NS5 ATP9抑制血清饥饿诱导的HepG2细胞凋亡

目的探讨HCV NS5A反式激活基因NS5ATP9对肝癌细胞系HepG2细胞凋亡的影响。方法将NS5ATP9基因表达质粒、NS5ATP9干扰RNA质粒及各自的对照空质粒转染到HepG2细胞中,48h后换无血清培养基培养24h诱导细胞凋亡,采用实时荧光定量PCR验证转染后NS5ATP9mRNA表达水平的变化,采用Annexin V/7-AAD流式细胞术检测细胞凋亡情况,JC-1检测线粒体膜电位,Western blot检测Bax蛋白表达,综合观察NS5ATP9对HepG2细胞血清饥饿诱导凋亡的影响。结果 Annexin V/7-AAD检测结果显示,和对照组细胞相比NS5ATP9过表达组早期凋亡和总凋亡率显著减少(P0.05);而NS5ATP9干扰RNA组细胞的早期凋亡、晚期凋亡和总凋亡率均显著增加(P0.05)。JC-1检测结果显示,和对照组相比NS5ATP9过表达组细胞线粒体膜电位保持正常形式的比例增加,而出现去极化电位形式的比例显著减少(P0.05);而NS5ATP9干扰RNA组线粒体膜电位保持正常形式的比例显著减少(P0.05)。Western blot检测结果显示,NS5ATP9干扰RNA组促凋亡分子Bax表达量显著升高(P0.05),NS5ATP9过表达组Bax表达量则有下降趋势。结论 NS5ATP9基因抑制血清饥饿诱导的HepG2细胞凋亡,其机制可能是通过线粒体途径实现。     

HBV表面抗原大蛋白与人胰腺突触角蛋白6之间的相互作用

目的 验证HBV表面抗原大蛋白(LHBs)与人胰腺突触角蛋白6 (STX6)在细胞内是否存在相互作用,为进一步研究HBV影响糖、脂代谢机制奠定研究基础.方法 构建真核表达质粒pACT-STX6,采用哺乳动物双杂交技术验证LHBs与STX6之间的相互作用.结果 实验组和各阴性对照组相对荧光素酶活性值均存在差异,且均具有显著统计学意义(P＜ 0.01).结论 LHBs与人胰腺STX6在胰腺细胞内存在相互作用.     

慢性丙型肝炎并脂肪肝血清A-FABP与病毒及代谢的相关分析

目的 探讨慢性丙型肝炎(chronic hepatitis C,CHC)并脂肪肝(fatty liver,FL)血清脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白(A-FABP)水平与病毒和代谢因素的相关性.方法 选择118例初次就诊且未行抗病毒治疗的CHC,根据是否伴FL分为FL组55例和非FL组63例.检测两组A-FABP水平,并比较其水平与丙型肝炎病毒、血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、体重指数(BMI)、空腹血糖(FPG)、胰岛素水平(FINS)、甘油三酯(TG)、胆固醇(CHO)及胰岛素抵抗指数(HO-MA-IR)等的相关性.结果 FL组TG较非FL组明显升高,FINS、HOMA-IR及A-FABP血清水平明显低于非FL组(P＜0.05).相关性及回归分析表明,A-FABP同BMI、FPG、FINS、HOMA-IR明显呈正相关,并且同TG水平明显负相关,FINS是A-FABP水平的独立相关因素(r2=0.830,P＜0.01).结论 CHC并发FL与患者血清A-FABP水平下降密切相关,与病毒因素不相关,且FINS是此类患者A-FABP水平变化的独立相关因素.     

人胰腺细胞cDNA文库中丙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋白基因的筛选

目的 为进一步研究HCV影响糖、脂代谢机制奠定研究基础.方法 扩增人胰腺cDNA文库并经纯化鉴定后,将文库质粒转化酵母菌株Y 187.诱饵质粒pGBKT7-core转化酵母菌株AH109,在色氨酸缺陷型培养基(SD/-Trp)上筛选阳性菌落.应用酵母双杂交系统3将阳性重组AH109菌株与重组酵母菌株Y187进行配合,在四缺培养基(SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade)和铺有X-α-gal的四缺培养基上进行筛选,提取蓝色酵母菌落质粒,电转化大肠埃希菌DH5α后再提取质粒测序,测序结果进行序列比对.结果 筛选出11种与HCV核心蛋白相结合的蛋白基因,包括胰凝乳蛋白酶原B1前体、羧肽酶A1,胰蛋白酶原2、胰凝乳蛋白C、胰蛋白酶1,羧肽酶B1、驱动蛋白家族3B、胰蛋白酶2,线粒体蛋白基因、弹性蛋白酶3A,辅脂肪酶.结论 在筛选出的HCV核心蛋白结合的人胰腺细胞蛋白基因中,部分与糖,脂代谢密切相关.     

