大鼠颈动脉球囊损伤局部A20基因转染后内皮细胞再生及血管超微结构的影响

目的:锌脂蛋白A20是核因子κB信号系统活化的产物.研究证实核因子κB的激活是球囊损伤动脉后血管狭窄发生的重要机制之一.实验拟脱察锌指蛋白A20对大鼠颈总动脉球囊损伤局部血管内皮再生和血管超微结构的影响.＃方法:实验于2006-03/2007-06在大连医科大学附属第二医院中心实验室完成.①实验材料:健康雄性SD大鼠42只,体质量350-400g.②分组及实验过程:采用随机数字表法将大鼠分为3组,每组14只.制备A20质粒DNA,建立大鼠颈总动脉球囊损伤模型(假手术组只进行颈动脉结扎,不进行球囊损伤术);对照组:球囊损伤术后局部灌注Lipofectamine 2000 Reagent TE缓冲液:治疗组:球囊损伤术后局部灌注Lipofectamine 2000 Reagent TE缓冲液 pCAGGS-GFP/A20重组质粒.A20质粒DNA在球囊损伤大鼠颈动脉的局部转染.③实验评估:荧光显微镜观察A20在损伤动脉壁的转染效率;伊文思蓝染色法评估损伤后颈动脉内皮再生情况:透射电镜观察血管超微结构改变.实验过程对动物的处理符合动物论理学标准.结果:①球囊损伤术和A20转染治疗后2周,治疗组再内皮化百分比大于对照组(P＜0.05).②假手术组大鼠颈动脉平滑肌细胞电镜下呈典型的"收缩表型";对照组球囊损伤后3d可见合成型细胞及过渡型细胞,7d血管平滑肌细胞表型发生明显改变,呈典型的"合成表型",治疗组术后7 d可见接近收缩型的血管平滑肌细胞.结论:局部转染A20基因可促进损伤血管内皮再生,抑制损伤处血管平滑肌细胞表型转化.     

银杏酮酯对心肌细胞Toll样受体4／核转录因子κB及血管紧张素原、血管紧张素Ⅱ1型受体的抑制作用

目的观察银杏酮酯50（GBE50）对脂多糖激活的心肌细胞Toll样受体4（TLR4）／核转录因子κB（NF-κB）信号及血管紧张素原（ATG）、血管紧张素Ⅱ1型受体（AT1R）表达的影响，探讨GBE50防治左室重构的作用机制。方法体外培养新生大鼠心肌细胞（NRVM），分4组：1）对照组：DMEM培养基中不加任何干预因素；2）脂多糖组：DMEM培养基中加入脂多糖1mg／L；3）脂多糖＋GBE50组：预先加入GBE5080mg／L，1h后加入脂多糖1mg／L；4）脂多糖＋咖啡酸苯乙酯组：预先加入咖啡酸苯乙酯20mg／L30min后加入脂多糖1mg／L。干预24h后免疫细胞化学方法观察NF-κBp65核易位情况；RT—PCR检测TLR4、ATG及AT1R、心肌肌球蛋白重链肛MHCmRNA的表达情况，考马斯亮蓝法测定心肌细胞蛋白含量。结果LPS刺激下NRVM TLR4mR—NA明显升高（P〈O．01），NF-κBp65核易位增多（P〈0．01），ATG和AT1R、心肌肌球蛋白重链p—MHCmRNA表达以及细胞蛋白含量明显增高（P〈O．01）。GBE50与咖啡酸苯乙酯能明显抑制NF-κBp65核易位，同时抑制LPS诱导的TLR4、ATG和AT1Rβ-MHCmRNA表达上调以及细胞蛋白含量的增加（P〈0．05）。结论GBE50可能通过抑制NF-κB活化，进而减弱TLR4／NF-κB信号从而抑制心肌RAS的激活，干预TLR4／NF-κB信号通路可能是银杏叶提取物防治心肌肥大的机制之一。     

CD40-CD40L在动脉粥样硬化及急性冠状动脉综合征的研究进展

近年研究表明冠心病是免疫参与的慢性炎症反应。免疫介质CD40及其配体广泛存在于T、B淋巴细胞、内皮细胞、平滑肌细胞、单核 /巨噬细胞、血小板及上皮细胞表面 ,二者相互作用可诱导上述细胞产生许多致炎因子 ,参与动脉粥样硬化的发生、发展及转归。阻断CD40 CD40L的相互作用可以抑制动脉粥样硬化 (AS)的发生与发展 ,为防治动脉粥样硬化和急性冠状动脉综合征 (ACS)提供新的治疗手段。     

