穿孔素mRNA表达与大鼠肝移植急性排斥反应的关系

目的 探讨大鼠肝脏移植术后外周血和胆汁中穿孔素mRNA表达水平与急性排斥反应的关系,寻求一种早期诊断急性排斥反应的非侵袭性方法.方法 建立大鼠原位肝移植模型及胆道引流模型,实验分为4组: 空白对照组(n=20),行单纯胆汁引流;同基因移植组(n=30);异基因移植+环孢素A(CsA)组(n=30);异基因移植组(n=30),术后未行免疫抑制剂治疗.应用RT-PCR方法分别检测各组术后第1、3、5、7和10天外周血和胆汁中穿孔素mRNA的表达水平,同时行肝脏病理组织学观察.结果 空白对照组、同基因移植组外周血中无穿孔素mRNA表达;异基因移植组外周血中穿孔素mRNA 在术后第3天开始表达,而后逐渐升高,术后第5天明显增高,术后第7～10天维持在较高水平.而异基因移植+CsA组外周血中穿孔素mRNA的表达持续呈低水平,各时间点表达与异基因移植组比较差异有统计学意义(P＜0.05).外周血穿孔素mRNA表达水平与Banff组织学诊断分级变化规律一致.各组胆汁中穿孔素mRNA表达均为阴性.结论 检测外周血中穿孔素mRNA表达可作为监测急性排斥反应较敏感的无创性方法.     

脑胶质瘤中hMLH1、hMSH2基因启动子区的甲基化状态研究

目的 检测脑胶质瘤中hMLH1、hMSH2基因启动子区的甲基化状态,探讨其在肿瘤发生中的作用.方法 采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)方法,检测51例脑胶质瘤标本及人脑胶质瘤U251细胞株的hMLH1、hMSH2基因启动子C_PG岛甲基化状态.结果 在7例正常脑组织中,用MSP法检测的hMLH1、hMSH2基因启动子区均未发现甲基化,51例脑胶质瘤组织中,hMLH1、hMSH2甲基化率分别为13.7%(7/51)、35.3%(18/51),且为甲基化和非甲基化共存,人脑胶质瘤U251细胞中未发生hMLH1启动子甲基化,而发生了hMSI-12启动子甲基化,hMLH1、hMSH2基因启动子区甲基化与性别、年龄、病理类型无明显相关.但hMLH1在低级别(Ⅰ～Ⅱ级)患者标本中甲基化率为0.0%(0/25),高级别(Ⅲ～Ⅳ级)患者标本中甲基化率为26.9%(7/26),差异有统计学意义(χ~2=5.69,P<0.05).结论 hMLH1、hMSH2基因启动子区甲基化状态与性别、年龄、病理类型无明显相关.hMSH2基因启动子区的CpG岛在脑胶质瘤中有中等频率的甲基化,是脑胶质瘤发生过程中的早期事件,可能与脑胶质瘤的发生相关;脑胶质瘤中hMLH1基因启动子区甲基化率较低,但hMLH1启动子区甲基化状态与病理分级有关;人脑胶质瘤U251细胞株中hMSH2基因启动子C_PG岛高甲基化.     

一氧化氮对急性胆道感染大鼠肾功能影响作用研究

目的　探讨一氧化氮（nitric oxide,NO）对实验性急性胆道感染大鼠肾功能的影响作用。方法　Wistar大鼠35只,随机分为急性胆道感染组（AC组）、急性胆道感染加左旋精氨酸组（L组）、左旋硝基精氨酸甲基酯组（N组）、单纯胆道梗阻对照组（O组）和假手术组（SO组）5组,分别测定血浆NO、BUN、Cr值和肾组织一氧化氮合成酶（NOS）活性,并行肝、肾组织病理变化观察。结果　L组NO、NOS高于其余各组（P＜0.05）,BUN、Cr低于AC组和N组（P＜0.05）,而与O组比较差异无显著性意义（P＞0.05）,肾组织病理变化较AC组轻;N组NO、NOS低于其余各组,而BUN、Cr则高于其余各组（P＜0.05）。结论　NO对急性胆道感染72小时大鼠的肾功能有保护作用,其作用机理可能与其舒张肾血管,增加血液灌流量等作用有关。     

术中胆道镜应用的体会

随着新的诊断技术的问世,胆道疾病的影像诊断技术有了很大的进步,而术中胆道镜的应用能在术中对胆管疾病的诊断及制定手术方案起重要作用。我院自１９８５年至１９９８年８月,对９２例胆系疾患所致梗阻性黄疸患者在术中应用胆道镜检查,现将体会报告如下。临床资料一、...     

2009年北京大学第三医院血管内插管相关性感染的病原学分析

目的 了解2009年北京大学第三医院血管内插管相关性感染的特征.方法 回顾性分析血管内插管相关性感染的临床特征和微生物学特征.结果 共送检各类插管219个.通过插管培养法确定29例定植、7例置入点感染、6例插管相关性血流感染(CRBSI),但无阳性报警时间差方式确诊的CRBSI.ICU的CRBSI的发生率为(0.99～3.03)/千插管日.定植菌株中,革兰阳性球菌为51.72%,非发酵菌为20.69%,肠杆菌为13.79%,假丝酵母菌为10.34%.1例CRBSI由肠膜明串珠菌导致.细菌类分离株多为耐药菌株.成人患者77%以上超过60岁,多有长期慢性基础性疾病.而9例新生儿患者全部是早产儿,其中7例为极低出生体质量儿.结论 北京大学第三医院2009年有一定数量的插管相关性感染发生,需要进一步加强插管相关工作.     

