多重聚合酶链反应检测超广谱β内酰胺酶方法的研究

目的 建立超广谱β内酰胺酶(ESBLs)多重聚合酶链反应(multiplex PCR)的检测方法并对其进行应用评价。方法 通过排序比较选择TEM、SHV和CTX—M型基因编码区保守序列设计型特异性通用引物，建立多重PCR体系，对产ESBLs标准株及54个疑产ESBLs临床分离株进行ESBLs的检测，并通过PCR产物克隆测序及美国临床实验室标准化委员会表型确认试验的平行检测，对该法进行应用评价。结果 多重PCR法对纸片法阳性株及阴性株ESBLs检出率分别为94．3％(33／35)和26．3％(5／19)；测序结果证实了该法的特异性，且敏感性较高。84．2％(32／38)ESBLs基因型为CTX—M型，15．8％(6／38)为SHV型。结论 该法的建立为临床检测ESBLs及其分子流行病学研究提供了一种特异和敏感的工具。     

CTX-M-14型超广谱β-内酰胺酶基因的定点突变研究

目的 研究产CTX-M-14型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)功能性基因片段的结构特征。方法 质粒电转移及质粒谱分析以定位CTX-M-14型基因；耐药质粒酶切基因文库(鸟枪法)技术及其计算机辅助在线分析以了解此酶功能性基因片段的分子结构特征；对。Ash-104→Glu、Gly-232→Ala、Set-237→Ala和Asp-240→Glu进行定点突变研究。结果 CTX-M-14基因定位在85kb可转移多重耐药的质粒上；采用鸟枪法克隆到1．8kb、2．4kb、3．1kb产CTX-M-14的功能性基因片段，序列分析显示其定位在耐药质粒上转座子基因结构中；Asn-104→Glu突变可显著降低CTX-M-14型ESBLs对头孢噻肟的水解能力。结论 CTX-M-14基因定位在耐药质粒上转座子基因结构中；Asn-104可能是CTX-M型ESBLs重要的活性位点。     

头孢硫脒体外抗菌活性测定

我们测定了头孢硫脒(仙力素)的体外抗菌活性,并与头孢唑林、头孢呋辛钠、头孢他啶体外抗菌活性进行了对比.结果表明,头孢硫脒对肺炎球菌、化脓性链球菌、MSSA、MSSE和卡他莫拉菌有较强的抗菌活性,优于头孢唑林、头孢呋辛钠和头孢他啶,对流感嗜血杆菌的抗菌作用,与头孢呋辛钠,头孢他啶体外抗菌活性相近,优于头孢唑林.头孢硫脒对肠球菌的体外抗菌活性稍差于万古霉素.头孢硫脒对MRS、MRSE亦有一定的抗菌活性,但明显高于万古霉素对MRSA和MRSE的MIC90值.体外杀菌活性测定结果表明头孢硫脒对检测的细菌的MBC值只高于MIC值1到2个浓度,提示头孢硫脒有较好的杀菌活性.     

先力腾治疗下呼吸道细菌感染的临床评价

目的：评价先力腾治疗呼吸道细菌感染的临床疗效和安全性。方法：３５例呼吸道感染病人采用先力腾治疗，ｐｏ４００ｍｇ／次，ｑｄ，疗程７￣１０ｄ。结果：治疗总有效率为８５．７％，细菌清除率为９０．０％，无明显不良反应发生。此外还将分离的３０朱细菌行药敏试验，结果先为腾敏感率为８６．７％，对大多数Ｇ＾－杆菌和部分Ｇ＾＋球菌敏感，较头孢呋辛和头孢克罗敏感。结论：先力腾为治疗呼吸道感染的有效和安全的口服抗生素。     

内毒素和肿瘤坏死因子α对大肠杆菌和白色念珠菌混合感染的影响

目的　探讨内毒素和肿瘤坏死因子α(TNFα)对大肠杆菌和白色念珠菌混合感染小鼠病情的影响。方法　建立小鼠大肠杆菌、白色念珠菌单独及混合感染模型 ,对比多粘菌素B拮抗内毒素活性 ,观察各组小鼠病死率 ,血浆内毒素水平 ,以逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)技术检测各组小鼠肺组织中TNFα水平。结果　大肠杆菌和白色念珠菌混合感染小鼠病死率明显高于各自单独感染组 ,大肠杆菌和白色念珠菌混合感染 2 4h后血浆内毒素水平明显高于大肠杆菌单独感染 ,大肠杆菌和白色念珠菌混合感染 7、10h后肺组织中TNFαmRNA水平明显高于各自单独感染。结论　内毒素和TNFα可导致大肠杆菌和白色念珠菌混合感染小鼠病情加重 ,增加其病死率     

