人羊膜来源间质干细胞的分离、培养及鉴定

目的:探讨来源于人羊膜间质干细胞(amniotic-derived mesenchymal stem cells,AD-MSCs)的分离、培养及鉴定.方法:无菌条件下取正常足月剖腹产胎儿的羊膜剪成碎片,加入胰酶37℃消化30 min,共2次,然后加入终浓度1.0 g/L的胶原酶和0.1g/L的DNA酶,37℃消化60 min,收集细胞,用含体积分数为10%胎牛血清(FBS)的DMEM/F12培养基进行培养和纯化.倒置显微镜观察细胞形态,取4～6代的细胞用流式细胞仪分析细胞表面标志,取扩增第3代后的AD-MSCs加入全反式维甲酸(RTRA)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)向神经元样细胞诱导分化.结果:来源于羊膜的细胞种植于DMEM/F12培养基中后,可在体外大量扩增并纯化;流式细胞检测显示:CD29、CD44、HLA-ABC阳性表达,CD34、CD45、HLA-DR阴性表达.免疫细胞化学显示AD-MSCs经RTRA和bFGF诱导后表达神经元特异性烯醇化酶,不表达胶质纤维性蛋白.结论:羊膜中存在间质干细胞,其可以在体外培养、扩增、纯化,并可在体外向神经元样细胞分化.     

胸骨横断微创小切口胸腺扩大切除术治疗重症肌无力

目的探讨经第二肋间胸骨横断微创伤小切口行胸腺扩大切除术治疗重症肌无力（myasthenia gravis,MG）的临床效果。方法对485例行第二肋间胸骨横断微创小切口胸腺完整切除治疗的MG患者的临床病理资料进行回顾分析。结果手术时间平均（70.4±18.6）min;术中出血平均（50.6±19.4）mL;术后多功能监护24-72h;术后引流量平均（90.9±32.6）mL;无术后活动性出血需2次手术者,引流管均在术后48h内拔出;未因疼痛而用镇痛药者;伤口I／甲级愈合;术后发生危象21例,危象发生率为4.3％（21／485）,其中18例治愈,2例自动出院,1例死亡。全组失访6例,其余病例随访6-82个月,无胸骨畸形愈合,完全缓解率46.8％（227／485）、部分缓解率40.9％（198／485）,本组总有效率为87.6％（425／485）。结论充分术前准备后经第二肋间横断胸骨微创伤小切口行胸腺扩大切除术治疗重症肌无力创伤小、术后恢复快、美容、临床效果良好。     

经左胸保留膈肌食管裂孔术式在食管癌手术中的应用

目的探讨经左胸保留膈肌食管裂孔术式在食管癌手术中的应用效果。方法随机接受食管癌手术的68例患者分为2组,每组34例。观察组采用经左胸保留膈肌食管裂孔术式,对照组采用经左胸切开膈肌术式。比较2组手术效果。结果 2组手术时间、术中出血量及术后膈疝发生率差异无统计学意义(P0.05)。观察组术后肺部感染率低于对照组;术后第7天及1个月的MVV%、FEVl%、FVC%及ΔPaO_2、ΔPaCO_2均优于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。术后3个月2组患者的MVV%、FEVl%、FVC%及ΔPaO_2、ΔPaCO_2差异均无统计学意义(P0.05)。结论经左胸保留膈肌食管裂孔的食管癌手术,可有效改善患者术后近期的呼吸功能,减少术后肺部感染率。     

胸腔镜胸腺扩大切除治疗儿童重症肌无力临床观察

目的探讨胸腔镜胸腺扩大切除术治疗儿童重症肌无力的临床应用价值。方法胸腔镜胸腺扩大切除术治疗儿童重症肌无力12例,并随访6~12月评价疗效。结果所有患儿均顺利完成手术,无严重围手术期并发症;术后随访6~12月,完全缓解4例,好转5例,无变化3例。结论胸腔镜胸腺扩大切除术创伤小、恢复快,是治疗儿童重症肌无力的有效方法。     

GSTM3 mRNA在重症肌无力患者胸腺组织中的表达

目的 探讨谷胱甘肽S-转移酶m3(GSTM3mRNA在重症肌无力患者及正常人胸腺组织中的表达情况.方法 利用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)方法定量分析GSTM3 mRNA在重症肌无力胸腺与正常胸腺组织中的表达水平.结果 GSTM3 mRNA在重症肌无力患者和正常人胸腺组织中的表达水平分别为0.67±0.10和0.58±0.05,两者比较差异有统计学意义(P<0.01.结论 GSTM3 mRNA在MG胸腺组织中高表达,可能与MG的发生、发展密切相关.     

