HPLC法测定十味桂芪真武颗粒中芍药苷的含量

目的：建立十味桂芪真武颗粒中芍药苷含量测定方法。方法采用高效液相色谱法对方中芍药苷含量进行测定。结果芍药苷对照品进样量在0．523～8．368μg范围内线性关系良好。方法的平均回收率为97．41％（n=6）,RSD=1．54％。结论该法快速,准确,方法稳定性、重现性好。可以用于控制十味桂芪真武颗粒中芍药苷的含量。     

三氧化二砷逆转白血病细胞多药耐药的作用及机制

以人红白血病多药耐药(MDR)细胞株K562/ADM作为研究对象,分别加入不同浓度的三氧化二砷(AS2O3)共同培养,用台盼蓝拒染法计数细胞,四氮甲唑蓝法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪检测bcl-2、P-糖蛋白(P-gP)及Annexin-V /PI-凋亡细胞数量.结果显示:①AS2O3对K562/ADM细胞生长有明显抑制作用,其强度与药物浓度及作用时间呈正相关.②AS2O3作用于K562/ADM细胞,能降低阿霉素(ADM)对K562/ADM细胞的半数抑制量(IC50),部分逆转K562/ADM细胞的MDR.③浓度<2.5μmol/L的AS2O3作用于K562/ADM细胞,对K562/ADM细胞P-gP表达无明显影响.④AS2O3作用于K562/ADM细胞,能使其bcl-2表达下降、K562/ADM细胞早期凋亡数增加.提示AS2O3对逆转白血病细胞耐药有一定作用.     

舒尼替尼耐药内皮细胞HMEC-su与EndMT的关系及其耐药特性

目的：研究舒尼替尼（sunitinib）耐药内皮细胞HMEC-su细胞的耐药特性,并对其与内皮间质转化（EndMT）之间的关系进行初步探讨。方法：结晶紫染色法观察HMEC-su细胞的形态学变化;MTT法检测HMEC-su细胞对阿霉素（DOX）的敏感性,并计算耐药指数（resistance index,RI）;罗丹明123（rhodamine 123,Rho 123）外排实验评价HMEC-su细胞的耐药性;流式细胞仪检测细胞周期分布;划痕修复实验评价细胞的迁移能力;Western blot实验检测HMEC-1和HMEC-su细胞中EndMT相关蛋白血管内皮细胞钙黏素（VE-cadherin）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达差异。结果：与HMEC-1细胞相比,HMEC-su细胞的形态发生明显变化,增殖速度减慢;HMEC-su细胞对DOX产生交叉耐药,RI为2.15（P<0.01）;Rho123蓄积实验显示,与HMEC-1细胞相比,HMEC-su细胞内Rho123荧光强度明显降低（P<0.01）,给予维拉帕米（verapamil,VRP）处理1 h后,HMEC-su细胞中Rho123荧光强度明显升高（P<0.01）;与HMEC-1细胞相比,HMEC-su细胞G₀/G₁期的细胞比例显著降低（P<0.01）,然而S期和G₂/M期显著增加（P<0.01,P<0.05）;划痕修复实验表明HMEC-su细胞的迁移能力明显高于HMEC-1细胞（P<0.01）;Western blot实验表面,与HMEC-1细胞比较,HMEC-su细胞中VE-cadherin表达显著降低（P<0.01）,α-SMA蛋白表达显著增加（P<0.05）。结论：HMEC-su细胞对DOX产生了交叉耐药,其细胞形态和周期分布存在着明显变化,初步确定EndMT与HMEC-su细胞耐药性的产生有关。     

