血管内皮生长因子在肝癌血管内皮细胞体外管腔形成中量效和时效局限性的实验研究

目的：利用体外管腔形成模型,研究血管内皮生长因子（VEGF）对肿瘤血管内皮细胞（TECs）调控的精准性,探讨以 VEGF 为靶点的抗肿瘤药物在临床应用中出现缺陷的潜在机制。方法采用 CD31免疫磁珠分选人肝癌标本中的 TECs,在含 Matrigel 基质胶的96孔板中,分别与不同浓度 VEGF 共培养,观察不同时间的 TECs 体外管腔形成能力,以正常人脐静脉血管内皮细胞（ HUVECs）为对照。结果1）体外分离培养的 TECs 拟血管内皮细胞梭状形态,其96％的细胞表达内皮细胞特异性标记 CD31;2）TECs 在微小量（基础培养条件,2 ng·mL -1）VEGF165时,体外管腔形成较少或不成腔,而对照组 HUVECs 却能形成明显的管腔并分支成网;当附加10 ng·mL -1 VEGF165时,在4 h 观察到 TECs 如同 HUVECs 形成了管腔,在6 h 出现明显的分支网;然而,当附加20 ng·mL -1 VEGF165时,在6 h 观察到 TECs 形成的管腔明显减少;统计分析显示,10 ng·mL -1 VEGF165组 TECs 成管能力比2 ng·mL -1 VEGF165组高出6倍（ P ﹤0.001）,而20 ng·mL -1 VEGF165组 TECs 成管能力显著下降至10 ng·mL -1 VEGF165组的4.5倍（P ﹤0.001）;3）10 ng·mL -1 VEGF165组在培养4、6、8 h 均可见 TECs 管腔形成,但以6 h 为显著;在20 h 时,TECs 的管腔消失,而对照组 HUVECs 却还有明显的管腔分支网。结论肝癌 TECs 体外管腔形成对 VEGF165既有依赖性但又有量-效局限性,过高 VEGF 浓度能抑制性影响 TECs（而不是 HUVECs）管腔形成能力。在 VEGF 的刺激下,TECs 体外管腔形成的时效性短于 HUVECs。我们的实验结果提示,临床应用抗 VEGF 的抗肿瘤药物疗效不一可能与 VEGF 在 TECs 体外管腔形成的量效和时效的局限性有关。     

p27^kip1及CyclinD1在肝细胞癌中的表达及意义

目的研究p27kipl和CyclinD1蛋白表达在肝细胞肝癌(HCC)中发生、发展中的作用.方法免疫组化S-P法检测40例HCC、15例肝硬化组织和5例正常肝组织石蜡标本p27kipl和CyclinD1蛋白表达.结果 p27kipl蛋白在HCC、肝硬化、正常肝组织表达阳性率分别为32.5%(13/40)、60%(9/15)、80%(4/5),p27kipl蛋白在HCC中表达与肝硬化和正常肝组织中表达比较有显著性差异(P＜0.05),p27kipl表达且与HCC的组织学分级、类型、淋巴结转移和生存期有统计学差异;CyclinD1蛋白在HCC、肝硬化、正常肝组织表达阳性率分别为57.5%(23/40)、46.67%(7/40)、40%(2/5),CyclinD1蛋白在HCC中表达与肝硬化和正常肝组织中表达比较无显著差异(P＞0.05),CyclinD1表达仅与HCC的组织学分级有统计学差异;p27kipl和 CyclinD1蛋白表达两者之间无相关性.结论 p27kipl和CyclinD1与HCC的发生、发展有着密切联系,两者独立地起作用;p27kipl蛋白在判断患者病情预后方面有较重要的价值.