多药耐药真核表达载体的构建及其生物学特性

目的 构建携带多药耐药相关蛋白（MRP）全长基因的真核表达载体，并研究其在人肝癌细胞株HepG2中的表达特性。方法 双酶切克隆质粒pGEM-mrp1，获得含mrp1全长的cDNA片段，再将此片段定向克隆到哺乳动物真核表达载体pCI-neo的多克隆位点，经脂质体法转染HepG2细胞，G418筛选获得稳定表达的转基因细胞系HepG2／mrp1。RT—PCR检测HepG2／mrp1细胞mrp1 mRNA表达，流式细胞仪检测HepG2／mrp1细胞MRP的含量。结果 本实验所构建的携带mrp1全长基因的表达载体pCI-mrp1能在HepG2细胞中表达，形成稳定的多药耐药细胞系HepG2／mrp1，其多药耐药性、MRP含量及mrp1mRNA表达均较未转染该载体的HepG2细胞显著增加。结论 将携带全长人多药耐药相关蛋白基因mrp1的载体导人人肝癌细胞株能够建立高效、稳定的多药耐药细胞株，为进一步研究多药耐药的机理及逆转多药耐药提供理想的细胞模型。     

肝移植术后完全停用免疫抑制剂三例儿童临床特点分析

目的 探讨肝移植术后完全停用免疫抑制剂儿童的临床特征,寻找可能与术后免疫耐受形成有关的因素.方法 回顾性分析我院2008年7月至2009年6月间完成的儿童肝移植中完全停用免疫抑制剂的3例患儿资料,包括:移植年龄、原发疾病、供肝来源、术后免疫抑制剂、随访检查结果等.结果 3例完全停药儿童的原发病均为胆道闭锁,平均移植年龄7个月17 d,均为母体活体供肝肝移植,肝移植术后免疫抑制剂方案均为强的松龙+环孢素A,服药至少2年以上,完全停药1年以上.结论 移植年龄＜1岁、原发病为胆道闭锁、母体供肝、服药2年以上、服用环孢素A是这些完全停药儿童的共同特征.     

携反义mrp和mdr1双耐药基因的重组腺相关病毒载体的构建与鉴定

目的构建携带反义多药耐药相关蛋白基因(m rp)和反义多药耐药基因(m dr1)双耐药基因的重组腺相关病毒载体,以用于逆转肝细胞癌(HCC)多药耐药(M DR)的研究。方法将m rp基因cDNA 5′端500 bp的基因片段与m dr1基因cDNA 5′端600 bp的基因片段,用基因片段重叠法连接成为新的基因片段(m rp m dr1),并反向克隆到重组腺相关病毒载体系统(AAV H e lper-F ree System)表达质粒pAAV-IRES-hrGFP的多克隆位点,构建出重组表达质粒pAAV-IRES-hrGFP-(m rp m dr1)AS;再将pAAV-IRES-hrGFP-(m rp m dr1)AS与AAV H e lper-F ree System中的控制质粒pAAV-RC和辅助质粒pH e lper用脂质体转染法共转染293细胞,生成新型重组腺相关病毒载体rAAV 2-(m rp m dr1)AS。结果成功构建并包装出新型重组腺相关病毒载体rAAV 2-(m rp m dr1)AS,病毒滴度达2.5×108efu/m l。结论构建的rAAV 2-(m rp m dr1)AS可望能将反义m rp和m dr1基因片段导入HCC耐药细胞株。     

活体肝移植治疗胆道闭锁:22例单中心诊治经验

目的 总结活体肝移植治疗儿童终末期肝病胆道闭锁(BA)的外科治疗经验.方法 2006年6月至2009年7月,共完成亲属活体部分肝移植治疗胆道闭锁22例.术后平均随访18.5(1至36个月)个月,回顾总结肝移植患儿临床病理资料.结果 22例胆道闭锁患儿中已行Kasai手术9例,20例低于1岁,21例低于10kg.其手术平均时间、平均出血均无差别.供肝受体质量(GR/WR)比3.5(2.1～5.7)%.有27例次术后并发症,包括3例术后出血再手术止血,1例门静脉并发症,肝静脉并发症1例,3例肝动脉并发症,胆道并发症1例.有3例围手术死亡,1例再次移植,急性排斥5例(22.7%).6个月、1年和3年受体生存率分别为86.4%、82.2%和82.2%.结论 受体体重,移植物受体质量比,是否行Kasai手术对肝移植手术效果无影响;适当的供肝质量,细致的手术技巧可增加手术成功率.     

儿童亲属活体供肝移植中供肝动脉壁内出血二例报告

我院白2006年8月至2009年6月共施行儿童亲属活体供肝移植30例,其中2例供肝出现肝叶动脉主干血管壁内出血,1例移植后因动脉栓塞死亡.虽然供肝动脉壁内出血发生率并不高,但发生后如果处理不当,后果十分严重,应引起高度重视.     