改水改厕典型地区腹泻疾病负担研究

目的了解农村改水改厕、仅改水、仅改厕、未改水未改厕地区人群的腹泻疾病负担。方法分别于2009年7月和9月,采用多阶段分层随机抽取四川省丹棱县改水改厕、仅改水、仅改厕、未改水未改厕四个类型村,调查人群腹泻的发病情况,并用伤残调整寿命年(DALY)表示疾病负担。结果本研究共调查11 256人次,改水改厕村、仅改水村、仅改厕村和未改水未改厕村的腹泻年发病率分别为0.26、0.30、0.41、1.42次/(人·年)。与改水改厕人群比较,改水、改厕和未改水未改厕村人群腹泻的OR值分别为1.15(95%CI:0.99~1.35)、1.58(95%CI:1.36~1.83)、5.45(95%CI:4.78~6.21)。调查人群腹泻的疾病负担为0.263 8 DALYs/千人。改水改厕类型村的人群为0.163 6 DALYs/千人,仅改水村、仅改厕村和未改水未改厕村的疾病负担依次增高,分别为0.175 1、0.190 4、0.431 9 DALYs/千人。结论改水改厕可减少腹泻发生,减少疾病负担。     

玉屏风散对迁延性腹泻患儿的免疫调节作用

目的:研究玉屏风散对小儿迁延性腹泻的治疗作用,探讨玉屏风散的免疫调节机制。方法:随机抽样将120例迁延性腹泻患儿分为研究组(玉屏风散+常规治疗)60例和对照组(常规治疗)60例,观察临床疗效,并采用ELISA法检测细胞因子水平,流式细胞术检测免疫球蛋白含量。结果:①研究组与对照组相比,在退热时间、呕吐停止时间上差异无统计学意义(P>0.05),但腹泻停止时间两组相比差异有统计学意义(P<0.05),研究组腹泻停止时间较对照组缩短;②研究组与对照组相比,细胞因子IFN-γ表达水平差异有统计学意义(P<0.05),研究组血清IFN-γ水平明显高于对照组;③研究组与对照组治愈后随访期体重增长、免疫球蛋白IgG水平差异无统计学意义(P>0.05),但腹泻复发率研究组明显低于对照组(P<0.05)。结论:玉屏风散可以提高迁延性腹泻患儿血清IFN-γ水平,发挥免疫调节功能,同时缩短患儿病程,降低腹泻病复发率。     

59例成人EB病毒相关噬血细胞综合征临床特点和预后分析

目的:分析成人EB病毒相关噬血细胞综合征(EBV-HLH)患者的临床特点和预后危险因素,提高对该疾病的认识和诊治水平。方法:对2013年1月至2018年8月间南昌大学第一附属医院诊治的EBV-HLH 59例成人患者的临床特点和生存资料进行回顾性综合分析。结果:59例患者中以发热(100%)、肝功能异常(91.5%)最常见,皮疹(1.7%)、神经系统症状(3.4%)少见;血清铁蛋白升高(96.6%)、乳酸脱氢酶(LDH)升高(96.6%)、白蛋白(Alb)下降(93.2%)及可溶性CD25(s CD25)水平≥2400 U/ml(92.3%)均比较常见。本组患者中位生存时间为2.5±0.7个月,1、3、6、12个月总体生存率分别是69.5%±6.0%、44.7%±6.6%、23.9%±5.8%和19.7%±5.5%。生存资料单因素分析显示,初诊时EBV-DNA拷贝数≥5×10^5拷贝数/ml(P=0.028)、LDH水平≥600 U/L(P=0.012)、Plt计数<20×10^9/L(P=0.022)的患者预后更差,系统使用HLH-94/2004方案治疗能有效改善EBV-HLH患者预后(P<0.001)。多因素分析显示,LDH水平≥600 U/L(P=0.01)、Plt计数<20×1~09/L(P=0.013)、未系统使用HLH-94/2004方案治疗(P<0.001)均是影响患者生存时间的独立预后不良因素。结论:EBV-HLH患者病情凶险,早期死亡率高,初诊时EBV-DNA拷贝数≥5×10^5/ml、LDH水平≥600 U/L、Plt计数<20×10^9/L的患者预后不良,HLH-94/2004方案治疗能有效改善患者生存情况,应尽早系统治疗。     

