细胞外囊泡在肿瘤液体活检诊断中应用价值

<正>细胞外胞囊(extracellular vesicles,EVs)是由活细胞释放到微环境中的直径30~1 000 nm的小囊泡,通过旁分泌等方式介导细胞与细胞之间的信息传递[1]。不同来源的EVs由于其携带的分子不同,生物学功能也不同~[1-2],如免疫细胞来源的EVs携带的分子,可调节微环境中的免疫功能;肿瘤来源的EVs可诱导肿瘤细胞增殖、改变肿瘤的微环境、促进肿瘤侵袭与转移。尽管,目前也存在一些问题,比如如何有效分离肿瘤患者体液中的EVs。然     

姜黄素对人结肠癌细胞PI3-K/Akt和MEK/ERK信号通路的影响

目的:探讨姜黄素对人结肠癌RKO细胞PI3-K/Akt和MEK/ERK通路的影响。方法:MTT法检测细胞活力,Western blot检测p-Akt、Akt、p-ERK,ERK及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果:姜黄素作用人结肠癌RKO细胞,24h和48h的IC50值分别为51.69μg/ml和36.12μg/ml。选用50μg/ml的姜黄素分别作用24h和48h,RKO细胞凋亡百分比为26.79%和42.16%,与对照组相比有显著差异(P＜0.05)。进一步检测发现姜黄素（50μg/ml）显著下调了p-Akt 和p-ERK的表达,同时Bcl-2与Bax的比值显著下调。结论:姜黄素可能通过抑制PI3-K/Akt和MEK/ERK信号通路的活化、下调Bcl-2与Bax的比值,从而抑制RKO细胞增殖和诱导细胞凋亡。     

ERK信号通路参与RANKL诱导的乳腺癌细胞迁移

目的：探讨细胞外调节蛋白激酶（ERK）信号通路在RANKL诱导的乳腺癌细胞迁移中的作用.方法：流式细胞术检测MDA-MB-231细胞表面RANK蛋白的表达;western-blot检测RANKL刺激后磷酸化ERK（P-ERK）及ERK的表达;Transwell法测定RANKL刺激后细胞迁移能力的改变.结果：MDA-MB-231细胞表达RANK蛋白,RANKL诱导MDA-MB-231细胞迁移能力增强.RANKL刺激后MDA-MB-231细胞P-ERK表达升高,PD98059抑制RANKL诱导的细胞迁移.结论：ERK信号通路参与RANKL诱导的乳腺癌细胞迁移.     

西妥昔单抗治疗RAS野生型结肠癌骨髓转移二例

结肠癌是我国常见的恶性肿瘤之一,晚期疾病以血行转移为主,常见转移部位为肝脏和肺,其次为淋巴结转移和种植转移,发生骨髓转移者临床上极为少见,对其治疗的相关报道亦较少。本文介绍本科经治的2例RAS野生型结肠癌伴骨髓转移患者,应用西妥昔单抗治疗后有一定疗效,现将临床资料及治疗经过分享给大家。     

蟾蜍灵联合ATRA诱导HL-60细胞分化并上调Syk表达

目的:观察低剂量蟾蜍灵、全反式维甲酸(All-trans retinoic acid,ATRA)单药或联合应用对HL-60细胞增殖及分化的影响,同时检测上游通路Syk表达的变化.方法:流式细胞仪技术检测CD11b表达;Western Blot检测Syk和Tubulin表达.结果:与对照组相比,低剂量蟾蜍灵、ATRA或联合用药不同程度地抑制HL-60细胞增殖,同时蟾蜍灵联合ATRA以时间依赖性的方式诱导HL-60细胞分化,并伴有Syk表达上调,但是Syk的酪氨酸磷酸化并未受影响.结论:Syk表达上调可能参与调节低剂量蟾蜍灵联合ATRA对HL-60细胞的分化诱导作用.     

