敲低和敲除OPTN基因SKOV3细胞的构建及其对抗癌药物敏感性的影响

目的利用RNA干扰技术建立稳定敲低OPTN蛋白的人SKOV3细胞株和利用CRISPR/Cas 9基因编辑技术建立稳定敲除OPTN蛋白的人SKOV3细胞株,并研究降低OPTN基因表达对细胞抗癌药物敏感性的影响。方法针对OPTN基因设计shRNA和sgRNA的序列,并与慢病毒载体质粒pGPU 6_GFP_Neo和敲除质粒PX 459载体连接产生重组载体。并将重组的质粒测序验证,将测序成功的重组质粒载体与包装质粒(psPAX 2、pMD 2.G)共转染293 T细胞进行病毒包装,收集病毒上清液并感染SKOV3细胞,获得稳定敲低和稳定敲除OPTN基因的SKOV3细胞株。RT-PCR检测敲低组OPTN基因的表达的变化,PCR检测敲除组的基因组DNA的变化,Western blot法分析检测OPTN蛋白的表达情况。MTT法检测DDP对卵巢癌细胞增殖的影响,qRT-PCR检测caspase3、Bax、Bcl-2的mRNA的表达情况,Western blot检测caspase3、Bax、和Bcl-2蛋白的表达情况。结果成功构建慢病毒载体和基因敲除载体,在SKOV...     

失效模式和效应分析在微泵用药安全管理中的应用

目的 探讨失效模式和效应分析在微泵用药安全管理中的应用效果.方法 运用失效模式和效应分析对微泵用药流程进行系统分析,计算风险优先指数(RPN)值查找高危环节,制定并实施改进方案.结果 实施FMEA后,微泵用药护理安全事件发生率从2.36％下降至0.95％,与实施前比较,差异有统计学意义(p<0.05),7个高危环节的R...     

急性A型主动脉夹层术后脑梗死危险因素分析及风险评分模型构建

目的 分析急性A型主动脉夹层(ATAAD)患者术后新发脑梗死的危险因素,并基于此建立风险评分.方法 回顾性分析经CT血管成像(CTA)确诊且行外科手术的174例ATAAD患者临床资料,以术后有无新发脑梗死将所有患者分成2组,即脑梗死(+)组和脑梗死(-)组.记录所有患者与术后新发脑梗死相关的临床影像资料.先行单因素分析...     

Gli-2 在胸腺肿瘤组织中的表达及其与Ki-67的关系

目的：探讨Gli- 2 蛋白和核增殖标志物Ki-67与胸腺肿瘤的临床病理特征及预后的关系。方法：采用免疫组织化学方法,检测64例胸腺肿瘤（9 例A 型、6 例AB型、11例B 1 型、22例B 2 型及16例C 型）组织中Gli- 2 及Ki-67蛋白的表达情况。结果：1）Gli- 2 在胸腺瘤A 、AB、B 1、B 2、C 型的阳性率分别为1/ 9（11.11%）、2/ 6（33.33%）、2/ 11（18.18%）、5/ 22（22.73%）、13/ 16（81.25%）,表达差异有统计学意义（P < 0.05）;Gli- 2 阳性率在Masaoka分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期中分别为2/ 10（20%）、12/ 41（29.27%）、4/ 6（66.67%）、5/7（71.43%）,表达差异有统计学意义（P < 0.05）;2）患者肿瘤组织中Gli- 2 的高表达与性别、年龄、出血坏死及合并重症肌无力（myasthenia gravis,MG ）无相关性,但与肿瘤是否侵及胸膜密切相关;3）Ki-67在侵袭性胸腺瘤与非侵袭性胸腺瘤中的阳性标记指数
（LI ）分别为7.14± 6.99、15.24± 9.13,差异具有明显统计学意义（P < 0.05）,Ki-67在胸腺瘤中的表达与Gli- 2 的表达呈正相关（r s =0.529,P < 0.05）;4）Gli- 2 阳性组患者5 年无进展生存率（PFS）56.5%（13/ 23）较阴性组的5 年无进展生存率92.7%（38/ 41）低,Ki-67阳性组的胸腺肿瘤患者5 年无进展生存率61.5%（16/ 26）也较阴性组的5 年无进展生存率92.1%（35/ 38）低,且差异具有统计学意义（P < 0.05）。 Cox 比例风险回归模型分析结果显示,Gli- 2 阳性、Ki-67阳性、有胸膜侵袭是影响胸腺肿瘤患者预后的独立危险因素。结论：Gli- 2 与Ki-67在胸腺肿瘤组织中的表达呈正相关,检测二者的表达对判断胸腺肿瘤患者的临床特征及预后有一定提
示作用。     

缺氧下软骨细胞失分化过程中胶原蛋白脯氨酰4-羟化酶的作用研究

目的观察缺氧对软骨细胞体外培养时的失分化过程的影响,探讨胶原蛋白脯氨酰4-羟化酶(collagen prolyl 4-hydroxylases,C-P4Hs)在其中的作用。方法对软骨细胞进行不同浓度的COCl2处理,筛选用于缺氧诱导的最佳COCl2浓度为100 μmol/L后,将小鼠肋软骨细胞分为:常氧组、缺氧组,分别检测第3代0.5-72 h及1、3、5、7代于72 h的各项指标。使用CCK8法及细胞计数测定增殖率,RT-qPCR、免疫荧光染色、Western blot检测各组HIF-1α、P4Hα1、P4Hα2和Col-II的动态变化。结果肋软骨细胞在不同浓度COCl2条件下培养48 h,100 μmol/L的COCl2组增殖率最高,呈典型的铺路石状;当COCl2浓度>150 μmol/L时,增殖率(P<0.05)降低。常氧与缺氧下诱导肋软骨细胞0-72 h,RT-qPCR显示缺氧组P4Hα2、ColⅡmRNA表达升高(P>0.05)。免疫荧光显示缺氧下HIF-1α与P4Hα2累积于胞核内,P4Hα2逐渐由胞核进入胞浆中。Western-blot显示缺氧组HIF-...     