Toll样受体4与动脉粥样硬化

动脉粥样硬化是一种慢性炎症疾病。Toll样受体家族(TLRs)识别抗原相关的分子模式(PAMPs)后激发先天性免疫反应。TLR4不仅识别外源性配体脂多糖(LPS),也识别动脉损伤过程中表达的内源性配体。越来越多的研究表明TLR4可能在动脉粥样硬化病变的发生和发展过程中发挥主要作用。现对近年有关TLR4在动脉粥样硬化中的作用的研究进展作一综述。此外,还将讨论对TLR4信号的可能干预措施。     

超声引导下穿刺活检鉴别病灶良恶性的价值探讨

目的探讨超声引导下穿刺活检(USGB)在病灶定性诊断中的价值。方法回顾性分析我院343例接受USGB肿物性质待查患者的临床及病理资料,计算其穿刺成功率、敏感性、特异性、误诊率、漏诊率、阳性预测值、阴性预测值、准确率、Youden指数、阳性似然比、阴性似然比及Kappa值。结果 343例患者共343个病灶,其中325个穿刺标本获得明确定性诊断,穿刺成功率94.75%。经术后病理证实,恶性202个,良性141个,USGB误诊10个,漏诊14个,准确率93.00%(319/343),敏感性、特异性、误诊率、漏诊率、阳性预测值、阴性预测值、Youden指数、阳性似然比及阴性似然比分别为93.07%(188/202)、92.91%(131/141)、7.09%(10/141)、6.93%(14/202)、94.95%(188/198)、90.34%(131/145)、85.98%,13.12及0.07。USGB与金标准比较总体一致性好(Kappa=0.86)。结论 USGB穿刺成功率高,诊断病灶良恶性准确率高,与金标准一致性好,对临床诊断及指导治疗有重要价值。     

阿托伐他汀对急性ST段抬高型心肌梗死患者尿激酶溶栓疗效的影响

目的观察溶栓前首次剂量80 mg阿托伐他汀对于ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者尿激酶溶栓治疗后冠状动脉再通情况、炎症因子水平以及近期主要不良心血管事件的影响。方法选取82例接受急诊溶栓的STEMI患者,随机分为阿托伐他汀高剂量组和常规剂量组,高剂量组(39例)在溶栓前给予阿托伐他汀80 mg顿服,常规剂量组(43例)给予阿托伐他汀20 mg顿服,随后立即给予尿激酶150万U,30 min内滴注;此后两组均给予阿托伐他汀每晚20 mg口服及常规治疗药物。观察两组溶栓治疗的疗效、治疗前后患者体内炎症指标超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平的变化以及随访1个月内心血管事件的发生率。结果 (1)与常规剂量组比较,胸痛缓解时间和2 h内ST段回降程度,差异无统计学意义(均为P>0.05);而酶峰出现时间[(12.4±1.3)h比(13.3±1.7)h]和再灌注心律失常出现时间[(1.3±0.2)h比(1.5±0.2)h]均具有统计学意义(均为P<0.05)。高剂量组冠状动脉血管再通率(72%)较常规剂量组冠状动脉血管再通率(63%)增高,差异有统计学意义(P=0.01)。(2)服药前高剂量组与常规剂量组hs-CRP水平比较无统计学意义(P=0.09);服药后1周[(3.32±0.28)mg/L比(3.88±0.29)mg/L],具有统计学意义(P=0.03)和2周[(2.02±0.32)mg/L比(2.97±0.28)mg/L],差异均有统计学意义(P=0.02);且高剂量组服药1周、2周后的hs-CRP水平与治疗前的差值均比常规剂量组小,差异有统计学意义(均为P<0.05)。(3)随访1个月,与常规剂量组比较梗死后心绞痛发生率、心力衰竭发生率、再发性心肌梗死发生率、心律失常发生率及心脏性死亡发生率,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论 STEMI患者溶栓前应用首剂80 mg阿托伐他汀可显著增加溶栓再通率、缩短冠脉开通时间、降低患者体内hs-CRP水平,但对于近期1个月心血管事件的发生无明显影响。     