β-榄香烯对肾癌786-0细胞凋亡的影响及其机制探讨

目的观察β-榄香烯对肾癌786-0细胞凋亡的影响,并探讨其可能机制。方法使用不同浓度β-榄香烯作用于786-0细胞24 h,MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,W estern b lot法检测细胞内磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）及总Akt。结果随β-榄香烯浓度增大,细胞存活率逐渐降低,细胞凋亡率明显增加,细胞内p-Akt表达水平逐渐降低,均呈一定浓度依赖性（P均〈0.05）。结论β-榄香烯可诱导肾癌细胞凋亡,其机制可能为抑制PI3K/Akt通路活性。     

蛋白酶体抑制剂硼替佐米对胃癌SGC7901细胞的抗肿瘤作用及其机制

目的:研究蛋白酶体抑制剂硼替佐米对胃癌SGC7901细胞凋亡及细胞周期分布的影响,并进一步探讨其作用机制.方法:1-500 nmol/L的硼替佐米作用于人胃癌SGC7901细胞24-48 h,MTT法检测细胞存活率,流式细胞术PI染色检测细胞凋亡.Western blot检测多聚ADP-核糖聚合酶(PARP)和casp...     

蟾蜍灵在诱导HL-60细胞凋亡时对SYK和CBL家族蛋白的影响

为了探讨酪氨酸蛋白激酶SYK和CBL家族泛素连接酶在蟾蜍灵诱导HL-60细胞凋亡过程中的作用机制,采用台盼蓝染色检测细胞活力,采用流式细胞术检测细胞凋亡,采用Western blot和免疫沉降技术检测CBL、CBL—b表达和SYK的磷酸化。结果显示,蟾蜍灵以时间和剂量依赖方式抑制HL-60细胞增殖,24、48和72小时抑制细胞活力的IC50浓度分别约为26．3,7．8和2．0 nmol／L。高剂量蟾蜍灵从8小时即开始诱导HL-60细胞凋亡;与此同时蟾蜍灵快速活化SYK,并以时间依赖的方式下调CBL和CBL—b表达。结论：SYK活化及CBL家族蛋白表达下调可能参与蟾蜍灵对HL-60细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用。     

蟾蜍灵诱导K562细胞分化和凋亡过程中WT1表达的下调

目的：研究蟾蜍灵在诱导K562细胞分化和凋亡中对WT1基因的凋节作用。方法：采用锥虫蓝拒染法测定细胞增殖活力；采用形态学观察、流式细胞术分析和NBT还原试验检测细胞分化和细胞凋亡；采用Western blot和RT－PCR检测WT1蛋白和mRNA的表达。结果：（1）蟾蜍灵抑制K562细胞的增殖，24，48和72h的IC50分别为0．026，0．032和0．006μmol/L。（2）蟾蜍灵浓度在0．01－0．05μmol/L可明显诱导K562细胞向单核／巨噬细胞分化，大于0．260μmol/L 时可明显诱导细胞凋亡。（3）细胞分化早期和细胞凋亡发生前，蟾蜍灵明显下调K562细胞WT1 mRNA和蛋白的表达。结论：蟾蜍灵诱导K562细胞向单核／巨噬细胞分化和细胞凋亡可能与其对WT1的下调有关。     

Cbl-b shRNA稳定转染乳腺癌MDA-MB-231细胞系的构建

目的构建靶向Cbl-b基因的短发夹环RNA（shRNA）真核质粒表达载体,建立Cbl-b shRNA稳定转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞系,为探讨Cbl-b的生物学功能奠定基础。方法设计Cbl-b shRNA序列BLAST进行同源性分析。化学合成法合成shRNA序列,将配对的单链合成双链,以T4连接酶连接于pSilencerTM 4.1-CMV表达载体,加入感受态细胞。将菌液涂布于含有氨苄青霉素的LB平板,筛选阳性菌落,测序确认后进行大量复制、扩增,提取重组质粒。脂质体法将上述质粒转染至MDA-MB-231细胞中,G418持续压力选择和有限稀释法获得稳定转染的细胞系。结果 DNA测序证实靶向Cbl-b基因的shRNA真核质粒表达载体构建正确,G418压力筛选出阳性克隆,Western blot检测发现MDA-MB-231/Cbl-b shRNA转染细胞株中Cbl-b蛋白表达水平明显下调。结论成功构建了基因沉默Cbl-b的MDA-MB-231细胞株,为进一步探讨其生物学功能奠定实验基础。