原核基因的翻译弱化及其调控机理

翻译弱化是指翻译起始调控序列位于一定的RNA二级结构中,或者是调控蛋白的结合位点,致使在通常情况下基因不能表达;而当二级结构或调控蛋白与靶序列的结合被破坏时,基因得到表达;翻译弱化在抗生素抗性基因、氨基酸生物合成基因及其它多亚基蛋白操纵子基因中起重要的调控作用。     

新型冠状病毒Omicron变异株感染患者血清肌酸激酶和乳酸脱氢酶水平与年龄的相关性

目的 探讨新型冠状病毒肺炎(COVID-19)Omicron变异株感染患者血清肌酸激酶和乳酸脱氢酶与年龄的相关性。方法 选取2022年10月16日-12月31日联勤保障部队第九八八医院确诊的226例COVID-19 Omicron变异株感染患者为感染组,以同期住院同科室有感染征象但未感染Omicron变异株的新冠核酸阴性患者247例为对照组,分别收集两组患者的临床资料和实验室检测指标。对两组患者从性别、年龄分布等临床特点及实验室指标肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)进行分析。结果 两组患者性别构成和年龄分布比较差异均无统计学意义;与对照组比较,感染组总人群的肌酸激酶CK水平及异常增高比例均升高(P<0.05),其中CK水平升高以老年人(≥60岁)、刚成年(16岁～)以及幼儿(1岁～)最为显著(P<0.05),LDH水平增高及异常增高比例以幼儿(1岁～)最为显著(P<0.05)。结论 COVID-19 Omicron感染患者的肌酸激酶CK升高以成年患者为主,而在婴儿中LDH升高更为常见,上述结果可为针对性制定治疗方案提供参考。     

非受体酪氨酸激酶c-Abl/Arg对细胞微管结构的影响

c—abl／Arg非受体酪氨酸激酶的主要生物学功能是参与细胞增殖分化、细胞周期和细胞凋亡的调控,并在氧化应激和DNA损伤修复过程中发挥重要作用。已有研究发现,绝大多数胞质c—Abl的C端可与F-肌动蛋白细胞骨架结合,因而c—Abl在调节肌动蛋白动态平衡、细胞形态以及细胞迁移等方面有着重要的作用。     

红色糖多孢菌A226-ΔeryCⅢ突变体的构建及产物分析

目的构建红色糖多孢菌糖基转移酶EryCⅢ失活突变体,为探索红霉素糖基结构修饰和合成新型红霉素衍生物打下基础。方法通过PCR扩增方法将eryCⅢ基因缺失130bp后,克隆至同源重组型质粒pWHM3上,构建pWHM3-ΔeryCⅢ,将其导入红色糖多孢菌A226中。经过两次同源重组,筛选出1株缺失EryCⅢ酶活性的红色糖多孢菌A226-ΔeryCⅢ突变体。使用抑菌实验、薄层层析和质谱对其发酵产物进行分析,并通过回补实验进一步验证。结果与结论对红色糖多孢菌A226-ΔeryCⅢ染色体序列测定表明,eryCⅢ基因相应位点缺失130bp,突变菌株发酵产物对枯草芽孢杆菌无抑制作用,薄层和质谱结果表明突变菌株积累3-L-mycarose红霉内酯B（MEB）,而并没有发现红霉素产物。回补验证发现eryCⅢ基因导入A226-ΔeryCⅢ使得其恢复了红霉素合成能力。所构建的红色糖多孢菌EryCⅢ失活突变体A226-ΔeryCⅢ,为探讨组合合成红霉素衍生物奠定基础。     

74例早发性乳腺癌患者BRCA1和BRCA2基因致病突变研究

目的 研究乳腺癌易感基因BRCA1和BRCA2在早发性乳腺癌(确诊年龄≤35岁)患者中突变情况,分析致病突变与临床特征之间关系.方法 选择2014年9月至2016年6月期间就诊于军事医学科学院附属医院的早发性乳腺癌患者74例,采用高通量二代测序技术以及生物信息分析,对纳入患者BRCA1和BRCA2基因的49个外显子序列及拼接区序列进行检测分析,并将患者按临床特征分组,χ2检验比较BRCA1和BRCA2致病突变在各组的分布.结果 在74例早发性乳腺癌患者中,检测到15例(20.27%)BRCA1/2致病突变,包括5例(6.76%)BRCA1致病突变,10例(13.51%)BRCA2致病突变.其中11例为新发现致病突变,检测到1例患者携带相对高频致病基因突变BRCA1:c.5470_5477delTGCCCAAT.有乳腺癌或卵巢癌家族史组携带致病突变率明显高于无家族史组(40.91% vs 11.54%,χ2=6.534,P=0.011).结论 BRCA1/2致病突变对早发性乳腺癌意义重大,尤其是伴有乳腺癌或卵巢癌家族史的早发性乳腺癌.新发现的致病突变可能为中国人群特有突变.BRCA1:c.5470_5477delTGCCCAAT可能成为中国人群的始祖突变.     

