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目的探讨自制靶向卵巢癌的纳米超声造影剂特性和体内造影增强效果。方法应用冷冻干燥-超声法制备普通纳米脂质膜微泡,通过生物素-亲和素桥连法将生物素化的促黄体生成素释放激素(LHRH)与普通纳米脂质膜微泡连接,制备靶向卵巢癌的纳米微泡(LHRH-N-Mb);观察其镜下形态,计算浓度以及室温下保存时间;以Zeta检测仪检测粒径范围、表面电位;光镜下观察LHRH-N-Mb与LHRH受体过表达的人卵巢癌OVCAR-3细胞靶向结合情况;观察LHRH-N-Mb增强裸鼠卵巢癌移植瘤显像情况。结果LHRH-N-Mb成功制备,光镜下外观圆整,分布均匀,浓度为(2.24±0.42)×10^9/ml,粒径范围为369~618nm,平均(511.76±64.25)nm,表面电位为-14.6mV。室温下保存14天后,LHRH-N-Mb上述理化特性与刚制备时的差异无统计学意义(P〉O.05)。光镜下OVCAR-3细胞周围可见LHRH-N-Mb围绕或黏附,呈花环样结构,这种靶向结合能被生物素化的LHRH抗体预先阻断。LHRH-N-Mb能增强裸鼠卵巢癌移植瘤血管及实质显像效果。结论通过冷冻干燥超声法和生物素-亲和素桥连法制备的LHRH-N-Mb造影剂具有粒径小、稳定性高,体外能靶向高效结合人卵巢癌OVCAR-3细胞,在裸鼠体内有明显增强显像效果。 相似文献
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目的:研究转录因子FOXO3a对急性粒细胞白血病HL60细胞株增殖、凋亡的影响及可能的分子机制.方法:将FOXO3a表达质粒pcDNA3.1-FOXO3a及空载对照质粒pcDNA3.1分别经阳离子脂质体介导转染HL60细胞,用G418筛选出FOXO3a稳定表达细胞株.台盼蓝拒染法和MTT法检测HL60细胞增殖,流式细胞... 相似文献
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含hTERT启动子和Fcy::Fur基因重组质粒的构建及其对卵巢癌细胞的体外杀伤作用 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 构建含人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子和融合型自杀基因Fcy::Fur的重组真核表达质粒并探讨它对卵巢癌细胞的体外杀伤作用.方法 ①从pORF5-Fcy::Fur质粒中PCR扩增Fcy::Fur片段,业克隆进p2XEB质粒,构建含hTERT肩动了和Fcy::Fur基因的重组真核表达质粒p2XEB-Fcy::Fur;同理,将Fcy::Fur亚克隆进pGL3-Promoter质粒,构建含猿猴病毒40(SV40)启动子和Fcy::Fur基因的重组质粒pGL3-Pro-Fcy::Fur,重组子经酶切鉴定、测序;②RT-PCR检测卵巢癌细胞SKOV3和人胚肺成纤维细胞MRC-5中hTERT mRNA的表达,荧光素酶活性分析检测hTERT启动子在2种细胞中活性;③用超声微泡作载体,将上述2种质粒分别转染SKOV3和MRC-5,与前药5-氟胞嘧啶(5-FC)共培养后,CCK-8测定转染细胞增殖抑制率;吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)染色观察细胞凋亡;RT-PCR检测Fcy::Fur mRNA的表达.结果 p2XEB-Fcy::Fur和pGL3-Pro-Fcy::Fur 2种重组质粒酶切和测序结果 与预期完全相符,hTERT启动子和Fcy::Fur片段测序与GenBank报道一致,且插入方向正确;SKOV3和MRC-5中hTERT mRNA表达分别为阳性和阴性,hTERT肩动子在SKOV3中活性为26.2%,在MRC-5中为0.65%;p2XEB-Fcy::Fur/5-FC系统对SKOV3的增殖抑制率明显高于MRC-5(P=0.036),而pGL3-Pro-Fcy::Fur/5-Fc系统对2种细胞的增殖抑制率无明显区别(P=0.87);转染pGL3-Pro-Fcy::Fur的SKOV3、MRC-5细胞以及转染p2XEB-Fcy::Fur的SKOV3细胞,均见大量凋亡细胞和Fcy::Fur mRNA表达,而转染p2XEB-Fcy::Fur的MRC-5少见凋亡细胞,也无Fcy::Fur mRNA表达,与前三者比较,差异有统计学意义(P<0.01).结论 含人端粒酶逆转录酶启动子和Fcy::Fur基因的重组质粒p2XEB-Fcy::Fur成功构建,p2XEB-Fcy::Furl/5-FC系统能靶向杀伤端粒酶逆转录酶阳性的卵巢癌细胞. 相似文献