抗狂犬病病毒CVS-11株单克隆抗体的制备及鉴定

目的 制备抗狂犬病毒单克隆抗体,为建立快速准确的狂犬病毒抗原检测方法奠定基础.方法 将狂犬病病毒CVS-11株纯化浓缩后免疫6～8周龄雌性BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经细胞克隆和间接ELISA筛选,获得稳定分泌抗狂犬病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株.小鼠腹腔注射法制备大量单克隆抗体并测定腹水效价,用G蛋白亲和层析柱进行纯化,间接ELISA法和间接荧光法鉴定单克隆抗体的类型、特异性及敏感性.结果 细胞融合率达100%,经克隆筛选获4株稳定分泌抗狂犬病病毒抗体的杂交瘤细胞株,其腹水效价分别为1×104,1×105,1×104和1×105;4株单抗均为IgG类型且特异性好.结论 制备的单抗具有良好特异性和敏感性.     

细胞适应株狂犬病病毒反向遗传系统辅助质粒的构建

目的 构建细胞适应株狂犬病病毒反向遗传系统中所需的4个结构蛋白辅助质粒.方法 利用RT-PCR方法扩增细胞适应株狂犬病毒的核蛋白(N)、磷酸化蛋白(P)、糖蛋白(G)、转录大蛋白(L)基因,测序结果正确后,分别连接表达载体,构建反向遗传所需的4个功能性蛋白辅助质粒.结果成功扩增4个结构基因,经测序完全正确,并成功构建反向遗传体系中N蛋白、P蛋白、G蛋白、L蛋白的辅助表达质粒,酶切鉴定完全正确.结论 成功构建狂犬病病毒拯救系统的4个辅助质粒,为此细胞适应株狂犬病病毒的拯救奠定基础.     

人C-myc乳腺定位表达转基因小鼠模型的建立

以ｐＣＡＴ ＷＡＰ和ｐＷＭ为原始质粒 ,构建ＷＡＰ启动子调控ｃ ｍｙｃ的乳腺组织特异性表达载体ｐＷＣＳ。载体用Ｂｇ1Ⅱ +ＢａｍＨⅠ酶切 ,回收基因片段 3 5ｋｂ的ＷＡＰ ｃ ｍｙｃｌ ＳＶ4 0 ＰｏｌｙＡ ,通过显微注射方法导入Ｃ57ＢＬ 6Ｊ×ＤＢＡ 2ＪＦ1 代小鼠受精卵的雄原核内。共注射 10 0 0枚卵 ,将存活的约 6 0 0枚卵分别移植至 2 9只假孕母鼠输卵管内 ,获得仔鼠 4 5只。ＰＣＲ检测 ,阳性鼠 9只 ,Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ检测 ,阳性鼠 3只 ,其中 1只母鼠 ,2只公鼠 ,在饲养过程中 ,1只母鼠意外死亡。对 2只转基因公鼠的Ｆ1代ＰＣ…