类风湿关节炎患者外周血单个核细胞蛋白质组学研究

目的 运用蛋白质组学的方法,比较正常人及早期活动性类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMCs)蛋白质的差异表达,寻找RA疾病相关致病蛋白质.方法 选取9例早期活动期RA患者以及9名健康成年志愿者,用淋巴细胞分离液分离PBMCs,抽提PBMCs中的蛋白,采用同相pH梯度(IPG)双向凝胶电泳(2-DE)分离正常人及RA患者PBMCs总蛋白质.凝胶经考马斯亮蓝染色显色后,PDQuest图像分析软件进行比较分析、识别差异表达的蛋白质,对差异蛋白质点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)进行鉴定,运用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法验证部分差异蛋白质.结果 获得RA患者及正常人PBMCs蛋白质双向凝胶电泳图谱,平均蛋白质点数分别为556和579,匹配率分别为89.4%和 88.5%,通过比较分析,差异表达蛋白质点数为23,选取18个点进行质谱鉴定,成功鉴定14个蛋白质,其中a-肌动蛋白、纤维蛋白素原a-链、载脂蛋白A-I(ApoA-I)等9个蛋白质点在RA中表达上调,硫氧还蛋白-2、谷胱甘肽S-转移酶等6个蛋白质点在RA中表达下调,这些差异蛋白质的功能涉及物质代谢、抗氧化、信号传导、能量产生及细胞骨架.并用RT-PCR方法验证差异蛋白质ApoA-I.其结果与上述蛋白质差异表达结果相符.结论 在RA患者PBMCs中存在着差异表达蛋白质,这些差异蛋白质可能是RA发病的内在因素.其RT-PCR结果与蛋白质差异表达相符,证明蛋白质组研究的可靠性.     

胶原性关节炎大鼠血浆肿瘤坏死因子α和滑膜血管内皮生长因子表达的相关性

背景：类风湿关节炎的滑膜病变具有类肿瘤样生长的特点，表现为滑膜组织的肥厚增生，血管翳形成，对关节周围的组织产生侵蚀和破坏。在滑膜类肿瘤样病变的发展过程中有多种炎性因子和生长因子的参与，其中肿瘤坏死因子α和血管内皮生长因舌对滑膜炎症的发展及滑膜血管翳的形成具有十分重要的作用。 目的：同步观察胶原性关节炎大鼠不同时间点的血浆肿瘤坏死因子α含量与滑膜血管内皮生长因子表达变化，探讨肿瘤坏死因子α和血管内皮生长因子在类风湿关节炎发病机制中的作用及其相关性。 设计：随机分组设计、动物实验。 单位：中南大学湘雅医院中西医结合研究所。 材料：实验于2003—07／1l在中西医结合研究所实验室完成。选择13龄45～50d的SD大鼠40只，随机分为正常对照组10只，胶原性关节炎模型组30只。 方法：采用10mg牛Ⅱ型胶原与5mL完全福氏佐剂研磨后，以每只100μL从大鼠尾根部皮内注射免疫，于2ld后按上述方法和剂量再次重复免疫制作大鼠胶原性关节炎模型。依据关节红肿程度和范围及关节肿大和变形情况进行关节炎指数积分评定，关节炎指数积分越高，关节炎症状越严重。正常对照组于25d断头取血，胶原性关节啖模型组于免疫（造模）后25，30，35，40，45d分别断头取血，采用放射免疫法检测胶原性关节炎大鼠不同时间点的血浆肿瘤坏死因子α含量，同时采用免疫组织化学法检测滑膜组织血管内皮生长因子的表达水平，观察其发病时间与滑膜新生血管形成、关节炎指数积分以及肿瘤坏死因子α和血管内皮生长因子之间关系。用直线相关分析法分析肿瘤坏死因子α与血管内皮生长因子之间的关系，用等级相关分析法分析关节炎指数积分与血管内皮生长因子及肿瘤坏死因子α之间的关系。 主要观察指标：胶原性关节炎发病时间与关节炎指数积分的关系，与血浆肿瘤坏死因子α含量及滑膜血管内皮生长因子表达的关系，胶原性关节炎大鼠血浆肿瘤坏死因子α与滑膜血管内皮生长因子表达相关分析。 结果：纳入动物40只，均进入结果分析。随着胶原性关节炎发病时间的延长，滑膜新生血管逐渐增多、滑膜增厚、关节炎指数积分逐渐增加、肿瘤坏死因子α含量和血管内皮生长因子水平也随之升高；其关节炎指数积分与血管内皮生长因子表达水平呈正相关（r=０．535，P〈0．05），与肿瘤坏死因子α含量虽有相关增高趋势，但差异无显著性（r=０．37l，P〉0．05）。血浆肿瘤坏死因子α含量与血管内皮生长因子表达水平呈显著正相关（r=０．893，P〈0．01）。 结论：肿瘤坏死因子α与血管内皮生长因子在类风湿关节炎炎症反应，滑膜新生血管形成的细胞因子网络中起重要作用，二者相互可能具有影响，相互促进，充当恶性网络循环的调控作用；是介导类风湿关节炎发生和发展以及骨质侵蚀、致残的众多因子中的关键因子。     

