人BAFF转基因斑马鱼的构建及早期免疫基因表达检测

目的:建立人BAFF转基因斑马鱼模型,探讨其在自身免疫性疾病发病中的作用。方法：RT-PCR法由人淋巴瘤细胞克隆了人BAFF基因全长855bp蛋白编码区域,构建表达人BAFF重组质粒Tol2-hBAFF,体外细胞转染并通过免疫印迹法验证蛋白表达。重组载体经显微注射斑马鱼受精卵后,GFP荧光跟踪并筛选阳性鱼。qPCR法检测早期免疫相关基因表达情况。结果：人BAFF-GFP融合蛋白可成功表达,利用Tol2-hBAFF重组质粒显微注射斑马鱼受精卵可获得表达人BAFF的转基因斑马鱼,且表达人BAFF斑马鱼1dpf胚胎中TCRAC明显高表达,而Ikaros则表达量显著降低,表明在斑马鱼胚胎中表达人BAFF蛋白会造成早期淋巴系统中基因的过早表达。结果:研究所建立的表达人BAFF的转基因斑马鱼可为系统性红斑狼疮等与BAFF功能亢进密切相关的自身免疫性疾病的治疗及相关机制研究提供一种具有诸多优点的新型工具。     

不同单位保种的艾氏腹水癌细胞核型及DNA含量的比较研究

目的 比较研究三个单位保种的艾氏腹水癌细胞（EAC）染色体数目及DNA含量。方法 取腹腔接种EAC 6 d的KM小鼠，腹腔注射秋水仙碱，取腹水，经低渗处理，固定后涂片，染色，显微镜下染色体计数；腹水传代的EAC，用70%乙醇固定，流式细胞仪测DNA含量。结果 山东省医学科学院药物研究所（山东）、武汉大学典型培养物保藏中心（武汉）和北京市肿瘤研究所（北京）保种的艾氏腹水癌细胞株，其染色体均数分别为28.31±7.78、29.16±12.25、23.22±10.21条，方差分析表明，除北京与山东外，武汉与北京、武汉与山东两两比较有极显著差异（P<0.01）。直方图分析显示主流染色体范围分别为25-27、22-24、22-24条。北京艾氏腹水癌细胞 DNA含量最多，山东艾氏腹水癌细胞DNA含量最少。结论 三个单位的艾氏腹水癌细胞株在某些方面已出现差异。     

河北实验动物信息网开通

第三届河北省实验动物从业人员上岗资格培训班暨“河北实验动物信息”网 (ｗｗｗ .ｈｂｌａｃ .ｃｏｍ)开通信息发布会于 2 0 0 2年 4月 2 3日在河北医科大学 (河北省实验动物中心 )举行。来自全省医疗、科研及制药企、事业单位的 5 0名学员和代表参加会议。河北医科大学实验动物学部、河北省实验动物中心主任刘福英教授为大家进行了网络演示 ,并就网站的功能和建站目的等进行了简单介绍。刘教授为培训班作了题为“现代实验动物科学概论”的精彩演讲。本次培训为期一周 ,培训结业后 ,省科技厅条件财务处王维生副处长作了总结发言。学员们通…     

四环素诱导肝脏特异表达绿色荧光蛋白转基因斑马鱼模型建立

目的 探索tet-on四环素诱导表达系统在斑马鱼体内应用策略与技术路线,构建四环素诱导肝脏特异表达绿色荧光蛋白的转基因斑马鱼,为条件型功能基因研究及组织特异转基因斑马鱼疾病模型的建立奠定基础。方法 构建肝脏特异启动子fabp10启动rtTA蛋白表达的重组质粒pfabp10-rtTA,联合pTRE-Tight-BI-AcGFP1质粒转染HeLa细胞后给予doxycycline诱导,Western blot法验证;pfabp10-rtTA联合pTRE-Tight-BI-AcGFP1质粒注射斑马鱼1-细胞期受精卵后,30礸/ml doxycycline诱导,荧光筛选稳定整合个体。结果 共转染pfabp10-rtTA与 pTRE-Tight-BI-AcGFP1的HeLa细胞经1礸/ml浓度doxycycline诱导培养液诱导, GFP表达量显著高于不加doxycycline培养液对照组;筛选获得的稳定整合斑马鱼幼鱼,在浓度为30礸/ml doxycycline条件下,肝脏明显有绿色荧光表达,对照组幼鱼肝脏位置未有明显绿色荧光。结论Tet-On四环素诱导表达系统可用于建立四环素调控斑马鱼肝脏特异表达外源基因;利用该技术可建立诱导肝脏表达GFP建立转基因斑马鱼品系,为建立条件型转基因斑马鱼疾病模型、探索肝脏器官发生发育等研究提供良好的模式动物工具     