青少年长骨恶性肿瘤长节段骨缺损的重建技术

目的探讨青少年四肢长骨恶性肿瘤切除后长节段骨缺损修复重建的方法及其疗效评价。方法回顾性分析2015年4月至2019年10月共10例进行骨缺损修复重建的四肢长骨超长病灶骨恶性肿瘤患儿病例资料,其中男4例,女6例,年龄10.2岁(范围6～16岁)。骨肉瘤7例,尤文肉瘤3例;肱骨肿瘤2例,股骨肿瘤7例,胫骨肿瘤1例。肿瘤切除后骨缺损占病变骨全长的比例为80.9%(范围71.4%～89.3%)。考虑青少年涉及骨骺生长问题,手术在保证肿瘤扩大切除的前提下,采用自体腓骨移植、传统假体结合钢板、3D打印设计保留关节骨骺的超长假体,并在假体与骨结合端做3D打印骨小梁的骨长入处理,两端保留骨骺的短力臂设计辅助钢板及交锁螺钉增强稳定性。主要观察X线片及CT检查评估假体重建稳定性及骨连接端3D打印处理处骨长入情况,同时评估患者术后功能评分评价疗效。结果 10例均顺利完成手术,术中无神经、血管损伤等并发症发生。随访5～58个月,平均随访22.9个月。1例术后2年复查X线片示移植腓骨有骨吸收迹象,内固定位置良好无明显异常;2例术后1年半至2年内出现辅助钢板断裂,给予更换断裂钢板目前内固定良好。按照国际保肢学会的...     

面部玻璃肉芽肿1例

<正>1病历摘要患者女,40岁,面部包块1年余。患者1年前无意中发现右侧面颊有一红豆大结节,无疼痛及瘙痒等不适,未予重视。近半年来,包块逐渐长大,有压痛,遂于2019年2月15日来我科就诊。体格检查:患者右侧面颊可见3条长2～3 cm的疤痕,其中可见1个直径约1.5 cm的类球形结节(图1),界限清晰,质地坚硬,按压后患者有明显异物感及疼痛,可推动,结节表面光滑,无溃疡及窦道,无分泌物渗出。皮损周围组织无明显红肿、疼痛,皮肤温度不高。追问病史得知,患者8年前因车祸伤及头面部,在当地医院行清创缝合治疗。头颅计算机体层成像(CT)平扫检查:右侧面部皮下异物(图2)。血常规、血凝、HIV及梅毒抗体等检查无异常后,于2019年2月18日在局部麻醉下行右侧面颊结节切除术。沿结节边缘做一长约2.5cm的梭形切口,完整切除结节及少许周围组织。     

Apelin-13对高尿酸诱导的脂肪细胞氧化应激的作用

目的:探讨apelin-13对高尿酸诱导的3T3-L1脂肪细胞氧化应激的作用及其机制。方法:3T3-L1脂肪细胞予以10 mg/dL尿酸刺激,部分细胞予以1μmol/L apelin-13预处理,以100μmol/L H₂O₂刺激的细胞为阳性对照。48 h后,流式细胞术检测活性氧族(ROS)含量,生化试剂盒检测细胞及培养液上清抗氧化酶[超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)]和促氧化酶NADPH氧化酶(NOX)的活性以及丙二醛(MDA)含量,real-time PCR法检测细胞局部肾素-血管紧张素系统(RAS)各组份血管紧张素原(AGT)、血管紧张素转化酶I(ACE1)、血管紧张素II 1型受体(AT1R)和AT2R及血管紧张素II 1型受体相关蛋(APJ)的mRNA表达水平,ELISA法检测细胞及培养液中血管紧张素II(AngⅡ)浓度。结果:10 mg/dL的尿酸明显降低3T3-L1脂肪细胞SOD、GSH-Px和CAT的活性,升高NOX的活性,增加MDA的含量,细胞内ROS的含量相应升高;apel...     

Stargardt病1型的治疗研究现状与进展

Stargardt病（STGD）是最常见的遗传性黄斑营养不良,多在儿童期或青少年期发病,几乎所有患者都会出现不可逆的视力下降。其中以1型STGD (STGD1）最为常见,是由于 Abca4基因突变引起的常染色体隐性遗传疾病。近年来,针对STGD1的治疗研究取得了令人鼓舞的进展,其中C20氘化维生素A（ALK-...     

医疗机构肠道门诊设置策略指标

目的在霍乱低流行状态下,修订肠道门诊设置策略和设置指标。方法通过对74名专家进行两轮专家咨询法制定肠道门诊设置的策略、指标体系。采用层次分析法和比例分配法,分别确定一级指标和二级指标的权重。结果制定监测预警、公共卫生职能、消毒及院内感染控制、政府职能、治疗、肠道门诊设置、作用评估、人员和设备8个一级指标及权重;一级医院14个二级指标及权重;二、三级医院20个二级指标及权重。结论通过专家咨询法制定的肠道门诊设置策略和指标体系科学可信,能指导合理分配医疗资源,对卫生行政部门重新制定肠道门诊设置策略和指标体系具有指导意义。