“通督解郁”针刺在CUMS抑郁模型大鼠前额叶皮质BDNF/TrkB/CREB通路的作用效应

目的:探究K252a的作用下,“通督解郁”针刺在慢性温和不可预知应激(CUMS)模型大鼠前额叶皮质BDNF/TrkB/CREB通路的作用机理。方法:64只SPF级SD大鼠随机分为空白组、模型组、氟西汀组、针刺组、模型+DMSO组、模型+K252a组、氟西汀+K252a组和针刺+K252a组,每组8只。造模在CUMS结合孤养法外,针刺组、针刺+K252a组和氟西汀组、氟西汀+K252a组在造模前30 min分别施行手针百会、神庭,电针内关、太冲治疗(频率2 Hz,连续波,电流1 mA,留针30 min)和灌胃治疗;模型+DMSO组和模型+K252a组、氟西汀+K252a组及针刺+K252a组分别在造模前1 h侧脑室注射DMSO溶液和K252a,共21 d。行为学采用体质量、糖水偏好实验以及强迫游泳实验进行评价;免疫组化检测大鼠前额叶组织BDNF、TrkB和CREB阳性细胞平均光密度值IOD;Western blot及PCR法检测大鼠前额叶皮质中相关蛋白及mRNA表达。统计学分析采用LSD检验和非参数检验。结果:与空白组比较,模型组大鼠的体质量差、糖水偏好指数SPI和BDNF、TrkB、CREB的阳性细胞IOD、蛋白及mRNA表达均明显下调,差异具有统计学意义(P<0.01),强迫游泳的不动时间IT明显上调,差异具有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,针刺组、氟西汀组大鼠的体质量差、SPI和BDNF、TrkB、CREB的阳性细胞IOD、蛋白及mRNA表达均明显上调,差异具有统计学意义(P<0.01),IT下调,差异具有统计学意义(P<0.01),模型+K252a组大鼠的体质量差、SPI和BDNF、TrkB、CREB的阳性细胞IOD、蛋白及mRNA表达减少,差异具有统计学意义(P<0.05),IT增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。与针刺组比较,针刺+K252a组大鼠的体质量差、SPI和BDNF、TrkB、CREB的阳性细胞IOD、蛋白及mRNA表达均减少,差异具有统计学意义(P<0.05),IT增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:“通督解郁”针刺对CUMS模型大鼠的抑郁行为有明显改善作用,其机制可能上调了前额叶皮质上的BDNF/TrkB/CREB通路,从而起到治疗抑郁症的作用。     

尾加压素Ⅱ在高糖诱导心肌细胞氧化应激、内质网应激中的作用及机制研究

目的:研究高糖刺激对心肌细胞中尾加压素Ⅱ及其受体表达的影响,并观察高糖刺激下尾加压素Ⅱ对心肌细胞氧化应激/内质网应激通路及其相关信号通路的影响.方法:本实验将原代培养的Wistar大鼠乳鼠心肌细胞培养36 h后,随机分为低糖组(5 mmol/L葡萄糖)、高糖组(25 mmol/L葡萄糖)、高渗组(5 mmol/L葡萄糖...     

血清NT-proBNP和CRP水平对AMI后左室重构的预测价值

目的通过观察急性心肌梗死(AM I)患者在发病第3天血清N末端B型钠尿肽前体(NT-proBNP)和C反应蛋白(CRP)的水平与AM I后3个月的左室舒张末期容积增加率之间的关系,寻找可用于预测AM I晚期左室重构的较理想指标。方法选择106例前壁、前间壁及前侧壁AM I患者,分别在发病第3天和3个月做超声心动图测定左室舒张末期容积的变化,将患者分为左室重构(LV remodeling,LVR)组及非左室重构组;采用电化学免疫发光法和免疫比浊法检测血清NT-proBNP和CRP水平。结果AM I后3个月左室舒张末期容积较基础值增加率与NT-proBNP水平的相关系数为0.706,P<0.001;与CRP的相关系数为0.596,P<0.05。血清NT-proBNP、CRP的ROC曲线下面积分别为0.892和0.825,二者曲线下面积无统计学差异。结论AM I患者血清NT-proBNP、CRP水平是预测晚期LVR的理想指标;AM I患者发病第3天的血清NT-proBNP水平与3个月时LVR呈正相关;血清NT-proBNP水平预测晚期LVR优于血清CRP水平。     

绿色荧光蛋白标记的人脂联素真核表达载体的构建

目的：构建绿色荧光蛋白（GFP）标记的人脂联素（Adiponectin）真核表达质粒。方法：用本实验室已构建好的人脂联素克隆载体pMD18—T／Adiponeetin为模板，结合已设计好的特异性引物。采用PCR方法克隆出Adiponectin目的片段，将该目的片段再连至真核表达载体pcDNA3．1／CT—GFP—TOPO上，转化入TOP10感受态细胞中，通过筛选得到融合有绿色荧光蛋白的重组质粒pcDNA3．1／CT—GFP—TOPO—Adiponectin。结果：PCR获得长度为736bp的目的片段，经pcDNA3．1／CT—GFP-TOPO真核表达载体连接、筛选及序列分析后，证实所插入的目的片段与genebank检索的人脂联素cDNA序列（Accession NM-004797）100％配。结论：绿色荧光蛋白标记的人脂联素真核表达载体构建成功。     

重组人白细胞介素15工程菌高密度发酵条件探讨

目的研究表达重组人白细胞介素15(rhIL-15)工程菌高密度发酵的条件。方法采用发酵罐发酵,对影响工程菌生长和目的蛋白质表达的因素进行优化。结果以甘油为碳源可明显抑制有害物质乙酸的积累,提高工程菌的表达量和收获率。高密度发酵明显提高了目的蛋白质的表达量和工程菌的产量。结论该发酵工艺大大提高了rhIL-15工程菌的产量和表达水平,为rhIL-15的规模化生产打下了基础。