老年人下呼吸道感染的常见病原菌及耐药性分析

①目的探讨老年患下呼吸道感染的常见病原菌及其对抗菌药物耐药性的影响。②方法回顾性分析2000～2003年痰培养细菌的耐药性资料。③结果老年患下呼吸道感染的致病菌以革兰阴性杆菌为主，占68．4％；其次为革兰阳性球菌和真菌，分别占22．4％和92％。铜绿假单胞菌成为老年患下呼吸道感染的首要致病菌，亚胺培南、头孢吡肟、阿米卡星、头孢哌酮-舒巴坦及哌拉西林对其敏感性较高。革兰阳性球菌耐药率较高，对头孢唑啉、红霉素、苯唑西林耐药率分别达63．6％～77.8％、72.7％-88.9％和72.7％～88．9％，但均对万古霉素敏感。④结论革兰阴性杆菌为老年患下呼吸道感染的主要病原菌，其中铜绿假单胞菌感染率最高，但革兰阳性球菌及真菌的感染也不容忽视。     

rhG—CSF和氟康唑联合应用对粒细胞减少小鼠念珠菌肺感染…

为了研究人类重组粒细胞集落刺激因子对中性粒细胞减少小鼠白色念珠菌肺感染的预防和治疗作用，腹腔注射五湖环磷酰胺的小鼠被分成４组；１．对照组，气管同注射白色念珠菌；２感染前皮下注射ｒｈＧ－ＣＳＦ；３；感染后１２ｈ腹腔注射氟诏唑；４ｒｈＧ－ＣＳＦ和氟康唑联合应用。     

大肠埃希菌和白念珠菌混合感染小鼠中性粒细胞和巨噬细胞功能的研究

目的 :研究大肠埃希菌和白念珠菌混合感染小鼠中性粒细胞和巨噬细胞的功能。方法 :建立大肠埃希菌和白念珠菌单独及混合感染小鼠模型 ,以多粘菌素B拮抗内毒素活性 ,分离各组小鼠中性粒细胞和巨噬细胞 ,检测中性粒细胞黏附功能、吞噬功能和巨噬细胞杀菌功能 ,用酶联免疫吸附试验 (ELISA)检测巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子α(TNFα)水平。结果 :大肠埃希菌和白念珠菌混合感染组小鼠中性粒细胞黏附率较各自单独感染组明显升高 (P <0 .0 5 ) ,而吞噬率较各自单独感染组明显降低 (P <0 .0 5 ) ,大肠埃希菌和白念珠菌混合感染组小鼠巨噬细胞杀菌率较各自单独感染组明显降低 (P <0 .0 5 ) ,分泌TNFα水平较各自单独感染组明显升高 (P <0 .0 5 )。结论 :大肠埃希菌和白念珠菌混合感染小鼠中性粒细胞和巨噬细胞清除细菌能力低下 ,巨噬细胞分泌过量TNFα可削弱机体抵抗力。     

支气管肺癌仿真内镜与纤维支气管镜检查的对比研究

目的 对比研究仿真支气管镜(Virtual endoscopy，VE)检查与纤维支气管镜(Fiberoptic Bronchoscopy，FOB)检查在肺癌诊断中的价值。方法 分别从发现管腔内肿瘤生长的阳性率、发现管腔狭窄的阳性率、发现隆突变形和增宽的阳性率及检查到狭窄远端支气管的阳性率四个方面比较两种检查方法。结果 两种检查方法在发现隆突增宽变形方面完全一致；在发现支气管腔狭窄方面，VE和FOB检查无明显差别；在发现支气管腔内肿瘤生长方面，FOB优于VE；在检查肿瘤狭窄处远端支气管方面，VE优于FOB。结论 VE和FOB各有优缺点，VE能在一定程度上代替FOB，用于肺癌的诊断。     

琼氏不动杆菌对碳青霉烯类抗生素耐药分子机制研究

目的研究琼氏不动杆菌对亚胺培南耐药的分子机制。方法对耐亚胺培南琼氏不动杆菌临床分离株ZN3858．采用琼脂对倍稀释法进行药敏试验，协同抑制试验，质粒接合试验。Southern blot等电聚焦电泳。PCR扩增OXA、IMP、VIM型碳青霉烯酶基因及整合子编码序列及其分子克隆和测序。采用十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)方法研究其外膜蛋白表达情况，阐述其对碳青霉烯类分子耐药机制。结果受试琼氏不动杆菌具有多重耐药性；耐药基因分子克隆、测序并结合等电聚焦分析证实均产OXA-23型碳青霉烯酶。质粒接合试验、Southern blot显示其编码基因定位在染色体上；与敏感株相比，该菌22、35、47kDa外膜蛋白表达不同程度降低。飞行时间质谱显示：它们与一些耐药相关的外膜蛋白有一定的相似性。结论表达OXA-23型碳青霉烯酶伴外膜蛋白下调是琼氏不动杆菌对碳青霉烯类抗生素耐药重要分子机制。