丹参和碱性成纤维细胞生长因子对正加速度重复暴露大鼠脑组织中诱导型一氧化氮合酶mRNA表达的影响

背景:正加速度引起急性脑功能障碍及其防护是航空医学研究的重要课题之一,但其病理机制尚不清楚,防护措施有待进一步探讨。目的:观察诱导型一氧化氮合酶在正加速度重复暴露大鼠脑组织中的表达变化,分析碱性成纤维细胞生长因子和丹参对反复高正加速度暴露致脑损伤的防护作用。设计:随机对照动物实验。单位:解放军空军总医院分子生物学研究中心。材料:实验于2000-04/08在解放军空军总医院分子生物学研究中心完成。选用健康清洁级SD大鼠20只,按随机数字表法分为5组,即对照组、正加速度暴露组、碱性成纤维细胞生长因子组、丹参组和生理盐水组,每组4只。方法:将所有大鼠固定于动物离心机的转臂上,头朝向离心机轴心。除对照组外,其余各组大鼠正加速度暴露G值为 14Gz,增长率1.5G/s,峰值持续时间45s,共作用3次,两次中间间歇30min。对照组大鼠亦在动物离心机上经历类似实验步骤,所承受的G值为 1Gz。碱性成纤维细胞生长因子组和丹参组大鼠分别于离心前30min和离心后即刻腹腔注射碱性成纤维细胞生长因子(100μg/kg)或丹参注射液(15g/kg),生理盐水组则给予等量生理盐水。于暴露后6h麻醉断头取脑,保存于液氮内用于RNA的提取。用半定量反转录聚合酶链反应方法检测各组大鼠脑组织中诱导型一氧化氮合酶mRNA的表达水平,以相对表达量即诱导型一氧化氮合酶/甘油醛-3-磷酸脱氢酶的比率来计算。主要观察指标:各组大鼠脑组织中诱导型一氧化氮合酶mRNA的表达水平。结果:各组大鼠脑组织中诱导型一氧化氮合酶mRNA的表达水平比较:①正加速度重复暴露组显著高于对照组[0.452±0.014,0.065±0.008(P<0.01)]。②碱性成纤维细胞生长因子组和丹参组显著低于正加速度暴露组[0.196±0.010,0.183±0.011,0.452±0.014(P<0.01)]。结论:正加速度重复暴露可引起大鼠脑内诱导型一氧化氮合酶mRNA表达增加,它可能在反复高正加速度暴露致脑损伤中起重要作用,而碱性成纤维细胞生长因子和丹参对正加速度暴露所致的脑损伤具有防护作用。     

自体黑素细胞体外培养移植治疗白癜风

目的 探讨自体黑素细胞体外培养扩增和移植治疗白癜风的疗效.方法 用负压吸疱法在白癜风患者正常皮肤区吸疱取皮,用胰蛋白酶消化皮肤制成细胞悬液,在M2黑素细胞选择性培养基中培养,每周传代1次,经4～5次传代,以免疫荧光和多巴胺染色检测培养细胞的纯度和生物学特性.观察培养的自体黑素细胞移植到白癜风患者皮损区后色素生成效果.结果 黑素细胞能在培养基中选择性生长,经4～5周培养,获得纯的黑素细胞,无成纤维细胞和角质形成细胞污染.16例患者28个皮损区接受了移植治疗,病变皮肤面积从2cm²到200 cm²,1个月后移植区出现部分色素,呈淡红色.所有皮损区在移植后3～5个月均有色素再生,色素水平较周围正常皮肤略深或稍浅,6～8个月时色素恢复稳定,颜色与临近正常皮肤接近.87.5%皮损区色素再生面积超过50%.未见瘢痕和其他不良反应.结论 自体黑素细胞体外培养移植治疗白癜风具有效果好、安全、取较小表皮可以治疗较大面积皮损区的优点.     

飞行员脂蛋白脂酶基因HindⅢ位点多态性与血脂水平的关系

目的了解飞行员脂蛋白脂酶（LPL）基因HindⅢ位点多态性与血脂的关系,为飞行员高脂血症的防治提供依据。方法采用聚合酶链反应——限制性片断长度多态性方法 ,检测106例飞行员和98例健康对照者LPL基因HindⅢ位点多态性,并用常规方法测定其血脂水平。结果飞行员LPL基因HindⅢ位点3种基因型H＋H＋、H＋H-和H-H-的频率分别为54.72%、34.90%和10.38%,两种等位基因频率H＋和H-分别为0.72和0.28,与健康对照人群无显著差异。飞行员的高脂血症患病率（52.83%）明显高于对照人群（29.59%）。LPL基因HindⅢ位点3种基因型与血清TG和HDL-C水平相关,而血清TC和LDL-C水平在各基因型间无差异。结论 LPL基因HindⅢ位点多态性影响飞行员不同个体间血脂水平,环境因素是引起飞行员高脂血症的重要作用因子。     

关于医学实验室不确定度的评估

随着医学实验室标准化工作的开展,国际标准化组织（IS0）在关于医学实验室能力评定的文件（IS015189）中提出了对实验数值不确定度评估的要求。介绍了不确定度的概念,并对如何应用实验方法与参考方法的比较、利用实验室内与室间质控数据等方法得到不确定度的来源,不确定度与传统的系统和随机误差的关系进行了分析,为临床检验工作中不确定度的深入研究提供了新的思路。     