脑出血大鼠脑内Angiopoietin-1及其受体Tie-2表达的动态变化

目的：观察与微血管系统重建过程密切相关的促血管生成素（Angiopoietin-1，Ang-1）及其受体含免疫球蛋白样环和上皮生长因子样域酪氨酸激酶-2（tymsine kinase that contains immunoglobulin—like loops and epidermal growth factor-similar domains-2，Tie-2）在大鼠基底核脑出血后表达的动态变化。方法：用Ⅶ型胶原酶诱导大鼠脑出血模型，采用HE染色观察大鼠脑组织形态学改变，免疫组化法检测第1、2、4、7、14、21和28d血管生成素Ang-1和其受体Tie-2的表达，计数阳性血管作为观察指标。结果：HE染色显示正常组及假手术组各时间点取材未见血肿及局部明显病理学改变，而模型组第4d血肿周围出现微血管段，而后阳性微血管段表达逐渐持续增多，至第21d大量伸人血肿区；免疫组化研究显示正常及假手术组不同时间点Ang-1和Tie-2表达均未见明显变化，模型组大鼠在脑出血后第2d起Ang-1和Tie-2阳性微血管表达明显多于其他两组，而后表达逐渐升高（P〈0．01），至21d达到高峰，随后开始下降，28d时仍有表达。结论：在脑出血后，损伤区Ang-1及其受体Tie-2的表达上调，可能通过调节血管生成过程而促进脑出血损伤区微血管系统重建。     

实验性关节炎大鼠血浆肿瘤坏死因子-α和滑膜血管内皮生长因子表达相关性分析

目的　同步观察实验性关节炎大鼠不同时间点的血浆肿瘤坏死因子 α (TNF α)含量与滑膜内皮生长因子 (VEGF)表达变化 ,探讨TNF α和VEGF在类风湿关节炎 (RA)发病机制中的作用及其相关性。方法　采用Ⅱ型胶原与完全福氏佐剂诱导SD大鼠实验性关节炎 (CIA)模型 ,同步检测CIA大鼠不同时间点的血浆TNF α含量和滑膜组织VEGF的表达水平 ,并同时观察其发病时间与滑膜新生血管形成、关节炎指数积分以及TNF α和VEGF之间关系。用直线相关分析法分析TNF α与VEGF之间的关系 ,用等级相关分析法分析关节炎指数积分与VEGF及TNF α之间的关系。结果　随着CIA发病时间的延长 ,滑膜新生血管逐渐增多 ,滑膜增厚 ,关节炎指数积分逐渐增加 ,TNF α含量和VEGF水平也随之升高 ;其关节炎指数积分与VEGF表达水平呈正相关关系 (r =0 5 35、P <0 0 5 ) ,与TNF α含量虽有相关增高趋势 ,但差异无显著性 (r =0 371 ,P >0 0 5 )。血浆TNF α含量与VEGF表达水平呈显著正相关关系 (r =0 893,P <0 0 1 )。结论　TNF α与VEGF在RA炎症反应 ,滑膜新生血管形成的细胞因子网络中起重要作用 ,二者可能具有互相影响 ,相互促进 ,充当恶性网络循环的调控作用 ;是介导RA发生和发展以及骨质侵蚀、致残的众多因子中的关键因子。     

弹性成像诊断BI-RADS Ⅳ级乳腺肿块良恶性的临床研究

目的 初步探讨助力式弹性成像(EI)及声辐射脉冲力技术(ARFI)在BI-RADS Ⅳ级乳腺肿块叶的诊断价值.方法 对52例BI-RADSⅣ级乳腺肿块采用EI及ARFI技术诊断其良恶性,并以病理结果为金标准.结果 EI及ARFI技术诊断肿块良恶性的敏感度、特异度、准确度分别为78.6％、100％、88.5％及75％、99.3％、67.9％.两种方法在诊断BI-RADSⅣ级肿块良恶性上差异无统计学意义(P＞0.05).结论 弹性成像能辅助常规超声诊断乳腺肿块良恶性,具有重要的临床意义.     

平肝熄风汤对脑出血大鼠海马线粒体膜电位和神经功能的影响

目的观察大鼠脑出血后神经缺损症状和线粒体膜电位的改变,及中药制剂平肝熄风汤的干预作用. 方法用Ⅶ型胶原酶于脑内定位注射诱导大鼠脑出血模型.神经缺损积分评定神经功能;用荧光分光光度计测定线粒体悬液的荧光强度反映线粒体膜电位. 结果大鼠脑出血后迅速出现神经缺损症状,平肝熄风汤能明显降低神经缺损症状积分( 4 h 8.80分, 1 d6.80分, 3 d 2.80分, 7 d 1.60分).脑出血大鼠线粒体膜电位于术后 4 h显著下降, 1d时膜电位下降达高峰, 3, 7 d逐步恢复,仍低于正常组和假手术组( t=7.352 P< 0.05 ).平肝熄风汤治疗组在脑出血后 1, 3, 7 d,线粒体膜电位均明显高于模型组( t=2.583 P< 0.05). 结论大鼠脑出血后线粒体膜电位下降;平肝熄风汤能阻断膜电位下降,同时能减轻出血后神经损伤.     

