Stx2B与IntiminC300融合蛋白的构建、表达及免疫保护研究

目的　构建表达肠出血性大肠杆菌 (EHEC)O1 57∶H7志贺毒素Ⅱ结合亚单位 (Stx2B)与紧密黏附素C 端免疫保护性片段 (IntiminC30 0 )的融合蛋白 (Stx2B IntiminC30 0 ) ,并观察其免疫保护作用。方法　设计引物采用PCR法自EHECO1 57∶H7基因组扩增Stx2B的编码基因stx2b ,T A克隆后在前期已构建原核表达质粒 pET 2 8a( + ) eaeC30 0的基础上构建融合基因表达质粒 pET 2 8a( + ) stx2b eaeC30 0 ,经测序鉴定后转化E .coliBL2 1 (DE3) ,IPTG诱导表达 ,PAGE检测 ;通过包涵体洗涤与阴离子柱层析纯化 ,获得目的蛋白Stx2B IntiminC30 0 ,以Al(OH ) 3为佐剂皮下注射免疫BALB/c小鼠 ,再以EHECO1 57∶H7超声破菌液腹腔注射免疫后的小鼠 ,观察攻毒保护效果。结果　PCR法自EHECO1 57∶H7基因组扩增出了约 2 90bp的目的片段 ;原核表达质粒 pET 2 8a( + ) stx2b eaeC30 0经酶切及测序鉴定与设计序列一致。转化E .coliBL2 1 (DE3)后IPTG诱导目的蛋白表达率约 2 5% ;PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量 (Mr)约 4 3× 1 0 3,破菌后电泳证实目的蛋白以包涵体形式表达。纯化后目的蛋白Stx2B IntiminC30 0的纯度达 75% ,免疫BALB/c小鼠后血清特异性抗体阳转率及抗体效价均显著增高 ,能够抵御致死剂量EHECO1 57∶H7超声破菌     

儿童烧／烫伤1830例原因调查

对15a中收住我科的1830例儿童烧／烫伤的原因,进行回顾性调查分析,结果表明：热液烫伤比例最高,占82．5％（其中热／沸水占85．3％,热汤和热油等占14．7％）;火焰烧伤占11．7％;电烧伤占4．6％（高压电接触烧伤占烧伤的94．1％）;其它原因烧伤占1．2％,临床上热液烫伤的儿童数量多,比例高;火焰烧伤病情重,原因复杂,高压电接触烧伤致残率高,应加强对引起儿童烧／烫伤的各种危险因素的研究与识别,有效预防和降低儿童烧／烫伤的发生率提供依据。     

中药葛根及其近缘种的rDNA-ITS序列分析

 目的探讨中药葛根及其近缘种的分类地位及系统发育关系，同时为葛根的指纹图谱鉴别提供分子标记。方法测定并分析葛属3种植物的内转录间隔区(ITS)序列及5.8S-rRNA基因序列。结果测得该属3种植物的片段包括ITS1，5.8S和ITS2全长序列以及18S，26S部分序列。野葛与粉葛的ITS1，ITS2的差异性分别在2.10%和2.09%以内,而山葛与野葛、粉葛在ITS1，ITS2的差异性则分别达到8.14%和12.82%以上。根据ITS序列特征构建的系统树，不同产地的野葛首先聚类，然后与粉葛聚在一起，山葛最后聚类。结论根据分子性状特征，粉葛作为野葛的变种，山葛独立成种较为合理。ITS序列特征是中药葛根鉴别的有效分子标记。     

重型颅脑损伤患者继发呼吸机相关肺炎的临床分析

目的研究重型颅脑损伤患者继发呼吸机相关肺炎(VAP)的相关因素,探讨其预防和治疗措施。方法回顾性分析重型颅脑损伤行机械通气患者的相关临床资料、继发VAP的病原菌特点及相关治疗措施。结果重型颅脑损伤患者行机械通气192例,发生VAP患者106例,发生率55.21%。其主要病原菌为革兰阴性杆菌,占79.46%,主要为铜绿假单孢菌;革兰阳性球菌占16.96%,主要为金黄色葡萄球菌;真菌占3.57%,主要为白色念珠菌。VAP发生与年龄、机械通气时间、基础肺部疾患、误吸等有相关性。结论重型颅脑损伤行机械性通气患者VAP发生率较高,病原菌以革兰阴性杆菌为主。采取综合措施,预防控制易患因素,根据病原学和药敏结果合理应用抗生素,是降低VAP发生的重要措施。     

急性染镉对小鼠肝肝肾组织谷胱甘肽的影响

目的 探讨氯化镉急性染毒对小鼠肝脏、肾脏胱甘肽（ＧＳＨ）代谢的影响。方法 给小鼠一次性腹腔注射不同剂量氯化镉,９小时后测定肝,肾组织镉、丙二醛（ＭＤＡ）、ＧＳＨ含量。结果 各剂量组肝、肾镉含量升高,高剂量组肝、肾ＭＤＡ含量升高,肾ＧＳＨ含量下降,肝脏ＧＳＨ呈现先升高,后下降的剂量反应关系,。结论氯化镉染毒９小时后可同时在小鼠肝、肾脏蓄积、并引起肝肾脂质过氧化反应,小鼠肝、肾脏对急性镉染毒诱导的ＧＳ     