快速检测耐异烟肼结核分支杆菌方法的研究

目的 应用多重聚合酶链反应-单链构象多态性分析（multiple—Polymerase Chain Reaction—Single Strand Conformation Polymorphism,multi—PCR—SSCP）方法,快速、特异地同时检出耐异烟肼（isoniazid,INH）结核分支杆菌aphC启动子、inhA、katG基因的突变情况,并与直接测序（derictsequencing,DS）结果相比较,参照药敏试验,探讨该方法的可行性。 方法 根据结核分支杆菌的aphC启动子序列、inhA序列、katG序列,分别设计出3对特异性寡聚核苷酸引物,采用multi—PCR-SSCP技术,同时检测对结核分支杆菌耐INH起作用的这三个基因的突变情况;同时进行耐药株的测序分析。 结果 对H37Rv标准株、临床分离INH敏感株（23株）及INH耐药株（35株）进行multi—PCR—SSCP分析,突变检出率82．9％（29／35）;耐药株测序分析突变检出率为85．7（30／35）。两种方法的符合率为97．1％E（29＋5／）／35]。 结论 耐药基因检测指导治疗是一种新探索,multi—PCR—SSCP方法敏感、特异,能同时快速有效地检测结核分支杆菌aphC启动子、inhA、katG三个INH耐药基因的突变,提高检验效率,有望成为临床指导用药的好方法。     

TRKC基因体外转染大鼠神经干细胞的方法

目的探讨体外转染TRKC基因的神经干细胞的制备方法。方法利用自行合成的引物进行PCR反应,定向克隆构建TRKC-cDNA质粒并进行DNA测序分析,将pEGFP-C1质粒和TRKC-cDNA质粒进行酶切、重组,构建出pEGFP-C1-TRKC质粒。用脂质体将重组质粒转染到体外培养的大鼠神经干细胞中。用W estern b lot、免疫荧光和MTT法观察转染基因的表达和转基因后神经干细胞的增殖活性。结果成功构建了TRKC-cDNA质粒,DNA测序证明所获得的目的基因与公布序列的一致性为99%,所获得的重组子符合研究要求。pEGFP-C1-TRKC质粒转染到神经干细胞后,宿主细胞能高效、稳定地表达目的基因产物GFP和TRKC。在NT-3作用下转TRKC基因神经干细胞的增殖活性有明显增强。结论以质粒为载体、脂质体为介导可成功地把TRKC基因转染到神经干细胞内,转染基因表达好且具有功能。     

基于细胞焦亡探讨琴叶榕提取物对急性酒精性肝损伤的保护机制

目的:研究细胞焦亡在琴叶榕根的不同溶剂提取物保护急性酒精性肝损伤中的作用。方法:56只雄性C57BL/6小鼠随机分为正常组,模型组,水飞蓟宾组(60 mg·kg-1),鲜药水提物组(48 g·kg-1),干药水提物组(48 g·kg-1),干药50%醇提物组(48 g·kg-1),干药95%醇提物组(48 g·kg-1),每组8只。其中水飞蓟宾和不同溶剂的琴叶榕提取物,各组小鼠灌胃给药18 d,正常组与模型组小鼠灌胃给予等体积的纯水。灌胃给药15 d后,模型组、水飞蓟宾组和各个琴叶榕根提取物组小鼠给予50%乙醇(12 mL·kg-1)灌胃,建立急性酒精性肝损伤模型。末次造模结束后禁食14 h后摘眼球取血,开腹取肝脏,计算肝脏指数,苏木素-伊红(HE)染色观察肝脏组织病理学变化;试剂盒检测小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性;硫代巴比妥酸(TBA)法检测肝脏丙二醛(MDA)含量,微板法检测乳酸脱氢酶(LDH)水平;肝脏组织切片末端标记法(TUNEL)染色检测肝细胞焦亡;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞焦亡相关蛋白。结果:与正常组比较,模型组ALT,AST,MDA,LDH水平显著升高,肝脏指数显著升高,TUNEL染色阳性、炎症因子、焦亡相关蛋白表达显著升高(P0. 05);与模型组比较,各个琴叶榕根提取物给药干预组小鼠ALT,AST,MDA,LDH水平均明显下降(P0. 05),肝脏指数有不同程度的下降,TUNEL染色阳性、炎症因子、焦亡相关蛋白表达水提物处理组明显下降(P0. 05);肝脏病理切片表明,琴叶榕根提取物能改善小鼠急性酒精肝损伤肝组织病理学变化。结论:琴叶榕根提取物对急性酒精性肝损伤具有一定的保护作用,且其水提物作用机制可能与焦亡通路相关。