海珠益肝胶囊对免疫性肝损伤小鼠PRL、ACTH及辅助性T细胞亚群的影响

目的:观察海珠益肝胶囊对免疫性肝损伤小鼠内分泌激素物质PRL、ACTH及辅助性T细胞亚群的影响。方法:应用尾静脉注射卡介苗(BCG)和脂多糖(LPS)建立免疫性肝损伤小鼠模型,分离小鼠淋巴细胞,经佛波醇乙酯(PMA)、离子霉素、莫能菌素刺激培养6 h后,收获细胞,利用细胞内细胞因子染色流式细胞术检测Th1/Th2比例;采用放免法检测血浆和脑垂体中PRL、ACTH含量。结果:模型组外周血和脑垂体中PRL含量较正常组逐渐增加,ACTH含量较正常组逐渐降低,第18天、25天与正常组比较有显著性差异(P<0.05);Th1细胞的百分率逐渐升高,Th2细胞的百分率逐渐降低,Th1/Th2的比值增大,与肝组织损害程度呈现正相关;海珠益肝胶囊能够降低外周血和脑垂体中PRL含量,增加ACTH含量,与模型组第25天比较,差别有统计学意义(P<0.01),能够恢复PRL与ACTH的平衡;能降低Th1细胞的百分率,恢复Th1/Th2的比例,对肝组织损害具有保护和改善作用(P<0.05)。结论:在小鼠免疫性肝损伤过程中,存在PRL与ACTH的分泌紊乱及Th1/Th2细胞失衡,海珠益肝胶囊能够恢复PRL/ACTH、Th1/Th2细胞的平衡,对肝组织损害具有保护和改善作用,可能是其免疫药理机制之一。     

免疫性肝损伤小鼠Th1/Th2细胞的变化

目的:探讨Th1/Th2细胞在免疫性肝损伤小鼠中的作用.方法:应用尾静脉注射卡介苗(BCG)和脂多糖(LPS)建立免疫性肝损伤小鼠模型,分离小鼠淋巴细胞,经佛波醇乙酯(PMA)、离子霉素、莫能菌素刺激培养6小时后,收获细胞,利用细胞内细胞因子染色流式细胞术检测Th2/Th2比例;另外经刀豆蛋白A(ConA)刺激培养72h后,收集培养上清,ELISA法检测IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10的水平,同时观察地塞米松对Th1/Th2细胞的影响.结果:在模型组,随着时间的延长,小鼠外周血PBMC中Th1型细胞因子IL-2、IFN-γ水平逐渐升高,Th2型细胞因子IL-4、IL-10水平逐渐降低,Th1细胞的百分率逐渐升高,Th2细胞的百分率逐渐降低,Th1/Th2的比值逐渐增大,与肝组织损害程度呈现正相关.地塞米松能够抑制Th1型细胞因子的分泌,降低Th1细胞的百分率,恢复Th1/Th2的比例,对肝组织损害具有保护和改善作用(P＜0.05).结论:Th1/Th2细胞失衡是造成小鼠免疫性肝损伤的原因之一,Th1应答占主导地位.     

川芎嗪注射液对体外培养软骨细胞影响的实验研究

目的：探讨川芎嗪对骨性关节炎的药理效应及作用机理。方法，采用家兔关节软骨细胞体外培养模型。加入不同浓度的川芎嗪药物，观察软骨细胞的增殖及总蛋白的合成，结果川节嗪不影响软骨细胞的活性，8%的川芎嗪可显著提高体外培养关节软骨细胞的增殖，4%-16%的川芎嗪对细胞蛋白质合成有促进作用，与对照组相比有非常显著意义。结论：川芎嗪的有效成分可促进软骨细胞分泌合成代谢因子，刺激细胞分泌合成代谢因子，刺激细胞增殖和蛋白质合成。     

