2012年度211例手足口病住院患儿病原学检测及分析

目的：掌握2012年度北京大学北京地坛医院教学医院手足口病住院患儿的病原体分布情况与变化趋势,为手足口病的防治提供科学依据。方法本研究收集北京大学北京地坛医院教学医院儿科2012年度211例手足口病住院患儿的咽拭子标本,提取病毒RNA,采用实时荧光聚合酶链反应（RT-PCR）法,进行肠道病毒（EV）通用型、肠道病毒71（EV71）型和柯萨奇A16（CoxA16）型肠道病毒核酸检测。EV（＋）标本判为EV阳性,EV（＋）EV71（＋）标本判为EV71阳性,EV （＋）CoxA16（＋）标本判为CoxA16阳性,EV（＋）且EV71（-）CoxA16（-）标本判为非EV71非CoxA16型肠道病毒阳性。结果2012年度211例本院手足口病住院患儿中EV阳性标本共118例,占55.92%。病毒分型结果显示,非EV71非CoxA16型肠道病毒阳性标本共46例,占22.81%;EV71阳性标本共45例,占21.32%;CoxA16阳性标本共27例,占12.80%。病原学分布分析结果显示,5～7月份为发病高峰期;不同年龄、性别组患儿之间病原体构成无显著差异;患儿入院前3d肠道病毒检出率较3 d后高;不同型别肠道病毒感染患儿之间平均住院天数差异无统计学意义。结论2012年度本院手足口病住院患儿不同型别EV感染率由高到低依次为：非EV71非CoxA16型肠道病毒、EV71、CoxA16,非EV71非CoxA16型肠道病毒感染率较往年具有升高趋势,尚待进一步研究。     

Sirt1在胃癌及癌旁组织中的表达差异研究

目的应用寡聚核苷酸基因表达谱芯片研究胃癌组织与癌旁组织的基因表达谱差异。方法应用包含44,000条人类全长基因的寡聚核苷酸芯片检测胃癌组织与癌旁组织,并比较存在两者之间存在明显上、下调的表达差异基因,随后用RT—PCR方法进行验证分析。结果基因芯片筛选出存在差异表达的基因,Siftl基因的表达水平在胃癌组织均存在明显下调,下降至对应癌旁组织的（0．318±0．032）～（0．169±0．013）倍不等（t=-3．374,P〈0．05）。经RT—PCR对胃癌组织与癌旁组织中Sift1基因的表达水平进行比较,发现胃癌组织中的实时荧光定量PCR的比值为0．258（X2=5．20,P〈0．05）,与基因芯片的结果一致。结论Sirt1在胃癌组织与癌旁组织中的表达存在明显差异,Sirt1基因的表达可能与胃癌的发生发展密切相关。     

糖基因Glt8d2重组蛋白的表达、纯化及多克隆抗体的制备

目的 构建新糖基转移酶基因Glt8d2的原核表达载体,诱导融合蛋白的表达,并对其进行纯化;制备兔抗Glt8d2蛋白多克隆抗体并进行鉴定.方法 应用RT-PCR技术,以HepG2细胞mRNA为模板,扩增Glt8d2目的基因片段,构建原核表达载体pET-32a(+)-Glt8d2.转化大肠埃希菌BL21,异丙基-D-半乳糖...     

在北方诊治的艾滋病合并马尔尼菲青霉菌病27例临床观察

目的总结艾滋病(AIDS)合并马尔尼菲青霉菌病的临床特点及治疗转归情况。方法回顾性资料分析。结果 2006年2月-2011年2月,北京地坛医院感染中心确诊27例艾滋病合并马尔尼菲青霉菌病患者。临床表现以发热、咳嗽、盗汗、贫血、皮疹、腹痛、多部位淋巴结肿大为主;皮疹具有特征性,皮肤活检、血培养阳性率高;胸片或胸部CT主要表现为肺野斑片状或斑点状浸润阴影、弥漫粟粒样结节改变。患者的CD4+淋巴细胞计数均<100个/μL。3例痊愈出院,22例好转出院,2例死亡。结论马尔尼菲青霉菌病是我国南方常见的艾滋病机会性感染之一,但近年在北方就诊的患者中也并不少见。确诊需多次血培养及皮肤等部位的活检,该病易误诊为肺结核和淋巴结核,治疗上单独使用伊曲康唑也可达到满意疗效。     

