弓形虫P24基因细胞内定位载体重组质粒的构建

目的　构建编码弓形虫 RH株 P2 4基因的细胞内定位载体并进行其序列测定。　方法　弓形虫 RH株腹腔接种小鼠 ,收集腹水 ,Trizol试剂盒抽提基因组 RNA;根据基因库 P2 4基因序列设计合成引物 ,采用 RT- PCR法扩增编码P2 4的基因片段 ,经低熔点琼脂糖法回收并纯化 ;将 P2 4基因定向克隆到细胞内定位载体 p CMV/ myc系列 :p CMV/myc/ cyto(胞质定位 )、p CMV/ myc/ nuc(核定位 )、p CMV/ myc/ mito(线粒体定位 )及 p CMV/ myc/ ER(内质网定位 )。转化大肠杆菌 TOP10感受态细胞 ,在氨苄青霉素阳性 L B培养基平板上筛选出阳性克隆。重组子经双酶切 ,PCR鉴定 ,最后对重组子进行序列测定。　结果　 RT- PCR方法从弓形虫 RH株扩增 5 72 bp的 P2 4基因片段 ,分别构建重组质粒p CMV/ myc/ cyto- P2 4、p CMV/ myc/ nuc- P2 4、p CMV/ myc/ mito- P2 4和 p CMV/ myc/ ER- P2 4 ,酶切和 PCR鉴定产物大小与预期值相符合 ,序列测定分析进一步表明所克隆的基因为编码 P2 4抗原的基因片段。　结论　成功构建编码弓形虫表面抗原 P2 4基因真核细胞内定位载体重组质粒 p CMV/ myc/ cyto- P2 4、p CMV/ myc/ nuc- P2 4、p CMV/ myc/ mito- P2 4和p CMV/ myc/ ER- P2 4     

应用两株委内瑞拉粪类圆线虫(F2、F49)的微粒体抗原间接免疫荧光抗体实验诊断人体类圆线虫病

本研究应用两株委内瑞拉粪类圆线虫(F2、F49)的微粒体抗原,用间接免疫荧光抗体实验诊断人体类圆线虫病。实验分为阳性/阴性对照与实验组。滴度自1:20至1:1280,荧光标记的抗人IgG用3％伊文思蓝的PBS作150倍稀释。用二抗作非特异性对照。免疫荧光显微镜镜检玻片。当颗粒呈现均匀的亮兰色荧光时为阳性,阴性对照呈现离散的红光。检测结果用滴度表示,>1:20为阳性。     

不同发育期C57BL/6小鼠脑内TRPV1表达变化与热性惊厥的关系

<正>目的:检测不同发育阶段C57BL/6小鼠大脑TRPV1表达变化及其与热性惊厥的关系。方法:应用qRT-PCR和免疫组化方法检测2周龄、4周龄、8周龄和16周龄C57BL/6小鼠脑海马和皮质内TRPV1mRNA和蛋白表达变化,同时应用热气浴(43℃)方法诱导C57BL/6小鼠热性惊厥模型。结果:不同发育阶段C57BL/6小鼠海马和皮质中TRPV1mRNA和蛋白表达有明显差异,且热性惊厥模型鼠海马和皮质中TRPV1表达明显高于正常对照鼠。     

自动痔疮套扎联合外切术治疗重度混合痔的疗效比较

目的探讨自动痔疮套扎联合外切术用于治疗重度混合痔的可行性。方法212例混合痔患者随机分为传统组和改良组,分别行传统内扎外切术和自动痔疮套扎联合外切术,比较两组患者手术时间、术中出血量和平均住院时间;记录术后30d内并发症的发生率。结果改良组患者手术时间明显短于传统组（P〈0．01）,术中出血量明显少于传统组（P〈0．05）,住院时间明显短于传统组（P〈0．05）,改良组在肛门疼痛、切口水肿、尿潴留等并发症的发生率上明显低于传统组（P〈0．05）;改良组患者术后3d内VRS评分显著低于传统组（P〈0．01）。结论自动痔疮套扎联合外切术用于重度混合痔的治疗可大大节省手术时间和住院时间,同时痛苦轻微,较好地保留了直肠和肛门的正常结构和功能,适合在临床广泛开展。     