大肠杆菌O157:H7 VT2毒素基因的克隆及测序

目的 克隆出血性大肠杆菌Ｏ１５７：Ｈ７的ＶＴ２毒素基因。方法 利用ＰＣＲ技术从出血性大肠杆菌Ｏ１５７：Ｈ７染色体基因组中扩增出ＶＴ２毒素基因。并连接至ｐＧＥＭ－Ｔ载体上,构建重组质粒ｐＧＶＴ２并进行序列测定。结果与结论 酶切分析表明重组质粒含有ＶＴ２毒素基因,核苷酸序列分析表明,其序列与ＧｅｎＢａｎｋ上Ｏ１５７：Ｈ７的ＶＴ２毒素基因一致。     

改良法胃管置入1000例报告

胃管置入术是普通外科最基本的护理操作之一,传统操作法病人痛苦大,难忍受,因而患者常有恐惧心理,给正常治疗带来一定困难。1993年1月～1994年1月,我们试采用饮水胃管置入法（简称饮水法）,对传统胃管置入法（简称常规法）进行改良。经临床对照取得满意效果之后,我们于1994年2月～1998年12月,对1000例病人进行临床观察,证实饮水法在置管成功率和减轻病人痛苦方面明显优于常规法,现将观察结果报告如下。1对事和方法11对象上腹部手术患者1000例,其中男性597例,年龄18～88岁,平均46．5岁,女性403例,年龄25～73岁,平均年龄43．3…     

PM2.5对L02肝细胞部分癌基因和凋亡相关基因表达的影响

目的： 探讨细颗粒物（PM_2.5）对人正常肝细胞（L02肝细胞）癌基因和凋亡相关基因表达的影响。方法： 以L02肝细胞为研究对象,设10和50 μg/mL两个PM_2.5混悬液染毒组,以未染毒的L02肝细胞为阴性对照,10 μmol/L的K₂CrO₄（下用Cr⁶⁺表示）染毒细胞为阳性对照,均处理24 h,应用实时荧光定量聚合酶链式反应（qPCR）和Western blot技术分别检测促癌基因c-myc、c-fos、抑癌基因p53和促凋亡相关基因Caspase-3、Caspase-8,抑凋亡基因Bcl-2的mRNA以及相应的蛋白表达变化。结果： qPCR法分析结果显示,与阴性对照组比较,10、50 μg/mL PM_2.5混悬液染毒组以及阳性对照组L02肝细胞癌基因c-myc的mRNA表达水平分别升高69.5%、118.0%、51.1%,c-fos表达水平分别升高50.3%、64.4%、23.3%,p53表达水平分别下降4.0%、22.0%、18.0%;凋亡相关基因Caspase-3的mRNA表达水平分别升高31.0%、30.5%、42.0%,Caspase-8表达分别升高25.3%、40.3%、64.5%,Bcl-2表达分别下降40.5%、46.9%、41.4%,差异均有统计学意义（P < 0.05）。Western blot法分析结果显示,在10、50 μg/mL PM_2.5混悬液和Cr⁶⁺染毒后L02肝细胞c-myc蛋白表达水平分别升高32.3%、49.3%、70.6%,c-fos蛋白表达水平分别升高11.3%、50.2%、45.2%,p53蛋白表达水平分别下降17.5%、40.0%、42.9%;Caspase-3蛋白表达水平分别升高23.1%、33.9%、43.1%,Caspase-8蛋白表达水平分别升高31.4%、52.1%、80.0%,Bcl-2蛋白表达水平分别下降14.3%、23.3%、36.9%,差异均有统计学意义（P < 0.05）。结论： PM_2.5染毒引起L02肝细胞中促癌基因和促凋亡相关基因表达升高,抑癌基因和抑凋亡相关基因表达下降,提示PM_2.5对L02肝细胞的恶性转化和凋亡可能有促进与激活作用。     

乙型脑炎病毒活疫苗生产株SA14-14-2的感染性克隆构建

目的　构建乙型脑炎病毒 (乙脑病毒 )活疫苗生产株SA1 4 14 2的感染性克隆。方法　在对SA1 4 14 2株全长基因组测序基础上 ,引入适当酶切位点和T7RNA聚合酶启动子 ,采用分部连接策略 ,获得全长基因组cDNA ,体外转录RNA后 ,转染细胞获得感染性克隆 ,病毒传代培养、抗体中和试验和乳鼠脑腔攻击试验鉴定病毒。结果　由疫苗株cDNA构建了病毒感染性克隆 ,经鉴定为乙脑病毒 ,且病毒毒力比野毒株弱。结论　获得了乙脑病毒活疫苗生产株SA1 4 14 2的感染性克隆 ,为进一步研究疫苗的减毒机理及开发新一代疫苗奠定了基础     

葛枳护肝胶囊提取工艺研究

葛枳护肝胶囊是由葛花、豆蔻等组方的中成药,具有解酒、醒酒、护肝、养胃等功效.其主要药效成分为葛根总黄酮.葛根总黄酮的提取方法很多,如乙醇回流提取法、醇渗漉法、超声提取法等[1].