核分枝杆菌的耐药过程。     

DNA固定技术对结核分枝杆菌PCR产物杂交结果影响的研究

目的 比较各种DNA 固定方法对结核分枝杆菌PCR 产物杂交结果的影响?方法 选取结核分枝杆菌PCR 扩增产物并点于尼龙膜上,用紫外线?加热和碱液三种方法固定DNA,然后以PCR 产物作探针用增强化学发光标记试剂进行标记,并对三种不同方法固定的PCR 产物杂交分析?结果 结核分枝杆菌DNA固定方法对PCR 扩增产物的检测结果具有较大的影响,碱液固定具有较好的敏感性和重复性?结论 各地结核分枝杆菌PCR 实验室可考虑用碱液法对PCR 产物固定进而进行杂交分析。     

间隔区寡聚核甘酸分型技术(spoligotyping)的建立及其对结核分支杆菌菌株北京基因型的初步鉴定

目的:建立一种以PCR为基础的结核分支杆菌DNA指纹技术,即间隔区寡聚核甘酸分型技术(Spoligotyping),研究该方法在结核分支杆菌北京基因型鉴定中的应用,并探讨该方法在结核分支杆菌流行病学中的应用.     

脂多糖对感染卡介苗巨噬细胞表达细胞因子影响的研究

目的　探讨脂多糖(LPS)对感染卡介苗巨噬细胞表达细胞因子的影响。方法 用ELISA方法比较单独巨噬细胞组,巨噬细胞+卡介苗+LPS组,巨噬细胞+卡介苗组以及巨噬细胞+LPS组细胞因子表达的差异。结果 单纯巨噬细胞组产生较少量的IL-12,TNF-α,LPS能刺激巨噬细胞组特别是感染卡介苗巨噬细胞组产生大量的IL-12,TNF-α。与单纯巨噬细胞组相比,LPS也不能有效地刺激巨噬细胞产生更多的IL-1,IL-2,IL-18和IFN-γ。结论 LPS能诱导巨噬细胞(包括卡介苗感染巨噬细胞)产生更多的TNF-α和IL-12,而有利于宿主的免疫应答。提示LPS及其同系物有潜力作为抗结核药物和疫苗或其佐剂。