+Gz重复暴露大鼠脑应激基因表达谱的cDNA微阵列研究

目的 用cDNA微阵列技术研究 Gz重复暴露大鼠脑应激基因表达谱,探讨 Gz引起脑损伤的分子机制。方法 Wistar大鼠随机分成对照组和 Gz重复处理组,对照组大鼠G值为 1 Gz．实验组大鼠在动物离心机上经历了3次 10 Gz／1 min(两次间隔30min)作用,于暴露后6h处死大鼠取脑。分别从 Gz处理组和对照组大鼠脑中提取总RNA,用α-^32P dATP逆转录标记作为探针。将合成的2种cDNA探针分别与具有207个濡激基因的cDNA微阵列杂交,灰度扫描后分析两者表达谱差异。结果 有15个应激基因在 Gz处理组表达升高。结论 Gz重复暴露可引起脑组织中多个基因表达变化,这些基因的表达变化是脑损伤在基因水平上的表现,而cDAN微阵列是一种筛选差异表达基因的快速有效方法。     

牛肾上腺毛细血管内皮细胞的长期培养及生物学特性

目的：建立肾上腺毛细血管内皮细胞的长期培养的方法。方法：无菌取出新生牛肾上腺进行长期培养,观察生物学特性。结果：牛肾上腺毛细血管内皮细胞内皮细胞在加入肿瘤条件培养基及碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)培养液中,能够长期培养至31代,不同代次细胞r-谷氨酰胺转酶（GGT）,碱性磷酸酶（AKP）等生化指标稳定。结论：在含肿瘤条件培养基及bFGF培养液中能够长期培养牛肾上腺毛细血管内皮细胞。     

+Gz重复暴露大鼠海马细胞凋亡及相关基因bcl-2和p53表达的观察

目的 探讨细胞凋亡在反复高＋Gz暴露所致脑损伤中的病理作用。方法20只SD大鼠随机分成对照组,＋Gz重复暴露后30min,6h,24h和48h5组,每组4只,对照组大鼠G值为＋1Gz,实验组大鼠在动物离心机上经历了3次＋14Gz/45s(两次间间隔30min)作用,分别于暴露后30min,6h,24h,48h处死大鼠取脑,固定包埋,用原位末端标记法TUNETL检测大鼠海马细胞凋亡及用免疫组化方法检测调亡相关基因bcl-2和p53表达变化,6h组海马CA1区可见部分细胞凋亡和明显的bcl-2,p53表达变化,但在24h组和48h组基本恢复正常。结论 ＋Gz重复暴露可引起大鼠海马细胞凋亡及凋亡相关基因 bcl-2,p53的表达变化,细胞凋亡是反复高Gz暴露致脑操作的机制之一。     

人内皮抑素克隆表达及对血管内皮细胞生长的抑制 …

目的 获得具有抑制血管内皮细胞生长活性的重组人内皮抑素（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｈｕｍａｎ ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ）。方法 从肝细胞中分离总ＲＮＡ,经反转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）得到ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ全基因。用原核细胞表达载体构建了ｐＢＶ２２０／ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ重组质粒,经ＤＮＡ测序确认后,将其转化大肠杆菌ＤＨ５α进行表达、初步纯化及活性测定。结果 经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析,表达产物相对分     

血清胱抑素C、β2-MG和尿NGAL联合检测对糖尿病肾病早期诊断的价值

目的 探讨血清胱抑素C(cystatin C,CysC)、β2-微球蛋白(β2-microglobulin,β2-MG)、尿NGAL(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)联合检测在糖尿病肾病(daibetic nephropathy,DN)早期诊断的临床价值及其敏感度和特异性.方法 根据尿蛋白检测结果,将92例已确诊为2型糖尿病的患者分为2组:正常蛋白尿组(A组)和微量蛋白尿组(B组)各46例,收集46名体检的健康人作为对照组.检测各组血清CysC、β2-MG和尿NGAL等指标水平并进行统计学分析.结果 A、B两组CysC、β2-MG较对照组明显升高,B组CysC(0.69±0.17)、β2-MG(2.34 ±0.61)水平高于A组的CysC(0.57±0.097),β2-MG(1.7±0.62)水平,差异有统计学意义(P＜0.05).A组和B组尿NGAL水平与对照组比较有统计学差异(P＜0.01).3项指标的联合预测因子的曲线下面积为0.956,大于0.90,说明在DN早期诊断中具有极高的敏感度和特异性.CysC、β2-MG、尿NGAL与尿微量白蛋白/肌酐(UACR)、Urea等指标呈正相关(P＜0.01).结论 CysC、β2-MG和尿NGAL3项指标联合能有效提高DN早期诊断的敏感度和特异性,对疾病的早期诊断、病情监测、判断预后有重要的临床意义.     

临床检验在地震灾害中的作用和启示

“5．12”四川汶川大地震,牵动着全中国人的心,在党中央、国务院和中央军委的号召下,全国上下紧急动员开展了汶川地震灾害救援工作。十万解放军指战员从祖国四面八方奔赴灾区执行抗震救灾任务,临床检验中心在医院党委部署下,积极做好赴灾区前线和接收伤病员的检验准备工作。6月1日根据汶川抗震救灾指挥部准备在汶川重灾区组建野战医院,