shRNA沉默EIF4E基因对乳腺癌MDA-MB-231细胞VEGF-C表达的影响

目的:探讨shRNA沉默EIF4E基因对乳腺癌MDA-MB-231细胞EIF4E及VEGF-C基因表达的影响.方法:制备针对EIF4E的三种小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),分别是siRNA1、siRNA2、siRNA3,筛选沉默最有效的siRNA,据此设计短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)寡核苷酸链,与真核表达载体pGPU6/GFP/Neo克隆连接,构建pGPU6/GFP/Neo-EIF4E重组质粒,经酶切鉴定后利用脂质体LipofectamineTM2000将鉴定正确的重组质粒转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞,荧光显微镜观察转染效率,RT-PCR、Western blot、免疫细胞化学法检测EIF4E及VEGF-C mRNA和蛋白表达情况.结果:RT-PCR结果显示siRA1、siRNA2、siRNA3对乳腺癌MDA-MB-231细胞EIF4E基因表达均有抑制作用,与空白对照组、阴性对照组、脂质体组比较差异显著(P<0.05),尤以siRNA3抑制率最高达71.2%.利用针对siRNA3合成的shRNA与质粒载体pGPU6/GFP/Neo克隆连接构建的重组质粒pGPU6/GFP/Neo-EIF4E,酶切鉴定表明构建成功,并稳定转染MDA-MB-231细胞,平均转染效率为80%.RT-PCR、Western blot结果显示,稳定转染重组质粒后MDA-MB-231细胞EIF4E及VEGF-C mRNA和蛋白表达均明显下降(P<0.05),抑制率分别为79.00%、67.90%(EIF4E)和77.01%、62.94%(VEGF-C).免疫细胞化学染色法显示重组质粒组EIF4E及VEGF-C蛋白表达均受到明显抑制(P<0.05).结论:靶向EIF4E的shRNA不仅能有效沉默乳腺癌细胞MDA-MB-231中EIF4E的表达,且能抑制VEGF-C的表达,提示EIF4E可能参与诱导乳腺癌细胞VEGF-C的表达,而EIF4E-shRNA可能成为抑制乳腺癌淋巴管生成的一种新的有效手段.     

血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C在狼疮性肾炎中的意义

目的 探讨血清半胱氨酸蛋白酶抑制荆C(Cysc)检测在狼疮性肾炎早期诊断中的意义.方法 对56例系统性红斑狼疮患者和50例正常对照组血清进行血清肌酐(SCr)和血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(CysC)测定,同时进行尿蛋白定性测定,并作相关分析.SCr采用肌氨酸氧化酶法,CysC采用免疫比浊法,尿蛋白定性试验采用干化学分析法.结果 正常对照组和SLE患者SCr分别为(72.80±14.70)和(226.85±45.80),Cysc分别为(0.95±0.21)和(3.88±1.05);两组比较,SLE患者SCr和Cysc较对照组明显增高(P<0.01),SLE患者尿蛋白定性阳性组较尿蛋白定性阴性组血清SCr、Cysc有明显增高(P<0.01),SLE患者血清Cysc阳性率较SCr明显增高(P<0.01).结论 血清Cyst是反映狼疮性肾炎的一个敏感性指标.     

急性胰腺炎患者脂肪酶的检测与临床意义

目的：探讨脂肪酶的检测对急性胰腺炎的诊断价值。方法：测定51例急性胰腺炎患者及64例非胰腺炎所致淀粉酶升高患者的脂肪酶,并进行比较。结果：急性胰腺炎患者的脂肪酶明显高于非胰腺炎患者（P＜0．01）;胰腺炎患者的脂肪酶阳性率达96．1％（49／51）,非胰腺炎患者脂肪酶阳性率仅为3．1％（2／64）;脂肪酶比淀粉酶出现时间较晚,但持续时间长;在急性胰腺炎发病后第6天阳性率仍达74．5％。结论： 脂肪酶的测定为胰腺炎的诊断提供了一种新的、简便、快速的方法。     