低深度全基因组测序技术联合核型分析在无创产前检测高风险孕妇产前诊断中的应用

目的 探索低深度全基因组测序技术联合核型分析在无创产前检测高风险孕妇产前诊断中的应用.方法 对165例无创产前高风险孕妇行羊膜腔穿刺术,在对胎儿羊水样本进行G显带染色体核型分析的同时采用低深度全基因组测序技术检测胎儿羊水细胞基因组DNA,测序结果与人类参考基因组(GRCh37,UCSC release hg19)进行比对分析,然后通过ISC A、Decipher、ClinVar等数据库评估检测到的CNV致病性,进而比较G显带染色体核型分析与低深度全基因组测序结果间的差异.结果 送检的165例羊水样本中低深度全基因组测序检测出21三体44例,18三体10例,13三体1例,与G显带染色体核型分析结果一致;性染色体异常2例,比G显带染色体核型分析多检出1例;其他类型染色体异常10例,比G显带染色体核型分析多检出4例.低深度全基因组测序技术对染色体异常的总检出率为53.33％,与染色体G显带核型分析比较,致病性异常检出率提高了 3％.结论 低深度全基因组测序技术在无创产前检测高风险孕妇产前诊断中有良好的应用价值,该技术与G显带染色体核型分析联合应用能有效提高染色体异常检出率,降低出生缺陷,提高人口素质.     

左归丸药物血清对骨髓间质细胞转化为肝细胞的作用

目的:一些实验已证实骨髓干细胞可以向肝细胞横向分化,观察补肾中药左归丸含药血清对骨髓间质细胞分化为肝细胞的影响。方法:实验于2002-01/2004-12在湖北中医学院附属医院肝病研究所完成。①实验动物:选取SPF级纯系Wistar大鼠46只,1只用于骨髓间质细胞的分离及培养,剩余45只用于含药血清的制备。另取2d龄Wistar乳鼠20只,用于肝脏细胞的培养。②实验方法:以体外肝细胞培养上清为诱导条件培养液,采用贴壁分离法纯化大鼠骨髓间质细胞。45只Wistar大鼠依次取15只用生理盐水、中药左归丸(由熟地、淮山药、枸杞子、山茱萸、菟丝子、川牛膝、鹿角胶、龟版胶组成)浓缩煎剂、中药八珍汤(由人参10g,白术10g,茯苓10g,甘草6g,当归15g,川芎10g,白芍15g,熟地15g组成)浓缩煎剂按10mL/kg灌胃,灌胃量以生药10g/kg计算,1次/d。第15天灌胃后2h,腹腔麻醉颈动脉插管取血,分管盛装含药血清,放置备用。大鼠骨髓间质细胞传至6代,分6组诱导培养:常规培养组使用常规培养液(DMEM培养液 体积分数为0.2的胎牛血清 2mmol/L谷氨酸胺)进行培养;肝细胞生长因子诱导组以常规培养液 25μg/L肝细胞生长因子 10-7mol/L地塞米松进行培养;肝细胞生长因子加左归丸组以常规培养液 25μg/L肝细胞生长因子 10-7mol/L地塞米松 10%左归丸含药血清进行培养;条件培养液加对照血清组以常规培养液 50%条件培养液 10%正常大鼠血清进行培养;条件培养液加八珍汤组以常规培养液 50%条件培养液 10%八珍汤含药血清进行培养;条件培养液加左归丸组以常规培养液 50%条件培养液 10%左归丸含药血清进行培养。③实验评估:诱导28d,每组10个复孔,分别于诱导第0,7,14,21,28天免疫细胞化学法检测肝细胞标志物甲胎蛋白、细胞角蛋白18及白蛋白阳性细胞率,PAS染色检测糖原阳性细胞率。结果:①诱导第0天,各组甲胎蛋白、白蛋白阳性细胞呈极少数表达(t=0.44～1.90,P>0.05),细胞角蛋白18及糖原均未见阳性细胞表达。②肝细胞生长因子加左归丸组、条件培养液加左归丸组在诱导第7,14,21,28天白蛋白、细胞角蛋白18、糖原的阳性细胞率均显著高于其他4组(t=5.42～55.00,P<0.05);甲胎蛋白阳性细胞率于诱导第7天时增高显著(t=55.00,P<0.05),此外各时间点又明显降低。③与肝细胞生长因子加左归丸组比较,条件培养液加左归丸组白蛋白阳性细胞率在诱导第14,21,28天时显著升高(t=4.06～7.49,P<0.05);甲胎蛋白阳性细胞率在诱导第7天时显著升高(t=83.69,P<0.05),至诱导第14,21,28天则明显下降(t=55.53～83.00,P<0.05)。结论:左归丸含药血清能够影响骨髓间质细胞向肝系细胞转化过程中的肝细胞标志物,从而提高骨髓间质细胞向肝细胞的转化率。     

