大肠杆菌K—12C—600株气溶胶稳定性的初步研究

我们使用气溶胶设备，以荧光素钠作为化学示踪剂，观察了大肠杆菌Ｋ－１２Ｃ－６００株（简称大肠杆菌）气溶胶在不同温湿度条件下的稳定性。试验结果证明：气雾室在每分种４转时，大肠杆菌气溶胶的粒数中值直径在２．６－３．６μｍ之间。在不同温度（１０℃，２０℃，３０℃），同一相对湿度（６０％）条件下，大肠杆菌气溶胶的存活率随着温度的升高而降低。在同一温度（２０℃），不同相对湿度（３０％，６０％，９０％）条件下，     

RT-Se minested-PCR检测风疹病毒

风疹病毒(RV)可引起胎儿畸形,特别是在1～12孕周母体患风疹的胎儿RV感染率高达80％,其中90％导致先天性风疹综合症。因此妊娠早期RV感染的确诊在优生优育中显得尤为重要。目前检测RV现症感染主要通过血清方法测定病毒特异IgM,然而胎儿在18孕周前免疫系统发育不全、IgM应答受到限制,影响检测结果。核酸测定与发育无关,故建立RV的RT-Seminested-PCR方法。利用GOLDKEY软件在     

SARS-CoV的培养和灭活条件的研究

目的　研究SARS CoV的大量培养和灭活方法,为制备马抗SARS免疫球蛋白制剂提供安全的病毒。方法　使用SARS CoV感染Vero、Vero E6和2BS细胞株,筛选对SARS CoV较敏感的细胞株和最佳病毒感染量;在2 5℃、33℃和37℃培养条件下,检测SARS CoV的最适培养温度。在室温下,使用1∶2 0 0 0～1∶2 0 0 0 0的β丙内酯浓度灭活SARS CoV ,观察最佳灭活时间和效果。结果　SARS CoV对Vero和Vero E6细胞株比较敏感。在37℃、5 %CO2 孵箱中培养72h ,细胞病变达75 %以上。1∶4 0 0 0的β丙内酯能够完全灭活SARS CoV。将灭活后的病毒液在2℃～8℃作用16h ,37℃水浴2h能够完全使β丙内酯的毒性水解。结论　用Vero或Vero E6细胞培养SARS CoV ,在37℃、5 %CO2 孵箱中培养72h ,病毒滴度最高。用1∶4 0 0 0的β丙内酯浓度加入病毒液中,作用1h能够完全灭活SARS CoV。     

抗SARS-CoV血清抗体体外抗SARS病毒实验研究

目的研究三个批号的抗SARS-Cov血清抗体体外对SARS-CoV的抑制作用。方法采用MTT法,观察药物对SARS-Cov的抑制作用。结果MTT法测得三个批号的抗SARS-CoV血清抗体的最大无毒浓度均小于10μg/mL。不同时间点的治疗指数（TI）：2h组〉6h组〉12h组〉24h组;不同批号的治疗指数（TI）200307批〉200306批〉200308批。结论在本实验条件下抗SARS-CoV血清抗体体外有一定的抗SARS-CoV作用,为其治疗SARS-CoV感染提供了实验依据。     

可溶性CD14突变体的构建与表达研究

目的 将人CD14信号转导启动区97－101氨基酸进行丙氨酸置换突变。,构建直核表达质粒,并在COS－7细胞中进行表达。方法 采用两轮聚合酶链反应定点突变方法,对人可溶性CD14推测中的LPS信号转导启动区之一,N端97－101氨基酸用丙氨酸进行置换交换。将突变PCR片段克隆至载体pGEM-T,进行酶切鉴定及序列分析。将突变基因亚克隆至真核表达质粒pClneo中,转染COS－7细胞进行瞬时表达,并用SDS－PAGE和Western blot检测表达蛋白。结果 测序结果证实,CD14的N端97－101氨基酸发生了连续丙氨酸置换突变。SDS－PAGE表明,突变体基因在COS－7细胞中得到瞬时表达。Western blot显示,抗CD14多克隆抗体可与重组表达的突变体蛋白特异性结合。结论 成功地构建并表达CD14 97－101氨基酸丙氨酸置换突变体,为研究CD14信号转导缺失突变体的生物学活性与功能打下了基础。     