乳癌高强度聚焦超声治疗后腋窝引流淋巴结的免疫病理形态学观察

目的　通过观察乳癌患者肿瘤同侧腋窝引流淋巴结微结构免疫病理形态学的改变 ,分析乳癌病人高强度聚焦超声 (HIFU)治疗后局部引流淋巴结的免疫反应特点 ,进一步揭释HIFU治疗对肿瘤病人抗肿瘤免疫机能的影响。方法　 48例女性乳癌病人被分为HIFU治疗组 (HIFU组 ,2 3例 )和常规外科手术组 (对照组 ,2 5例 )。HIFU组在接受HIFU治疗后 7～ 14天进行外科常规乳癌改良根治术 ,对照组仅行乳癌改良根治术。术中收集肿瘤同侧腋窝引流淋巴结。制备 4μm组织切片 ,常规HE染色 ,按照Cottieer等提出的淋巴结免疫形态学参数标准判断 :窦组织细胞反应 (SH )、副皮质区淋巴细胞增生 (PHCL)、皮质区淋巴滤泡增生 (FHCA)。根据DiGiorgio等提出的淋巴结免疫反应分级方法 ,以细胞免疫反应为主型 (CR)、体液免疫反应为主型 (HR)、混合免疫反应增强型 (CR +HR)、无反应型 (R0 )对病人淋巴结免疫状况进行分类统计记录 ,并采用对数似然比检验对两组病人的淋巴结免疫反应状况进行统计学比较。结果　HIFU治疗后乳癌病人腋窝引流淋巴结免疫反应发生率提高 ,反应强度增强 ,呈混合高等级免疫反应。两组比较 ,淋巴结免疫反应状况存在显著差异 (P <0 .0 5 )。结论　HIFU治疗激发机体免疫反应 ,有利于机体抗肿瘤免疫功能的增强。     

血清KL-6水平在新型冠状病毒感染中的诊断价值

目的 ：探讨血清涎液化糖链抗原-6(krebs von den lungen-6,KL-6)在新型冠状病毒感染（COVID-19）中的诊断价值。方法 ：选取2023年1月―2月期间入住湖南省人民医院的COVID-19患者51例作为研究对象,根据《新型冠状病毒感染诊疗方案（试行第10版）》的临床分型标准,将其分为重症组27例和非重症组24例,同时收集体检健康者25例作为对照组。比较各组实验室指标变化,采用Pearson相关分析法来进行相关性研究,采用受试者工作特征（ROC）曲线分析KL-6预测COVID-19的诊断效能。结果 ：在新冠肺炎重症组患者中,降钙素原（PCT）、C反应蛋白（CRP）、白介素-6(IL-6)明显高于非重症组患者;同时,与对照组相比,新冠患者组白细胞计数（WBC）、中性粒细胞淋巴细胞比值（NLR）、KL-6水平也显著升高;在重症组患者中,WBC、NLR、KL-6明显高于非重症组;WBC、NLR与KL-6之间存在明显正相关;COVID-19患者疾病严重程度与血清KL-6水平成正相关。诊断COVID-19重症患者血清KL-6截断值为362.65 U/mL,对应的的灵敏度...     

卡托普利对病毒性心肌炎小鼠心肌能量代谢的保护作用

目的：探讨病毒性心肌炎(VMC)小鼠心肌能量产生状况，并用卡托普利进行干预治疗。方法：雄性Palb／c小鼠随机分为柯萨奇B3病毒(CVB3)感染组、CVB3感染加卡托普利治疗组和对照组。分别采用电镜和形态计量学方法观察心肌线粒体形态、数量和膜磷脂定位；酶细胞化学法分析线粒体细胞色素氧化酶(CCO)和琥珀酸脱氢酶(SDH)活性，反相高效液相色谱法测定心肌组织ATP、ADP和AMP含量。结果：感染组小鼠心肌线粒体大量破坏，膜磷脂严重缺失、定位改变，CCO和SDH活性降低，ATP、ADP和AMP含量下降。不同时间点治疗组上述各项指标均较感染组显著改善。结论：VMC心肌线粒体结构严重破坏、功能明显下降，卡托普利能有效保护VMC心肌线粒体结构和功能，改善心肌能量代谢。     