RNAi 特异性抑制A20基因对H2O2诱导人脐动脉血管平滑肌细胞增殖的影响

背景：锌指蛋白A20是近年来细胞内源性保护机制研究的新靶点,目前研究表明锌指蛋白A20抑制肿瘤坏死因子,脂多糖等多种炎性细胞因子诱导核因子κB信号通路激活所引起的血管平滑肌细胞增殖,但有关A20抗细胞氧化损伤方面的影响报道甚少。 目的：观察锌指蛋白A20基因干扰对H2O2诱导的人脐动脉血管平滑肌细胞增殖和细胞核中核因子κB表达的影响及可能的分子生物学机制。 设计、时间及地点：随机对照实验,于2007-03/2008-06在大连医科大学附属第二医院中心实验室完成。 材料：体外培养人脐动脉血管平滑肌细胞,构建针对Genbank中人A20的基因序列,采用脂质体LipofectamineTM2000介导80pmol siRNA,6 μL转染。 方法：将培养的第4代人脐动脉血管平滑肌细胞随机分6组,①空白组：培养基培养,未给与任何干预。②A20siRNA组：转染A20siRNA 24 h。③scramble siRNA组：转染阴性对照scramble siRNA 24 h。④H2O2组：H2O2持续刺激6 h。⑤H2O2＋A20siRNA组：转染A20siRNA 24 h后H2O2持续刺激6 h。⑥H2O2＋scramble siRNA组：转染阴性对照scramble siRNA 24 h后H2O2持续刺激6 h。 主要观察指标：以RT-PCR,Western-blotting检测A20基因表达变化,以四甲基偶氮唑蓝方法测定细胞增殖活性,以流式细胞技术观察血管平滑肌细胞细胞周期的变化,以Western-blotting检测细胞核中核因子κB p65的蛋白含量表达。 结果：H2O2组细胞增殖率明显高于空白组,但低于H2O2＋A20siRNA组(P < 0.05)。H2O2组S期、G2/M期构成百分比,增殖指数均较空白组明显升高,然而较H2O2+A20siRNA组明显降低(P < 0.05),空白组A20mRNA与蛋白有微弱表达,A20siRNA组较空白组表达减少(P < 0.05);H2O2组A20mRNA与蛋白表达明显高于空白组但显著低于H2O2+A20siRNA组(P < 0.05)干扰效率大约55%。细胞核中核因子κB p65有少量表达;A20siRNA干扰后核因子κB p65含量明显增加;H2O2刺激后核因子κB p65表达含量显著增加但明显低于H2O2+A20siRNA组(P < 0.05)。 结论：A20基因可抑制H2O2损伤诱导的血管平滑肌细胞的增殖,其分子机制可能通过其负反馈抑制了核因子κB介导的信号转导途径。     

肝硬化上消化道出血92例临床分析

目的探讨肝硬化上消化道出血的原因及其与肝功能损害程度的关系。方法对92例肝硬化上消化道出血患者行急诊胃镜检查,发现病因。结果在92例肝硬化并发上消化道出血患者中,食管胃底静脉曲张破裂出血占52．2％,门脉高压性胃病出血占22．8％,肝源性溃疡出血占20．7％;肝功能A级与B级和C级患者出血原因差异显著。结论食管胃底静脉曲张破裂出血是肝硬化上消化道出血的主要原因,门脉高压性胃病和肝源性溃疡也是不可忽视的出血原因。     

阳离子脂质体介导的Ａ20基因转染人外周血单核细胞的可行性

目的探讨阳离子脂质体介导的A20基因转染人外周血单核细胞的可行性及最佳转染条件。方法采用脂质体LipofectamineTM2000包裹pCAGGS-GFP／A20质粒转染人外周血单核细胞,通过荧光显微镜检测GFP报告基因,RT-PCR检测A20基因表达。结果应用LipofectamineTM2000介导的A20基因转染人外周血单核细胞,在2×10 6／L细胞接种浓度,脂质体与质粒的量之比为4μl：3μg时,转染效果最佳,RT-PCR证实成功获得A20目的基因的表达。结论脂质体转染法可介导A20基因在人外周血单核细胞获得表达,该研究为A20基因转染的相关实验研究提供参考依据。     

2型糖尿病合并冠心病患者血小板表面CD62P和CD40L的表达水平

目的 探讨2型糖尿病合并冠心病患者血小板表面CD62P和CD40L的表达水平及其和血清高敏C反应蛋白的关系.方法 选择单纯冠心病患者34例、单纯2型糖尿病患者33例、2型糖尿病合并冠心病患者30例及对照者30例,采用流式细胞术分别检测血小板表面CD62P和CD40L的表达水平,并与血清高敏C反应蛋白作相关分析.结果 2型糖尿病合并冠心病组血小板CD62P、CD40L和高敏C反应蛋白水平较对照组、单纯冠心病组及单纯2型糖尿病组显著升高(P<0.01),血小板CD62P和CD40L与血清高敏C反应蛋白水平呈正相关(r分别为0.343和0.495,P均<0.05).结论 2型糖尿病合并冠心病患者的血小板表面CD62P和CD40L表达水平明显升高,并与血清高敏C反应蛋白明显正相关.血小板表面CD62P和CD40L的表达水平可能是预示糖尿病患者合并冠状动脉粥样硬化的重要指标.