胶原性关节炎大鼠血浆肿瘤坏死因子α和滑膜血管内皮生长因子表达的相关性

背景:类风湿关节炎的滑膜病变具有类肿瘤样生长的特点,表现为滑膜组织的肥厚增生,血管翳形成,对关节周围的组织产生侵蚀和破坏。在滑膜类肿瘤样病变的发展过程中有多种炎性因子和生长因子的参与,其中肿瘤坏死因子α和血管内皮生长因子对滑膜炎症的发展及滑膜血管翳的形成具有十分重要的作用。目的:同步观察胶原性关节炎大鼠不同时间点的血浆肿瘤坏死因子α含量与滑膜血管内皮生长因子表达变化,探讨肿瘤坏死因子α和血管内皮生长因子在类风湿关节炎发病机制中的作用及其相关性。设计:随机分组设计、动物实验。单位:中南大学湘雅医院中西医结合研究所。材料:实验于2003-07/11在中西医结合研究所实验室完成。选择日龄45～50d的SD大鼠40只,随机分为正常对照组10只,胶原性关节炎模型组30只。方法:采用10mg牛Ⅱ型胶原与5mL完全福氏佐剂研磨后,以每只100μL从大鼠尾根部皮内注射免疫,于21d后按上述方法和剂量再次重复免疫制作大鼠胶原性关节炎模型。依据关节红肿程度和范围及关节肿大和变形情况进行关节炎指数积分评定,关节炎指数积分越高,关节炎症状越严重。正常对照组于25d断头取血,胶原性关节炎模型组于免疫(造模)后25,30,35,40,45d分别断头取血,采用放射免疫法检测胶原性关节炎大鼠不同时间点的血浆肿瘤坏死因子α含量,同时采用免疫组织化学法检测滑膜组织血管内皮生长因子的表达水平,观察其发病时间与滑膜新生血管形成、关节炎指数积分以及肿瘤坏死因子α和血管内皮生长因子之间关系。用直线相关分析法分析肿瘤坏死因子α与血管内皮生长因子之间的关系,用等级相关分析法分析关节炎指数积分与血管内皮生长因子及肿瘤坏死因子α之间的关系。主要观察指标:胶原性关节炎发病时间与关节炎指数积分的关系,与血浆肿瘤坏死因子α含量及滑膜血管内皮生长因子表达的关系,胶原性关节炎大鼠血浆肿瘤坏死因子α与滑膜血管内皮生长因子表达相关分析。结果:纳入动物40只,均进入结果分析。随着胶原性关节炎发病时间的延长,滑膜新生血管逐渐增多、滑膜增厚、关节炎指数积分逐渐增加、肿瘤坏死因子α含量和血管内皮生长因子水平也随之升高;其关节炎指数积分与血管内皮生长因子表达水平呈正相关(r=0.535,P<0.05),与肿瘤坏死因子α含量虽有相关增高趋势,但差异无显著性(r=0.371,P>0.05)。血浆肿瘤坏死因子α含量与血管内皮生长因子表达水平呈显著正相关(r=0.893,P<0.01)。结论:肿瘤坏死因子α与血管内皮生长因子在类风湿关节炎炎症反应,滑膜新生血管形成的细胞因子网络中起重要作用,二者相互可能具有影响,相互促进,充当恶性网络循环的调控作用;是介导类风湿关节炎发生和发展以及骨质侵蚀、致残的众多因子中的关键因子。     

新生儿转运的护理体会

新生儿转运是新生儿急救工作的重要组成部分,对降低新生儿病死率有非常重要的意义.我院2011年6月共完成危重新生儿转运108例,转运途中无1例死亡.现将护理体会报道如下.     

小儿腰椎穿刺术后腰痛的观察与护理

腰椎穿刺术是在局麻下进行的一项创伤性检查,由于腰椎穿刺时患儿意识清醒,手术可引起患儿心理和生理的应激反应,并造成穿刺后的各种并发症,尤其是腰痛[1]。笔者对2008年5～12月我院198例施行腰椎穿刺术的患儿进行了观察和护理,现报道如下。     

《中医眼科》教学中临床思维能力培养的应用研究

为培养中医院校学生临床思维能力,使学生早临床、多临床,毕业后能尽早、尽快适应临床工作,以临床思维为切入点制定教学目标,确定教学内容,运用多种教学方法,引导学生了解临床诊疗过程。结果显示,这种教学方式不仅能有效提高《中医眼科》教学质量,还有利于培养学生实践动手能力,形成科学的临床思维模式,为今后的临床工作打下坚实基础。