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兔骨髓基质细胞的体外培养及鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
背景:骨髓基质细胞的分离纯化、细胞培养、细胞标记、诱导因子、基因转染对细胞生物学影响、细胞载体构建及细胞复合物回植时间的选择等尚处于实验研究阶段。
目的:摸索一种较为简便且可有效获得骨髓基质细胞的体外培养方法。
设计、时间及地点:细胞学体外实验,于2006-06/2007-01在中国科学院北京基因组研究所完成。
材料:SPF级6周龄新西兰大白兔8只,由中国科学院遗传发育研究所实验动物中心提供。
方法:无菌条件下抽取兔骨髓1 mL,D-Hanks液稀释后,离心弃上清,DMEM培养基重悬,制备单细胞悬液,叠加在密度为1.077的等体积淋巴细胞分离液的液面上,离心后取界面云雾状的单个核细胞层,用含有20%胎牛血清的DMEM培养基重悬。以1×10/cm2接种后贴壁法纯化细胞,待70%~80%长满单层后消化传代。
主要观察指标:倒置显微镜下观察细胞生长情况,锥虫蓝染色计数活细胞,苏木精-伊红染色对细胞进行鉴定,MTT法检测细胞活性,观察传代培养的细胞冻存后复苏情况。
结果:接种24 h后细胞开始贴壁,呈短梭形或三角形,且有长短不等的细胞突起;3 d后贴壁细胞开始分裂增殖,部分区域形成细胞团簇;1周后大部分细胞呈成纤维状散落在培养瓶底生长;传代后细胞均匀分布,形态呈细长梭形,并沿一定方向排列,1 mL骨髓基质细胞悬液传3代后的贴壁细胞数可达5×106~1×107数量级。骨髓基质细胞成活率约为90%,经鉴定为单核细胞,接种后1~6 d细胞持续旺盛生长,至第8天细胞活性最高,随后生长活性下降。复苏冻存56 d的细胞,其生长良好,增长迅速。
结论:以淋巴细胞分离液梯度离心后可获得纯度较高的骨髓基质单核细胞,经体外扩增培养能够得到足够数量的种子细胞,冻存复苏后细胞活性无变化。 相似文献
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膝关节骨性关节炎的关节镜下表现和X线表现比较 总被引:3,自引:0,他引:3
目的:探讨膝关节骨性关节炎在关节镜下表现和X线片上表现及其关系。方法:对122例膝关节骨性关节炎进行X线检查和关节镜检查,将其结果分期归类,进行对比分析。结果:50例临床症状比较明显,X线为初期表现,关节镜检查有I或Ⅱ度软骨度;相反,X线晚期20例,临床症状轻,关节镜检为Ⅱ-Ⅲ度软骨变,分期相对应者共有56例。结论:膝关节骨性关节炎的关节镜下分期与X线分期不一致,关节镜检查有利于早期确诊,为诊断和治疗方案选择提供了更全面的信息。 相似文献
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【目的】为骨不连的实验研究建立一种客观的动物实验模型。【方法】选取纯种新西兰大白兔 ,在前臂桡骨中段截除 1 5cm骨段 (包括骨膜 ) ,骨断端用骨蜡封闭髓腔 ,10周后经大体标本、病理组织学及X线检查确定骨不连形成情况。【结果】大体标本肉眼观察、放射学检查及病理组织学检查均显示骨缺损区无骨性连接 ,为纤维瘢痕组织填充 ,骨端硬化。【结论】本实验所建立的动物模型 ,具有骨不连的病理改变 ,符合骨不连的要求 ,故可以认为是一种可靠而实用的实验性骨不连动物模型。 相似文献
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目的观察骨质疏松性骨折愈合不同阶段中骨保护素(OPG)的表达,探讨OPG在该过程中的作用.方法8月龄雌性大鼠40只,随机分为卵巢切除组和假切组,相同条件喂养3个月后造骨折模型,分别于术后第10d、第20d、第30d、第40d取骨痂,通过RT-PCR及ELISA检测骨质疏松性骨折及正常骨折愈合过程中骨痂OPG表达.结果OPG在骨质疏松性骨折愈合过程表达较其在正常组表达明显减弱(P<0.05).结论OPG是影响骨质疏松性骨折愈合的关键因子. 相似文献
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小腿下段开放性骨折临床上十分常见,由于胫前软组织较少,骨折端血运较差,治疗上十分棘手。本院自1995年1月~1999年1月,应用组合式外固定器治疗小腿下段开放性骨折12例,效果满意,现报告如下。1 临床资料1.1 一般资料本组患者12例,男9例,女3例。年龄16~58岁,平均年龄34岁。致伤原因:车祸8例,重物压伤2例,高处坠落伤2例。骨折类型:粉碎性骨折6例,横断骨折3例,螺旋骨折3例,胫腓骨双骨折8例,胫骨骨折4例。1.2 治疗方法硬膜外阻滞麻醉下,将伤口彻底清创,去除已坏死和污染组织。直视下清理断端间软组织,整复骨折,注意保护骨膜,在距骨断端两侧3… 相似文献