克隆细胞株S2D9建立的肿瘤动物模型基本特性研究

目的研究从S180获得的克隆细胞株S2D9,接种4个不同品(种)系小鼠建立肿瘤动物模型的某些基本生物学特性.方法由KM小鼠腹腔传代的S2D9克隆细胞,用GKN稀释成不同浓度,接种KM、DBA/2、615、C57BL/6小鼠右腋皮下及腹腔,观察小鼠最早出现可见肿块、腹水时间及小鼠生存时间;不同品(种)系小鼠经皮下接种S2D9细胞,建立肿瘤模型,从接种后第5日,每日观察肿瘤生长情况,测量肿块直径(cm),绘制肿瘤生长曲线;S2D9克隆细胞株接种BALB/c小鼠皮下,取接种第7日肿块,经石蜡切片,HE染色,观察病理结果;不同品(种)系小鼠皮下接种S2D9瘤细胞建立的动物模型,经腹腔注射环磷酰胺(CTX)或顺胺氯铂,观察S2D9克隆细胞肿瘤模型对CTX或顺胺氯铂治疗的敏感性.结果S2D9克隆细胞在615及DBA/2小鼠的皮下较KM及C57BL/6小鼠容易生长肿瘤;在KM及DBA/2小鼠腹腔较C57BL/6及615小鼠容易长出腹水;皮下接种KM、C57BL/6、615及DBA/2四个不同品(种)系小鼠,第12天瘤重分别为(2.3±0.9)g,(0.8±0.2)g,(2.0±0.2)g及(1.9±0.1)g;S2D9瘤细胞接种4个不同品(种)系小鼠制备的肿瘤模型,用CTX治疗,抑瘤率分别为80%(615),75%(C57BL/6),68.4%(DBA/2),65.2%(KM);用顺胺氯铂治疗的抑瘤率分别为75%(615),73.6%(DBA/2),62.5%(C57BL/6),65.2%(KM).可见S2D9细胞与615小鼠建立的模型对CTX或顺胺氯铂治疗最敏感.结论S2D9克隆细胞仍具有较强致瘤性,但在细胞均一性、接种小鼠生长肿瘤一致性方面比原代细胞好,对化疗反应更敏感,克隆细胞易于进行质量控制,因而推广使用后,有利于肿瘤动物模型复制的一致性和可重复性.     

实验动物四种病原体多重PCR方法的建立与应用

目的建立快速检测多杀巴氏杆菌、支气管鲍特杆菌、支原体和肺炎克雷伯杆菌4种实验动物病原体的多重PCR方法。方法根据Gen Bank基因设计出特异性引物;经过多重PCR的优化,特异性和敏感性的检测,建立多重PCR体系。应用该PCR体系检测人工感染样本和实验动物的气管分泌物,并与传统方法做对比。结果多重PCR扩增出多杀巴氏杆菌(356 bp)、支气管鲍特杆菌(237 bp)、支原体(266 bp)和肺炎克雷伯杆菌(142 bp)的目的条带。肺炎克雷伯杆菌敏感性为10 pg,多杀巴氏杆菌、支气管鲍特杆菌、支原体敏感性为1 pg,特异性检测未从其他病原菌中检测出目的条带。应用建立的多重PCR体系检测人工感染样本的不同组合,45只实验动物气管检测出15只多杀巴氏杆菌阳性,9只肺支原体阳性,但传统培养方法和血清学方法未检测出阳性标本。结论本文建立的多重PCR方法操作简单、快速、特异性强、灵敏度高,能够实现对多杀巴氏杆菌、支气管鲍特杆菌、支原体和肺炎克雷伯杆菌4种实验动物病原体的快速检测。     

大鼠肝包膜下移植Walker-256制备肝癌模型

目的通过原位移植的方法制备大鼠肝癌动物模型。方法取大鼠肿瘤细胞Walker-256制备为浓度1×10^8个／ml,分别于Wistar大鼠肝包膜下接种0．04ml。观察大鼠肝脏实体瘤的生长情况及肺转移的发生率。结果肝包膜下接种细胞悬液7d可见较小肿瘤块生长;14d开始出现肺转移,并伴有肠系膜、生殖系统的转移;21d肺转移率达100％。肝肿瘤组织HE染色结果可见肿瘤组织呈条索及团块状排列,排列紊乱,癌细胞索之间由血窦相连,癌肿边缘的肝组织受压萎缩。肺组织切面有多个散在的圆形或卯圆形实化灶。HE染色结果可见腺体样或乳头状结构,核染色深,核仁、核膜比较清楚。     

单纯疱疹病毒与巨细胞病毒性脑炎的PCR检验

人巨细胞病毒(HCMV)与单纯疱疹病毒(HSV)属疱疹病毒科,HSV具有二个血清型,为单纯疱疹病毒Ⅰ型和Ⅱ型(HSV-Ⅰ;HSV-Ⅱ).致病性广泛,发病多样,易与其他病毒混淆,尤其是HSV-l引起的脑炎难以与其他病毒引起的脑炎鉴别.     

保肺泰口服液防治肺癌化疗毒副反应的临床观察

保肺泰口服液是经过多年临床总结出的经验方,具有益气养阴、祛痰化瘀的功效。笔者就其对肺癌化疗毒副反应的影响进行了临床观察,现报道如下。1　临床资料1.1　一般资料:自1998年2月～1999年3月在河北省肿瘤医院住院的肺癌患者39例,分别以影像学、经皮肺穿刺、细胞学及病理学等检查确诊。无严重感染、无重要脏器严重损伤,能接受化疗。将患者随机分为保肺泰组(A组)和单纯化疗组(B组),其中A组20例,男14例,女6例,年龄40～73岁,平均59.9岁,其中鳞癌7例,小细胞癌3例,腺癌10例。B组19例,男12例,女7例,年龄39～72岁,平均59.2岁。其中鳞癌8例,小细…