2009—2010年北京地区麻疹流行的临床与病因学特征

目的：分析2009—2010年北京地坛医院收治的麻疹患者的临床及病因学特征。方法：回顾分析200例麻疹患儿的临床资料,选择同一地区200例年龄、性别相匹配的健康儿童作为对照。结果：感染麻疹的患儿的麻疹疫苗接种率和全程计划免疫率明显低于健康儿童;2010年麻疹患者病情严重复杂,2010年麻疹患者流动人口比例高于2009年;2010年体温超过38.5℃的患者比例高于2009年;2009、2010年患者都出现皮疹,但皮疹首发部位差异有统计学意义。2010年并发症（支气管炎、喉炎、心肌炎、心血管功能不全、口腔炎及呼吸衰竭）比例与2009年相比显著升高,差异有统计学意义。2010年19例患儿因并发呼吸衰竭入住重症监护室,7例病死;2009年无病死病例。结论：2010年北京地区麻疹高发病率可能与麻疹疫苗免疫的低覆盖率及人口流动有关,麻疹病毒基因型变异也可能是原因之一。     

HBV相关糖基转移酶Glt25D2的核苷酸单糖结合活性分析

目的体外克隆表达人类糖基转移酶Glt25D2,利用Biacore分析系统对其活化单糖及钙离子结合活性进行分析。方法构建Glt25D2原核表达载体pET32a-Glt25D2,转化大肠埃希菌BL21,克隆表达糖基转移酶Glt25D2。离心集菌,制备蛋白样品,进行SDS-PAGE电泳分析;融合蛋白线性梯度洗脱,Ni-NTA柱纯化,后做Western blot鉴定。用纯化后的Glt25D2融合蛋白包被CM5芯片,分别用不同浓度的活性单糖及钙离子灌注芯片,利用Biacore生物分子相互作用分析仪分析Glt25D2的活化单糖及钙离子结合活性。结果体外成功表达人类糖基转移酶Glt25D2融合蛋白。Biacore分析显示,该糖基转移酶与400、200、100、50μg/ml唾液酸的结合活性分别为108、71、50和20 RU,与200、100、50、0μg/ml钙离子的结合活性分别为37、20、10和0 RU。结论人类糖基转移酶Glt25D2重组蛋白具有较强的钙离子及唾液酸结合活性。     

HBV表面抗原大蛋白与人胰腺CDK5RAP3蛋白的亚细胞定位研究

目的 运用激光共聚焦显微技术对CDK5RAP3与LHBs进行亚细胞定位研究,为进一步研究HBV影响糖、脂类代谢的分子生物学机制提供一定的思路和方向.方法 应用酵母双杂交系统筛选人胰腺cDNA文库中的LHBs结合蛋白基因,构建真核表达质粒pDsRed1-N1-CDK5RAP3,应用激光共聚焦显微技术对CDK5RAP3与LHBs进行亚细胞定位研究.结果 成功构建真核表达质粒pDsRed1-N1-CDK5RAP3,转染了pDsRed1-N1-CDK5RAP3质粒的细胞,红色荧光信号较集中分布于细胞浆中,与经DAPI染色的细胞核无重叠.结论 证实LHBs基因和CDK5RAP3基因在体内可以表达蛋白,并提示LHBs蛋白和CDK5RAP3蛋白均主要定位在细胞浆内.     

Peroperative factors related to prognosis of regular hepatectomy in comparison with irregular hepatectomy

Objective: To analyze the peroperative factors of regular hepatectomy and irregular hepatectomy. The superiority of the clinical application of the two methods was compared in peroperative period.Methods: From 1986 to 2011, 1798 patients had consecutive liver resections with regular hepatectomy and irregular hepatectomy at the Air Force General Hospital of PLA and the General Hospital of Chinese PLA. Their medical documentation was investigated retrospectively.Results: In patients on whom regular hepatectomy and irregular hepatectomy were performed, there was no significant difference in the perioperative blood loss, complications, in-hospital mortality, hospital day, and so on. But the regular hepatectomy was independent risk factor of operating time (P<0.001,OR=1.004).Conclusions: There were no significant difference between the peroperative risk of regular hepatectomy and that of irregular hepatectomy.     

Sirt1在神经胶质瘤及瘤旁组织中的表达差异研究

目的研究神经胶质瘤及瘤旁组织中的沉默信息调节因子1(Sirt1)基因的表达差异。方法应用基因芯片技术检测30例Sirt1基因在神经胶质瘤及瘤旁组织的表达差异,随后应用RT-PCR及免疫组织化学实验验证并分析Sirt1基因的表达差异。结果基因芯片筛选出存在差异表达的基因,其中Sirt1基因在神经胶质瘤中的表达较瘤旁组织中的表达明显下降,RT-PCR实验证实与基因芯片结果一致,免疫组织化学实验结果与基因芯片、RT-PCR结果一致。结论Sirt1在神经胶质瘤及瘤旁组织中的表达存在明显差异,Sirt1基因的表达可能与神经胶质瘤的发生发展密切相关。     

肝硬化合并糖尿病伴发自发性细菌性腹膜炎患者的护理

对282例肝硬化合并糖尿病伴发自发性细菌性腹膜炎患者的特点和护理进行总结。认为肝硬化合并糖尿病伴发自发性细菌性腹膜炎的患者具有腹水细菌培养阳性率高、多重细菌感染率高、抗感染治疗效果欠佳等特点。提示在护理工作中,要重视此类患者的血糖监测;加强基础护理,预防继发感染;合理安排患者的饮食和运动;做好心理护理。