活血化瘀、化痰利湿法对大鼠肥胖相关性脂肪肝的作用

目的　探讨活血化瘀、化痰利湿法改善肥胖相关性脂肪肝大鼠胰岛素抵抗状态和对肿瘤坏死因子 α(TNF α)的影响。方法　 32只健康雄性SD大鼠随机分成正常组、造模组、西药组、中药组 (活血化瘀、化痰利湿 )。第 16周禁食 2 4小时 ,取血、组织匀浆 ,测定各组大鼠血清和脂肪组织中TNF α。结果　中药组能显著降低大鼠血清和脂肪组织中TNF α水平 (P <0 .0 1)。结论　活血化瘀、化痰利湿法能改善肥胖相关性脂肪肝大鼠胰岛素抵抗状态 ,达到治疗脂肪肝的目的。     

中药复方搏癌丸对人肝癌细胞周期及bax、bcl-2、p53基因表达调控的影响

目的:研究中药复方搏癌丸对人肝癌细胞HepG2周期及相关调控基因表达的影响.方法:采用药物血清和细胞药理学方法:①用流式细胞仪观察搏癌丸对人肝癌HepG2细胞凋亡及周期的影响.②用免疫组织化学染色(SABC)法检测搏癌丸3个有效药物血清浓度对bax、bcl-2、p53基因表达的调控.结果:①10%搏癌丸药物血清作用HepG2细胞48小时后,FCA检测的细胞凋亡率为25.34%,均显著高于相应无药血清对照组的3.54%,P＜0.05.②能上调HeG2细胞凋亡调控基因bax、p53的表达,与无药血清对照组比较,差异有显著性意义,P＜0.05,且呈剂量依赖关系.结论:搏癌丸诱导HepG2细胞凋亡的作用机制之一可能是上调促凋亡基因bax和p53的表达.     

海珠益肝胶囊对2215细胞乙肝病毒标志物的影响

目的 :应用 2 2 15细胞株作为体外抗乙型肝炎病毒的实验模型 ,研究益肝胶囊对乙肝病毒抗原(HBeAg)、表面抗原 (HBsAg)的抑制作用。方法 :通过细胞毒性实验以确定对细胞无毒性作用的最高药物浓度 ,直接加药物到细胞培养液中 ,分别采取第 4天、第 8天的细胞培养上清 ,用固相放射免疫方法测定其HB sAg、HBeAg含量。结果 :海珠益肝胶囊最大无毒浓度TCD <1.2 5mg/ml,海珠益肝胶囊有明显抑制HBsAg、HBeAg的作用 ,各浓度间存在量效关系 ,其中对HBeAg的作用优于对HBsAg的作用。结论 :海珠乙肝胶囊对 2 2 15细胞HBV标志物有显著的抑制作用。     

左归丸促进骨髓形成肝细胞的分子机制研究

目的：探讨左归丸促进骨髓形成肝细胞的分子机制。方法：采用交叉性别骨髓移植模型，雌性BALB／c小鼠接受9．0Gys ^60Co源γ射线照射后，经尾静脉注射输入同种系雄性小鼠骨髓细胞，分左归丸组和模型组，6个月后处死实验动物，取肝组织标本。选用小鼠基因表达谱寡核苷酸芯片，观察实验小鼠肝组织基因表达谱的变化。结果：左归丸组小鼠在骨髓移植6个月后肝组织的基因表达谱与模型组比较有显著不同，差异表达基因有1147条，已知功能基因有533条，其中上调基因264条，下调基因269条。结论：左归丸可能是通过影响肝组织基因表达谱的变化促进骨髓形成肝细胞。     

高通量基因测序产前筛查技术在单个中心的回顾性研究

目的 探讨无创产前检测(non-invasive prenatal testing,NIPT)在胎儿非整倍体筛查中临床应用价值和有效性.方法 选择2017-2018年于中国科学技术大学附属第一医院自愿行NIPT检测的单胎孕妇8 246例,采集外周血样,抽提胎儿游离DNA,采用高通量测序平台检测,对孕妇外周血游离DNA进...