HCV核心蛋白通过LXRα核受体介导HepG2细胞甘油三酯合成增加

目的：观察丙型肝炎病毒（HCV）的核心蛋白（core）对肝细胞甘油三酯（TG）合成的影响。方法将HCV 1b基因型core表达载体pcDNA3.1-myc/his（-）-core1b和HCV 3a基因型core表达载体pcDNA3.1-myc/his（-）-core3a分别转染至HepG2细胞,利用定量测定法检测细胞内TG含量,用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应法（real time qPCR）、蛋白免疫印迹（Western blot）方法观察脂质合成相关基因肝X受体α（LXRα）、甾醇调节元件结合蛋白1c（SREBP1c）和脂肪酸合酶（FASN）的mRNA和蛋白的表达变化,并进行比较分析。结果 HepG2细胞转染两个基因型HCV core表达载体之后均能显著增加细胞内的TG含量（P＜0.05）,尤以基因型core3a组为差异更显著（P＜0.001）。Real-time PCR结果显示,两个基因型core均上调LXRα的mRNA水平（P＜0.05）,基因型core3a组差异更为显著（P＜0.01）;FASN的mRNA水平只在仅在基因型core3a组上调（P＜0.05）,而基因型core1b组差异无统计学意义。Western blot结果显示,HCV core表达可以明显上调表达可以显著上调SREBP1c的蛋白水平,尤其基因型core3a组更为显著。对FASN蛋白水平,基因型core3a上调其表达,但基因型core1b组无明显变化。结论 HCV可能通过LXRα介导肝细胞内的脂质合成诱导肝脂肪变,有待进一步研究。     

14-3-3β蛋白对胶质瘤细胞生物学行为的影响

目的 探讨14-3-3β蛋白对胶质瘤细胞系生物学行为的影响.方法 应用分子生物学技术构建14-3-3β蛋白的真核表达质粒pcDNA 3.1(-)-14-3-3β及干扰质粒pcDNATM6.2-GW/EmGFPmiR-14-3-3β,应用MTT、集落形成、Transwell侵袭试验研究14-3-3β蛋白对人胶质瘤细胞株U251增殖及侵袭等生物学行为的影响.结果 过表达14-3-3β能够明显促进U251细胞(人胶质瘤系)的侵袭和增殖过程;而应用干扰质粒抑制14-3-3β表达后,U251细胞的侵袭和增殖能力则受到显著抑制.结论 14-3-3β对于U251细胞(人胶质瘤系)蛋白的侵袭和增殖能力起到明确的促进作用,其在人类胶质瘤的发生和发展过程中可能也起到促癌作用.     

乙型肝炎病毒相关2型糖尿病及其发病机制

乙型肝炎病毒(HBV)感染与2型糖尿病(tyep 2 diabetes mellitus,2-DM)密切相关,成人慢性乙型肝炎患者2-DM发病率明显高于普通人群,慢性HBV感染与2-DM相互促进,HBV相关2-DM发病机制以糖代谢异常和胰岛素抵抗为主要基础,但确切机制尚不明确。烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)在2-DM的发病过程中起重要作用,烟酰胺单核苷酸腺苷酰转移酶2(NMNAT2)是催化其合成的最主要酶之一。HBV对NMNAT2及其介导的NAD影响可能是HBV致2-DM的一个重要发病机制。另外,NAD相关酶及蛋白质也可能在糖尿病的发病机制中起重要作用。     

酵母双杂交技术对人胰腺cDNA文库中HBcAg结合蛋白基因的筛选

目的: 应用酵母双杂交技术,筛选人胰腺cDNA文库中与HBV核心抗原结合的蛋白的基因.方法:扩增人胰腺cDNA文库并纯化鉴定,将其转化至酵母菌Y187;诱饵质粒pGBKT7-HbcAg转化酵母菌AH109并筛选鉴定.应用酵母双杂交系统3进行配合,在SD/-Trp/Leu-His/-Ade培养基和含X-gal的SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade培养基上进行双重筛选,提取阳性酵母菌落的质粒转化大肠埃希菌DH5α,提取质粒并测序,对测序结果进行生物信息学分析.结果:人胰腺cDNA文库的构建以及pGBKT7-HBcAg质粒转化AH109酵母菌株均获成功,并从人胰腺cDNA文库中筛选出9个与HBcAg蛋白相结合的蛋白基因.分别与以下已知的9种编码蛋白基因序列同源:人胰脂肪酶(PNLIP)、人胆盐刺激酯酶(CEL)、人胰凝乳蛋白C(CTRC)、人胰蛋白酶原、人羧肽酶B1(CPB1)、人线粒体全基因组、人胰弹性酶2A、人辅脂肪酶(CLPS)和人核糖体蛋白(RPL10A).结论:筛选出的与HBcAg蛋白相结合的蛋白基因主要与胰腺外分泌功能相关,HBV感染可能通过与胰腺所分泌的糖、脂类代谢相关的酶类结合,而引发代谢性疾病.     

HCV基因6型流行病学研究进展

正HCV是慢性肝病和肝癌的主要原因之一。目前全球约有1.7亿人感染HCV病毒。HCV基因多样性程度高,分为至少6种基因型和至少83种基因亚型,这是HCV感染慢性化的一个重要因素。了解HCV各基因型的流行病学特点将有助于临床诊断、治疗和疾病预防。HCV基因6型有多种亚型,同时特殊的传播途径又加快了这种基因型病毒的传播速度,因此了解HCV基因6型的流行病学特点显得越来越重要。现将相关研究进展总结如下。     

药物致肝脏损害误诊为病毒性肝炎18例临床分析

18例中女5例,男13例,年龄12～70岁,平均39岁,病程2～30天,平均14.3天.18例中均有恶心、乏力、尿黄症状,但较轻.化验肝功ALT在100～500μ/L之间,平均134μ/L,GGT也有升高,在70～332μ/L之间,平均96μ/L,TBiL在34～200μmol/L之间,平均68μ/L,经出入院2次检