目标导向液体治疗对腹腔镜直肠癌根治术围术期炎性细胞因子的影响

目的探讨目标导向液体治疗对腹腔镜直肠癌根治术围术期炎性细胞因子的影响。方法选择拟行腹腔镜直肠癌根治术住院患者50例,随机数字表法分为常规输液组(C组)和目标导向液体组(G组)各25例。C组维持平均动脉压(MAP)65～90 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)、中心静脉压(CVP)5～12 mmHg;G组根据Flotrac/vigileo系统监测维持心脏指数(CI)不小于2.5 L/(min·m~2),且每搏变异度(SVV)≤13%。2组患者均检测术前(t_1)、术后1 d(t_2)、术后3 d(t_3)、术后5 d(t_4)及术后7 d(t_5)血浆炎性细胞因子水平,记录并比较2组患者术中液体出入量,记录术后气管导管拔管时间及胃肠功能恢复时间、术后并发症发生情况和总住院时间。结果与C组比较,G组肿瘤坏死因子-α水平在术后明显降低(P0.05),白细胞介素-6(IL-6)水平在t_(2—4)时明显降低(P均0.05),IL-10水平在t_(2—5)时明显升高(P均0.05)。与C组比较,G组术中晶体液入量明显减少(P0.05),胶体液入量明显增多(P0.05),余出入量无明显差异(P均0.05)。与C组比较,G组术后气管导管拔管时间及胃肠功能恢复时间均明显缩短(P均0.05)。2组术后并发症发生情况和总住院时间比较差异均无统计学意义(P均0.05)。结论对于接受腹腔镜直肠癌根治术患者,目标导向液体治疗可以抑制机体炎性反应,缩短患者气管导管拔除时间和胃肠功能恢复时间,利于患者术后早期康复。     

饮食干预对青年乙肝患者疗效及生活质量的影响

目的 探索饮食干预对青年乙型肝炎(乙肝)患者疗效及生活质量的影响.方法 选取106例乙肝患者,随机分为干预组和对照组各53例;对照组采用药物+常规饮食,干预组采用药物+饮食干预;干预后30 d对2组进行疗效及生活质量评定量表(SF-36)评定.结果 干预组治愈29例,治愈率54.72%,对照组治愈16例,治愈率30.19%;干预组生活质量总分(69.72±8.42)分,对照组生活质量总分(55.71±8.31)分,2组在情绪角色、躯体功能、躯体疼痛、活力、社会功能、心理健康、总体健康等维度比较差异显著.结论 乙肝患者通过饮食调护,能够提高临床疗效,改善生活质量.     

钙离子与钙调蛋白在弓形虫侵染宿主细胞信息转导中的作用

钙离子（Ca^2 )是弓形虫侵染宿主细胞的关键因素。钙调蛋白（Calmodulin,CaM)是钙信号的重要介导剂,引发多个细胞内的信号转导机制,本综述了近些年来钙离子及钙调蛋白在弓形虫侵染宿主细胞信号转导中的作用及其可能的机制。     

一氧化氮供体对弓形虫速殖子DNA含量的影响

目的　探讨亚硝基铁氰化钠 (SNP)对弓形虫速殖子DNA含量的影响。　方法　采用SNP与影响胞内 /胞外钙离子浓度的试剂作用于RH株刚地弓形虫 (Toxoplasmagondii)速殖子 ,流式细胞仪检测其DNA含量的变化。　结果　①SNP导致弓形虫速殖子DNA的损伤 ,并呈时间和剂量依赖性 ;② 2mmol/L胞外钙离子螯合剂EGTA ,2 5 μmol/L胞内钙离子螯合剂BAPTA/AM及 5 0 μmol/L钙离子拮抗剂verapamil单独处理弓形虫速殖子 ,其DNA含量与对照组相比无显著变化 ;③ 2mmol/LEGTA ,2 5 μmol/LBAPTA/AM及 5 0 μmol/Lverapamil明显减少 2mmol/LSNP所致的速殖子亚二倍体峰的比例。　结论　SNP通过改变弓形虫速殖子胞浆游离钙离子浓度 ,诱导其亚二倍体峰的出现 ,造成虫体的损伤     

钙离子与钙调蛋白在弓形虫侵染宿主细胞信号转导中的作用

钙离子(Ca2+)是弓形虫侵染宿主细胞的关键因素,钙调蛋白(Calmodulin,CaM)是钙信 号的重要介导剂,引发多个细胞内的信号转导机制。本文综述了近些年来钙离子及钙调蛋白在弓 形虫侵染宿主细胞信号转导中的作用及其可能的机制。     

外源性花生四烯酸在弓形虫入侵巨噬细胞中的信号作用

目的　探讨花生四烯酸在弓形虫侵染巨噬细胞中的信号作用。　方法　采用普通光镜、流式细胞仪检测巨噬细胞的感染率;Fura2/AM染色,荧光分光光度法测定游离钙离子浓度。　结果　宿主细胞内钙离子浓度及巨噬细胞感染率随着外源性花生四烯酸浓度的增加而升高,并呈剂量依赖性关系。细胞外的钙离子内流,细胞内储存的钙离子释放,包括胞膜钙离子通道均在花生四烯酸的作用下,参与了胞内钙离子的升高。钙离子通道阻断剂对花生四烯酸作用前后的感染率的影响不明显。　结论　花生四烯酸可能通过钙离子作用于宿主细胞,增高其感染率。