以恒河猴为模型的霍乱毒素B亚基与疟原虫多表位构建的DNA疫苗的免疫保护作用

研究以霍乱毒素B亚基 (CTB)为载体的重组疟疾多价抗原 (AWTE)表位的DNA疫苗在恒河猴中的免疫原性及对相应疟原虫感染的免疫保护作用。方法 :以恒河猴为模型 ,肌肉途径免疫编码CTB AWTE基因的质粒 ,免疫间隔为 15d ,免疫 3次 ,免疫剂量为每种质粒每次 50 0 μg/只。结果 :DNA疫苗组免疫 2次后即产生了较高水平的细胞免疫和体液免疫 ,免疫后 91d用 1.2 5× 10 8个猴疟原虫攻击 ,对照组 5只动物在攻击后 14d左右全部感染 ,感染持续 34d以上 ;DNA疫苗组的 5只动物在攻击后 60d没有感染。结论 :这种鸡尾酒式的抗原表位组合构建的DNA疫苗具有很好的免疫原性 ,同时也说明DNA疫苗在抗疟感染中起着举足轻重的作用。     

霍乱毒素A、B亚基基因比例表达的精确调节

目的;研究乱毒素Ａ亚基基因内部翻译起始序列的翻译起始效率与Ａ亚基基因翻译起始效率的关系。方法：将基因内翻译起始序列合成后克隆到上游含有起始密码和无起始密码的报告质粒中,研究表达水平的差异。结果：在上流起始区（ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ ｒｅｇｉｏｎ,ＴＩＲ）与报告基因间插入该序列,基因的表达水平提高１倍,当上上游的翻译起始密码由ＡＴＧ突变为ＡＴＣ时,内部翻译起始序列几乎失去起始功     

新型抗uPAR人源化抗体的表达和活性检测

目的制备抗尿激酶型纤溶酶原激活物受体（uPAR）人源化抗体并初步检测它们与抗原的亲和能力。方法通过计算机辅助设计的结果,合成新型抗uPAR抗体的轻链和重链可变区基因序列,通过重叠PCR方法,拼接成完整的轻链和重链基因并克隆入pIRES双向表达载体。瞬时转染293T细胞,收取细胞上清,rProtein A亲和层析法纯化目的抗体,并进行SDS-PAGE和免疫印迹鉴定,采用Biacore3000技术检测抗体与抗原的结合能力。结果成功构建5种表达载体S1~S5,纯化的抗体在还原SDS-PAGE中表现为相对分子质量约为25×103和55×103两条带;免疫印迹分析表明,该人源化抗体可与羊抗人IgG特异性结合。Biacore3000实验结果表明,S2、S4和S5抗体与抗原具有良好的亲和活性,且亲和活性分别为1.74×10-8,1.49×10-8和1.05×10-8mol/L。结论成功构建并表达了5种抗uPAR人源化抗体,其中S2、S4和S5具有良好的抗原结合能力。     

真核表达东方马脑炎病毒衣壳蛋白Capsid抑制IFNγ应答基因转录

目的克隆东方马脑炎病毒（EEEV）衣壳蛋白（Capsid）基因,构建其真核表达载体,检测该基因在293细胞中的表达,并初步研究其对干扰素（IFN）应答基因表达的影响。方法构建包含EEEV capsid基因的真核表达载体pcDNA3-Flag-capsid,以威格拉斯脂质体转染293细胞进行瞬时表达,Western印迹检测其表达情况;应用定量PCR比较IFN效应基因Gbp1,Gbp2和Isg15在pcDNA3-Flag-capsid和空载体转染细胞中mRNA表达差异。结果构建了EEEV Capsid真核表达质粒,并且该质粒能够在293细胞中有效表达,同时定量PCR结果表明,与空载体转染对照组相比,外源导入EEEV Capsid抑制IFN应答基因Gbp1,Gbp2和Isg15的转录。结论真核表达EEEVCapsid抑制细胞内IFN应答基因的表达,为研究EEEV致病机制奠定基础。     

环式增强型绿色荧光蛋白热稳定性及Npu DnaE内含肽高反式剪接效率研究

目的在体内借助Npu DnaE内含肽(intein)的高效反式剪接作用获得环式增强型绿色荧光蛋白(Cyc-EGFP)。方法对构建的融合表达载体pET/Npu DnaE intein/EGFP-28a(+)进行诱导、表达,之后利用亲和纯化获得高纯度的Cyc-EGFP和增强型绿色荧光蛋白(EGFP),并对二者的荧光强度和热稳定性进行比较。结果 NpuDnaE内含肽环化效率可达98%以上,明显优于Ssp DnaE内含肽,环化后的EGFP热稳定性提高了4～5℃。结论 Cyc-EGFP这一明显优势使蛋白环化在蛋白质工程等领域具有重要的应用价值。     

肾损伤186例诊治分析

目的 :探讨肾损伤的诊断与治疗。方法 :对 1 86例肾损伤患者 (其中闭合性损伤1 82例 ,开放性损伤 4例 ,合并伤 2 3例 )的非手术治疗 (1 2 2例 )和手术治疗 (6 4例 )方法进行回顾性分析。结果 :IVU阳性率 5 4 .5 %,B超阳性率 79.5 %,CT阳性率 1 0 0 %( ～ 类损伤 )。非手术治愈 1 2 2例 ,手术治愈 6 2例。结论 :B超检查便捷 ,应为首选 ,CT检查可明确肾损伤的程度及分类。治疗主要取决于肾脏伤情 ,保守治疗是重要的治疗方法。     

SARS-CoV N蛋白和MAP19的相互作用

目的:研究SARS-CoV N蛋白与MAP19之间的相互作用.方法:利用免疫共沉淀试验验证SARS-CoV N蛋白与MAP19的相互作用, 并利用Western blot检测SARS-CoV N蛋白对MAP19表达量的影响.结果:SARS-CoV N蛋白与MAP19能够在细胞内相互作用, 且SARS-CoV N能够显著提高MAP19的表达量.结论:SARS-CoV N蛋白与MAP19能够在细胞内形成复合物, 将为进一步研究SARS-CoV N蛋白与MAP19相互作用的生物学功能提供实验基础.