SARS病毒核衣壳蛋白抗体消长规律

研究SARS病毒抗体的消长规律对于评价患者的愈后及SARS疫苗的使用效果具有重要意义。本项目选用了军事医学科学院生物工程研究所研制的双抗原夹心SARSN蛋白抗体ELISA诊断试剂。对2 79例临床确诊的、发病不同时间SARS患者的血清进行检测,并同时跟踪检测了4 1例SARS患者在不同发病时间(发病3d至16 0d)的血清标本,对抗体产生的时间规律进行了研究。材料和方法标本来源:所用的SARS病例标本为本院检验科从2 0 0 3年2月7日开始,从本院收治病人及广州市中山二院、177医院、广州市第八人民医院、北京小汤山医院收集的SARS病人血清标本…     

与霍乱毒素A1亚基突变体相互作用蛋白的筛选

目的 寻找新的与霍乱毒素A1亚基（CTA1）突变体（S63F）相互作用的蛋白。来探讨CT佐剂活性的分子机理。方法 应用酵母双杂交技术,以CTA1（S63F）为诱饵蛋白筛选人脾细胞cDNA文库,并通过共转染,免疫共沉淀和Western杂交在哺乳动物细胞COS-7中确证诱饵蛋白和候选蛋白之间的相互作用。结果 筛选获得一个与HLAⅠ类分子α亚基高度同源的蛋白。这个蛋白在酵母核内以及COS-7细胞中都显示出与CTA1（S63F0的相互作用,结论 CTA1（S63F）与HLAⅠ类分子α亚基内以及COS-7细胞中都显示出与CTA1（S63F）的相互作用。结论 CTA1（S63F）与HLAⅠ类分子α亚基的相互作用可能导致HLAⅠ类分子进入“膜筏”,引起膜筏不断聚集增大,聚集到一定程度后筏相关酪氨酸蛋白激酶活化,启动胞内信号的级联传递,增强免疫反应。     

敲低细胞角蛋白18对氧化应激诱导细胞凋亡的影响

目的研究氧化应激条件下中间纤维蛋白细胞角蛋白(cytokeratin)的抗凋亡作用。方法利用RNA干扰(RNAi)技术敲低细胞内细胞角蛋白18(CK18)的表达,免疫印迹法检测细胞角蛋白的表达水平,并通过A549细胞建立细胞角蛋白敲低稳定细胞系。利用免疫荧光染色技术观察细胞角蛋白对细胞骨架的影响。利用流式细胞技术检测细胞角蛋白对细胞内ROS(reactive oxygen species)水平及氧化应激诱导细胞凋亡的影响。结果筛选获得3个干扰效果较好的RNAi序列,成功利用A549细胞建立细胞角蛋白敲低的稳定细胞系(A549-KD)。CK18表达敲低导致细胞内多种细胞角蛋白表达广泛下调,并破坏细胞微丝及微管骨架结构。氧化应激条件下A549-KD细胞抗凋亡活性显著降低。结论细胞角蛋白参与维持细胞骨架结构,对抗ROS诱导的细胞凋亡,提示其在细胞的氧化应激过程中发挥保护作用。     

伊马替尼和十字孢碱对非小细胞肺癌A549细胞凋亡的影响

目的探讨伊马替尼（STI571）、十字孢碱（STS）对非小细胞肺癌A549细胞凋亡的影响。方法经STI571和STS处理后,通过Western印迹检测A549细胞内凋亡诱导因子（apoptosis-inducing factor,AIF）的变化,然后利用膜联蛋白（annexin）Ⅴ-FITC PI凋亡试剂盒,借助流式细胞仪,检测A549细胞凋亡;利用Hoechst染色检测A549细胞凋亡现象并通过免疫荧光技术检测细胞内AIF和线粒体的变化。结果 Western印迹检测结果显示,STI571和STS处理能够提高AIF在A549细胞内以相对分子质量为57×103的形式表达;流式细胞仪检测结果显示,STS处理组膜联蛋白ⅤFITC染色的细胞数随着STS处理时间的增加呈现先增后降的趋势,溴化乙锭PI染色的细胞数随着处理时间增加到20 h呈现增多的趋势;STI571处理组膜联蛋白ⅤFITC的染色结果和溴化乙锭的染色结果与对照组相比,变化均不显著;STI571与STS共同作用组膜联蛋白ⅤFITC染色细胞数少于STS单独处理组结果,溴化乙锭染色的细胞数明显多于STS单独处理组;Hoechst染色结果显示,STS处理组和STI571、STS共同处理组细胞核内染色质发生凝集;间接免疫荧光结果显示,AIF发生聚集且细胞内线粒体染色亮度减弱。结论 STS和STI571处理能够引起细胞内AIF分布形式上的变化,STS可引起A549细胞发生细胞凋亡,STI571处理不能引起细胞发生凋亡,但能引起细胞内AIF发生聚集并对STS引起的细胞凋亡有促进作用。