重症肌无力增生型胸腺组织11KD差异蛋白带双向电泳图谱的建立

目的建立分辨率高和重复性好的重症肌无力(MG)增生型胸腺组织11KD差异(异常)蛋白带的二维凝胶电泳图谱。方法首先采用SDS-PAGE电泳筛选出含有11KD差异(异常)蛋白条带的MG增生型胸腺组织,然后富集11KD蛋白条带。以17cm pH3-10固相pH梯度胶条(immobilized pH gradient,IPG)做第一向等电聚焦(IEF),12%SDS聚丙烯酰胺凝胶为第二向进行双向电泳(2-DE),PD Quest 7.1软件分析电泳图谱。结果11KD差异(异常)蛋白条带的出现率为72.2%;通过双向电泳,建立分辨率高和重复性好的重症肌无力(MG)增生型胸腺组织11KD差异蛋白带的双向凝胶电泳图谱,进一步分离11KD差异(异常)蛋白带,共得到(30±6)个蛋白点。结论通过蛋白质组技术快速建立重症肌无力11KD差异(异常)蛋白表达图谱,为进一步研究差异表达蛋白的功能提供实验基础。     

人胸腺和脐血造血干/祖细胞联合移植对裸鼠细胞免疫功能的影响

背景：T细胞在抗感染、抗肿瘤和免疫调节等中起重要作用,但T细胞分化发育机制尚未完全阐明。 目的：观察人胸腺、人脐血联合移植后裸鼠体内T细胞分布及免疫功能的重建。 方法：Balb/c nu/nu裸鼠30 只,随机分为2组：实验组肾被膜下移植胸腺组织,2周后将新鲜分离的脐血CD34+细胞悬液经小鼠静脉输入,对照组不经胸腺移植直接给予CD34+细胞移植,两组小鼠饲养至60 d时检测免疫功能。 结果与结论：人胸腺在裸鼠肾被膜下存活并且表达CD3、HLA-DR分子,胸腺与CD34+细胞联合移植组小鼠脾脏可见点块状分布的CD3+细胞。实验组CD3+细胞、CD4+细胞、CD8+细胞及CD4+CD25+细胞比例均显著高于对照组。实验组裸鼠对移植人胃癌BGC823细胞有排斥作用,而对照组没有。结果显示胸腺和CD34+细胞联合移植能使裸鼠获得T细胞介导的细胞免疫功能,具有抗肿瘤能力。     

胶囊内镜检查胃肠疾病116例的临床分析

目的评价胶囊内镜对不同消化道症状并疑似小肠疾病患者的应用价值。方法对我院2010年8月至2012年6月期间进行胶囊内镜检查的116例患者的临床资料进行回顾性分析。结果 116例患者完成胶囊内镜检查116例,共行116次检查,阳性检出率53.5%(62/116)。共发现小肠病变49例,小肠病变阳性率为42.2%(49/116),其中82例腹痛患者发现小肠病变33例(40.2%),12例腹泻患者发现小肠病变4例(33.3%),17例消化道出血患者发现小肠病变12例(70.6%)。其中炎性病变、隆起性病变最为常见。9例患者胶囊内镜胃内通过迟缓,1例患者胶囊内镜完全停滞于胃内,未至小肠,直至电池耗竭;3例胶囊内镜通过小肠迟缓;胶囊内镜在小肠内运行平均时间为369min。检查过程中患者无任何不适。结论胶囊内镜对不同消化道症状并疑似小肠疾病的就诊患者均有较好的诊断价值,简单、安全,并发症及风险小,依从性好。检查前充分肠道准备可提高检查质量。     

利用基因芯片技术筛选重症肌无力差异表达基因

目的：筛查胸腺组织重症肌无力（MG）相关基因,探讨MG发生机制．方法：分别抽提6例MG患者胸腺组织及正常胸腺组织总RNA,逆转录合成相应以Cy5和Cy3标记的cDNA-链做探针,在含有14000点人类基因组芯片BiostarH-140s上进行杂交,ScanArray4000扫描仪扫描芯片荧光信号图像,用GenePixPr03．0软件对扫描图像进行数字化处理和分析．利用实时荧光定量PCR技术,对筛选出的部分差异表达基因变化水平,在39例MG胸腺组,10例正常对照胸腺组中进行分析验证．结果：筛选出差异表达的基因254个,其中MG胸腺组中表达上调的基因82个,表达下调的基因172个．这些异常表达的基因按照功能,可以分为原癌基因和抑癌基因（3／3,即上调基因3个／下调基因3个,下同）、免疫相关蛋白（1／9）、细胞受体（1／2）、离子通道和运输蛋白（2／3）、细胞信号和传递蛋白（8／13）以及未知功能基因．验证实验显示,MG胸腺组天冬氨酰氨基葡糖苷酶（AGA）和分拣微管连接蛋白17（SNX17）相对表达量分别为[（0．671±0．078）,（0．698±0．085）,n=39],与正常胸腺组的[（0．611±0．043）,（0．617±0．068）,n=10]相比较,差异有统计学意义（P〈0．05）．结果与基因芯片一致．结论：MG患者胸腺组织与正常胸腺组织之间存在明显的基因表达差异,为MG患者提供相当数量的与免疫、细胞受体和细胞信号传递等相关的差异表达基因,为MG早期诊断和治疗提供了线索．