一步法提取RNA反转录－多聚酶链反应检测汉坦病毒RNA

用反转录－多聚酶链反应(RT-PCR )检测汉坦病毒(Hantavirus)的基因RNA,同时与细胞分离病毒的敏感性进行比较。用异硫氛酸服一载体吸附法,一步提取汉坦病毒RNA。将脑腔接种汉坦病毒颇临死亡的乳鼠脑制成10%的悬液,并系列稀释,从1^－1’到10^－12的12梯度。结果表明,该引物能够扩增出汉坦病毒H8205株的RNA,说明汉坦病毒H8205株与76-118株在M片段上具有共同的保守序列.RT-PCR可以检测出4. 64 X 10^-3TCLD₅₀/ml的病毒,而Vero-E₆细胞只能分离检测出4.64 ×10^－2TCLD₅₀/ml,所以RT-PCR检测病毒比细胞分离检测病毒敏感。     

BALB/c小鼠肌肉注射灭活SARS病毒对系统免疫细胞表型的影响

目的：了解灭活SARS病毒肌肉注射途径对系统免疫的影响。方法：将5周龄雌性BALB/c小鼠随机分为两组，每组10只，免疫组小鼠每只注射50μg的灭活病毒悬液，对照组注射等体积PBS。每组分别在免疫的8d和14d处死5只小鼠，分离脾细胞和外周血淋巴细胞，流式细胞仪观察其淋巴细胞表型。结果：第8天脾脏的淋巴细胞表型变化较为明显，耐T细胞的构成比增加(P=0．001)，CD4^ ，CD4^ 比值明显增多(P=0．007)。外周血淋巴细胞表型在第14天变化明显，与对照组有极显著差异，CD4^ ，CD3^ ，CD3^ T细胞构成比和T/B比值显著降低(P=0．005，0．000，0．006和0．00l，)，同时CD45R/B220 细胞(B细胞)构成比显著增加(P=0．000)。结论：肌肉途径免疫灭活SARS病毒早期即可诱导机体系统免疫细胞表型的变化，推测早期可以诱导体液免疫应答。     

治疗用马抗SARS-CoV免疫球蛋白体外抗SARS-CoV的研究

目的　研究 3个批号的治疗用马抗SARS CoV免疫球蛋白在体外对SARS CoV的抑制作用。方法　确定SARS CoVBJ 0 1株毒力后 ,采用MTT法确定药物对Vero E6细胞的毒性。将一定量的SARS CoVBJ 0 1株病毒液加入培养好的Vero E6细胞中 ,置 37℃ ,5 %CO2 孵箱中培养不同时间后加入以最大无毒浓度开始的不同浓度的药物继续培养 ,采用MTT法检测药物对病毒的抑制作用。结果　 3个批号的治疗用马抗SARS CoV免疫球蛋白不同时间点的治疗指数 (TI) :2h组 >6h组 >1 2h组 >2 4h组 ;2 0 0 30 7批 >2 0 0 30 6批 >2 0 0 30 8批。结论　治疗用马抗SARS CoV免疫球蛋白在体外均有抗SARS CoV作用 ,其中 2 0 0 30 7批的抗病毒效果最好 ,为其用于SARS治疗提供了实验依据。     

乳酸气溶胶对空气消毒效果的实验观察

在实验室气雾罐中进行了４０％乳酸溶液对空气中细菌杀灭效果的观察。当喷药４６０ｍｇ／ｍ３，于温度２０℃、相对湿度９０％下作用２６分钟，可杀灭金黄色葡萄球菌９９．９９％；作用８分钟可杀灭大肠杆菌达１００％。消毒时，最适相对湿度为６０％。     

中和性马抗体对SARS-CoV感染的防治作用

目的探讨马抗SARSCoV中和性抗体是否对SARSCoV感染有防治作用。方法用SARSCoV(BJ01株)免疫马匹,从免疫马血清中制备IgGs及其F(ab’)2片段。通过细胞病变法(CPE)、MTT法和空斑形成实验(PFU)等方法,在体外培养的VeroE6细胞中检测F(ab’)2片段对SARSCoV感染的预防性和治疗性作用。再在Balb/c小鼠体内模型中,用CPE法和定量RTPCR方法检测该抗体的保护性效应。结果CPE、MTT和PFU三种方法证实来自三匹马的血清F(ab’)2的中和滴度均达到1∶1600以上。体内实验证实,50μg的F(ab’)2片段可以完全中和1×104TCID50SARSCoV。结论马抗SARSCoV抗体在体内外均能有效地中和SARSCoV和预防其感染宿主细胞,为马抗体将来在大的灵长类动物或人体内进行实验提供实验依据。