免疫比浊法检测糖化血红蛋白及其临床应用价值

糖化血红蛋白A1c(Glycosylate hemoglobin)是连接有己糖的HbAl。它是血红蛋白在高血糖的作用下发生缓慢而持久的非酶促糖化反应的产物。它的主要成分是HbAlc,反映的是测定前6～10周血糖的平均水平。它不受偶尔一次血糖升高或降低的影响,是反映糖尿病长期控制良好的指标。测定糖化血红蛋白的方法很多,作者应用免疫比浊法,在全自动生化分析仪上测定HbAlc的百分含量,得到了满意效果,现报道如下。     

肝纤维化大鼠血清体外诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞的分化

背景：近年来临床运用骨髓间充质干细胞移植治疗晚期肝纤维化取得了较好疗效,但由于肝源稀少,骨髓干细胞体外分化为成熟肝细胞的技术仍然不成熟。目的：探讨骨髓间充质干细胞体外诱导其分化为肝细胞的可行性。方法：构建大鼠肝纤维化模型,分离、纯化并鉴定大鼠骨髓间充质干细胞,制备正常及肝纤维化大鼠血清,取第3代骨髓间充质干细胞分组培养,分别加入以下培养基：DMEM＋体积分数10%胎牛血清;肝细胞生长培养基（HGM）＋体积分数5%胎牛血清;HGM＋5%正常大鼠血清;HGM＋5%肝纤维化大鼠血清;HGM＋5%肝纤维化大鼠血清＋25μg肝细胞生长因子。观察各组细胞形态变化,MTT法测定细胞生长曲线,采用Realtime-PCR检测甲胎蛋白和细胞角蛋白18的表达,溴甲酚绿法检测上清液中白蛋白水平,ELISA法检测培养上清液中转化生长因子β1表达。结果与结论：正常大鼠血清能促进骨髓间充质干细胞的增殖;肝纤维化大鼠血清对骨髓间充质干细胞促增殖作用最好,且能有效诱导其向肝细胞分化,联合使用肝细胞生长培养基能提高分化率。     

腺苷脱氨酶检测在肝病患者中的临床应用价值

【目的】探讨血清腺苷脱氨酶（ADA）在各种肝病患者的变化及临床价值。【方法】用酶偶联比色法测定各类肝病患者及健康对照者血清ADA及丙氨酸氨基转移酶（ALT）的活性,并进行比较法分析。【结果】各种肝病患者ADA、ALT与健康对照组相比均明显升高,肝硬化组ADA升高比ALT升高更为明显。急性肝炎、慢性活动性肝炎、肝硬化患者血清ADA明显高于健康对照组（P〈0.01）;慢性迁延性肝炎和肝癌患者血清ADA较健康对照组有所升高,但差异无显著性（P〉0.05）。【结论】ADA测定对肝脏疾病的诊断具有较高敏感性,对肝病的诊断、鉴别诊断有重要的临床意义。     

缺氧诱导因子-1在肝内胆管癌中的表达及其与血管内皮生长因子和微血管密度的关系

目的探讨肝内胆管癌组织中缺氧诱导因子-1（HIF-1α）的表达及其与VEGF的表达、微血管密度（MVD）及临床病理因素之间的关系。方法采用免疫组化方法检测56例胆管癌及20例癌旁正常肝内胆管中HIF-1α、VEGF的表达，用CD。单克隆抗体标记血管内皮细胞并计数MVD，分析其间的相关性及其与肿瘤临床病理特征之间的相关性。结果肝内胆管癌组织中HIF-1α和VEGF的阳性表达率显著高于正常组织（P〈O．05）；HIF-1α和VEGF的表达均与淋巴结转移和TNM分期呈正相关（P〈O．05）；HIF-1α的表达与VEGF的表达和MVD值呈正相关（P〈O．05）。结论HIF-1α在胆管癌组织中明显上调，与肿瘤血管生成、肿瘤转移及预后密切相关；提示检测HIF-1α可能成为判断胆管癌生物学行为及预后的重要指标，并作为临床控制胆管癌的作用靶点。