胶质瘤碱性蛋白iRNA激活的小鼠脾细胞中c-myc,IL-2和IFN-γ基因的表达

作者采用分子杂交技术观察了经胶质瘤碱性蛋白iRNA激活的小鼠脾淋巴细胞中c-myc,IL-2和IFN-γ基因mRNA水平的动态变化.结果表明,iRNA能在相应抗原存在下激活小鼠脾淋巴细胞表达c-myc,IL-2和IFN-γ基因;c-myc基因在细胞刺激后3-6 h表达最高.IL-2和IFN-γ基因在细胞刺激后12 h表达最高.     

人白细胞介素－2基因真核表达载体构建

人白细胞介素－２基因真核表达载体构建郑强，范清宇，殷剑宁，惠宏襄（第四军医大学唐都医院骨科西安７１００３８第四军医大学生物化学教研室）关键词白细胞介素－２，基因治疗，逆转录病毒载体中图号０７８４白细胞介素－２（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ，ＩＬ－２）是Ｔ细...     

生物技术专业《生物治疗学》教学的心得体会

《生物治疗学》现已成为我校生物技术专业的一门必修的专业课程,作者结合自己在《生物治疗学》课程教学中的亲身体会,对教学时间、教材选择、教学内容、教学方式及考核方式等方面进行了深入的探讨和总结。     

反义人Cyclin D1 基因真核表达载体的构建与鉴定

反义人ＣｙｃｌｉｎＤ１基因真核表达载体的构建与鉴定陈兵张学庸樊代明惠宏襄１金明１王成济１（第四军医大学西京医院消化内科１生化教研室，西安７１００３２）细胞增殖周期失控是恶性肿瘤呈现无限制增殖的重要原因。目前对细胞周期调控的机制尚不十分清楚，但已发现周...     

血管内皮生长因子及其受体在卵巢癌中表达的免疫组化检测

目的： 检测血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ） 及其受体（ＫＤＲ） 在卵巢癌中的表达, 并探讨其与卵巢癌发生的关系。方法： 采用ＳＡＢＣ免疫组化染色法, 对６６ 例卵巢肿瘤中, ＶＥＧＦ 和ＫＤＲ 的表达进行检测。结果： 恶性、交界性及良性卵巢肿瘤中, ＶＥＧＦ 和ＫＤＲ 的表达率分别为７２－９％ 、７５－００ ％ 、３８－４６ ％ 及５４－０５％ 、４３－７５％ 、７－６９ ％ ; 恶性肿瘤及交界性肿瘤ＶＥＧＦ和ＫＤＲ的表达, 明显高于良性肿瘤（Ｐ＜ ０－０５） 。ＫＤＲ 不仅表达于肿瘤血管内皮细胞, 在肿瘤细胞内也有强表达。有淋巴结转移的卵巢癌ＶＥＧＦ 的表达与无淋巴结转移者相比较, 有显著差异（Ｐ＜ ０－０５）; ＫＤＲ 的表达与卵巢癌淋巴结转移无关（Ｐ＞ ０－０５）; 卵巢癌的不同临床分期、病理类型及病理分级间ＶＥＧＦ和ＫＤＲ的表达, 无显著性差异（ Ｐ＞ ０－０５） 。结论： ＶＥＧＦ和ＫＤＲ 的表达可能与卵巢癌的发生有关。     

人反义VEGF基因表达载体的构建及其对卵巢癌细胞增殖的影响

目的：构建人反义VEGF基因真核表达载体,进行抗血管生成治疗卵巢癌实验。方法：RT－PCR法获得人VEGF基因,将VEGF基因反向克隆入真核表达载体pcDNA3中,酶切鉴定结果。用此真核表达载体转染人卵巢癌细胞HO－8910,G418筛选获得阳性克隆,RNA斑点杂交鉴定HO－8910细胞中VEGF表达。Western blot及间接免疫荧光法检测转染前后HO－8910 细胞中VEGF蛋白表达。检测转染前后瘤细胞的生物学性状及裸鼠体内致瘤性。结果：RT－PCR法得到VEGF基因,并获得反向构建的VEGF真核表达载体。VEGF反义RNA部分阻断了HO－8910细胞中VEGF表达,转染后单个细胞的克隆形成能力明显减弱;细胞周期中,G1期细胞增多,S期细胞减少,细胞增殖能力降低;形态学超微结构显示细胞器扩张和肿胀,核染色质边集,凝集成块,可见明显的凋亡改变。裸鼠体内致瘤性降低。结论：成功构建了反义VEGF基因真核表达载体,该载体可明显抑制卵巢癌细胞增殖,为卵巢癌的基因治疗提供了一定的实验依据。     

可诱导型真核表达载体的构建及其表达效率的测定

目的：利用ＭＴ－Ⅱ启动子的Ｚｎ＾２＋诱导表达特性,构建含多克隆位点的可诱导型真核表达载体ｐＭＤＮＡ３－ｎｅｏ,并用荧光素酶报告基因（ｌｕｃ）检测其表达效率。方法：用分子克隆方法构建载体,并将ｌｕｃ基因克隆到其多克隆位点内,转染胃癌细胞ＳＧＣ７９０１,Ｇ４１８筛选出稳定克隆,分别在不同浓度ＺｎＳＯ４级不同诱导时间下进行诱导表达和测定,并检测不同单细胞株的表达效率。     

逆转录病毒载体表达的TGFα反义RNA对人脑胶质瘤细胞BT325的生长抑制作用

逆转录病毒载体表达的ＴＧＦα反义ＲＮＡ对人脑胶质瘤细胞ＢＴ３２５的生长抑制作用惠宏襄，王成济，金明，赵小宁，胡敏西安第四军医大学（７１００３２）转化生长因子α（ＴｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒ，ＴＧＦα）是一种小肽分子，其成熟体由５０...     

转染IL－2cDNA在膀胱肿瘤细胞表达及其生物学行为的实验研究

作者报道逆转录病毒载体介导的人白细胞介素－２（ＩＬ－２）ｃＤＮＡ在人源性膀胱肿瘤细胞Ｔ２４中的表达及对其生物学行为的影响。用磷酸钙沉淀法把ＩＬ－２ｃＤＮＡ转入Ｔ２４细胞，经原位杂交、免疫细胞化学和生物学活性测定，证明转染成功并表达有生物活性的ＩＬ－２，观察４０天，其分泌ＩＬ－２的量为８～３２ｕ／ｍｌ／１×１０５细胞／２４小时。转染并表达ＩＬ－２ｃＤＮＡ，对Ｔ２４的生长曲线无明显影响。但在软琼脂中细胞体积减小，裸鼠致瘤力下降