亲属活体单段供肝移植治疗极低体重婴儿胆道闭锁一例

目的 总结亲属活体单段供肝移植治疗极低体重婴儿胆道闭锁的临床经验.方法 受者为出生仅145 d的男婴,身高66 crn,体量3.08 kg,被确诊为胆道闭锁伴肝硬化.供者为患儿母亲,年龄36岁,身高145 cm,体重47 kg.采用改良背驮式原位肝移植术,切取供者Ⅱ段肝组织作为供肝,移植肝体积与受者标准肝体积比值为92.5%,GRWR为5.19%,供肝动脉与受者肝右动脉用供者左侧股外侧浅隐静脉搭桥行端端吻合,受者三支肝静脉经整合后与供肝静脉行端端吻合,供肝胆管与受者空肠行Roux-en-Y吻合.术后监测供、受者生命体征、肝肾功能及出血和凝血状况等,常规抗感染治疗.受者术后采用环孢素A、吗替麦考酚酯及甲泼尼龙的方案预防排斥反应.结果 供肝切取手术历时370 min,术中供者出血150 ml均回输,切取供肝重量为160 g.肝移植手术历时451min,术中受者失血230 ml,输注全血200 ml和红细胞悬液50 m1,无肝期时间为71 min,供肝冷缺血时间为132 min.供者恢复顺利,术后8 d拆线出院.受者术后5 d肝功能基本恢复正常,术后7 d各项化验指标均正常.但术后7和15 d时,受者分别发生肠道吻合口漏各1次,经修补后痊愈.受者于术后35 d出院,出院时体重增加0.3 kg,各方面与同龄婴儿相当.结论 亲属活体单段供肝移植是治疗极低体重患儿终未期肝病的一种可供选择的治疗方法,经充分的术前评估、精细的手术操作及良好的围手术期管理后,手术能取得良好效果.     

儿童胰腺肿瘤的临床诊治分析

目的探讨儿童胰腺肿瘤的诊断及治疗策略。方法回顾性分析2015年3月至2020年9月重庆医科大学附属儿童医院收治的18例胰腺肿瘤患儿的临床资料, 其中男性8例, 女性10例, 年龄3个月～14岁11个月, 中位年龄8岁2个月。收集患儿的年龄、性别、病理资料、手术方式、化疗情况、肿瘤位置、治疗结局等临床资料。以门诊复查及电话回访的方式随访。结果所有患儿均行腹部超声、增强CT和/或MR检查, 均发现胰腺囊实性或实性病变, 均在气管插管全麻下行开腹手术治疗, 均顺利完成手术。18例患儿中, 胰腺实性假乳头状瘤11例, 胰母细胞瘤(PBL)7例。肿瘤位于胰头部13例(行Whipple术3例, 行保留十二肠胰头切除术1例, 行胰腺肿瘤切除术9例);肿瘤位于胰体尾部5例(行保留脾脏的胰体尾部切除术3例, 行胰腺肿瘤切除术2例)。3例患儿由于肿瘤巨大(其中1例伴有双肺、左锁骨上窝淋巴结、腹膜后淋巴结转移), 取活检证实为PBL后, 予以新辅助化疗后手术完整切除肿瘤, 3例患儿术后病理显示均为PBL, 按要求予以系统化疗。术后发生胰瘘1例, 乳糜瘘1例, 均通过保守治疗顺利出院。术后随访2～7年, 均无...     

突变Myc基因骨髓特异性转基因小鼠肿瘤模型的建立及鉴定

目的 研究通过外源Myc基因转染造血细胞,实现骨髓特异性转基因并形成淋巴瘤的潜能.方法 造血细胞转染野生型与突变型Myc基因.移植入经~(60)Coγ射线照射的C57BL/6小鼠,观察小鼠形成肿瘤时间以及小鼠自然死亡时间,免疫组织化学染色法检测肿瘤类型;流式细胞术检测外源Myc基因在小鼠骨髓MNC中的表达;骨髓造血细胞、肝、脾、肿瘤组织行Myc免疫印迹法检测Myc在体内的表达情况.结果 Mye基因转基因后形成B细胞淋巴瘤,流式细胞术检测发现外源Myc基因可在造血细胞表达,突变型Myc基因阳性率高于野生型Myc基因,Myc基因转染骨髓造血细胞后,骨髓、肿瘤组织有较高表达,肝、肾组织则无表达.结论 外源Myc基因特异转染造血细胞可形成组织特异性转基因;突变型Myc基冈致瘤性高于野生型Myc基因.     

亲属活体供肝移植治疗儿童终末期肝病六例

目的 探讨亲属活体供肝移植(LDLT)治疗儿童终末期肝病的效果,并总结治疗经验.方法 2005年9月至2007年1月对6例终末期肝病患儿进行了LDLT.6例患者中,原发病为肝内外胆管弥漫性囊性扩张症Ⅳ型伴肝硬化1例、肝豆状核变性2例、门静脉海绵样变性3例;供者为患儿的母亲3例、父亲2例及舅父1例,分别切取供者的右半肝1例和左半肝5例作为供肝;在切除受者全部病肝和保留下腔静脉后,对受者施行部分供肝的原位肝移植.术后依据供、受者的临床表现、血液学指标和影像学检查,对活体供肝移植的治疗效果进行评价.结果 术后对供、受者随访了6～21个月.6例供者均健康存活,未发生并发症.6例受者中,1例于术后第4天死于门静脉血栓形成,1例于术后5个月时死于肝内静脉血栓形成,其余4例均长期健康存活.结论 亲属活体供肝移植是治疗儿童终末期肝病的有效方法.术前进行仔细的供、受者选择和完善的影像学检查,术中应用精确的手术技术,术后给予严格的管理是儿童LDLT成功的关键.