肺炎链球菌不同菌株自溶酶基因的克隆、序列分析及重组表达

目的克隆肺炎链球菌自溶酶(LytA)的基因序列，并进行重组表达。方法分别提取不同临床分离株的基因组DNA，根据已知肺炎链球菌野生R6株LytA基因序列设计引物，进行PCR扩增，将获得的目的基因片段克隆人原核表达质粒，然后测序；利用生物信息学方法，对不同临床分离株LytA基因序列进行比较分析，同时进行LytA基因的重组表达。结果从不同临床分离株的基因组中均扩增出完整的LytA基因片段，成功构建了重组质粒pGEX-4T-1-LytA。比较不同临床分离株LytA基因的DNA序列及推测的氨基酸序列，发现各株LytA基因序列及氨基酸序列间存在差异。通过异丙基巯基半乳糖(IPTG)诱导，LytA基因在大肠埃希菌JM109中得到高效表达，十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果显示pGEX-4T-1-LytA融合蛋白相对分子质量约62000，与理论预测一致。结论序列分析发现各分离株的LytA基因序列及氨基酸序列间存在差异，但同源性极高，推测LytA基因序列保守，可用于疫苗研发。     

巢式多聚酶链反应检测肺炎支原体

巢式多聚酶链反应检测肺炎支原体①郭纪全②唐英春张天托张扣兴（中山医科大学附属第三医院内科；广州，５１０６３０）主题词聚合酶链反应；肺炎支原体／分析中图号Ｒ３７５；Ｑ５２３肺炎支原体（ＭＰ）感染的病原学诊断过去主要依靠培养法，血清学试验或基因探针等方法...     

应用嵌套式PCR法检测结核杆菌DNA

应用嵌套式聚合酶链反应（ｎｅｓｔｅｄＰＣＲ）法检测结核菌ＤＮＡ，所用内、外两对寡核苷酸引物衍生于３７．７ｕ（３８ｋＤａ）蛋白抗原ｂ的编码（Ｐａｂ）ＤＮＡ序列。对６种抗酸分枝杆菌和１０种非分枝杆菌ＤＮＡ进行扩增，经琼脂糖凝胶电泳和溴化乙锭染色证实，只有人型结核杆菌、牛型结核杆菌和卡介苗（ＢＣＧ）出现３２２ｂｐ特异扩增带，而其他菌种未见此种扩增。第１步和第２步ＰＣＲ分别检测到的最低限量为１０ｐｇ和１０ｆｇ的靶ＤＮＡ。采用此法检测７２份临床标本，结果显示：该技术具有特异性强、敏感性高、快速简便的优点，尤适用于肺内外结核的早期诊断。     

Study on the Genotype of Extended-spectrum Beta-lactamases Mediated by Plasmid in Southern China

Alongwiththewidespreaduseoftheextended spectrum beta lactamase(ESBL)antibioticswithinlast20years, theemergenceofESBLs producingstrainsamongmembers ofthefamilyEnterobacteriaceaehasbecomeaworldwide problem.TheESBLsdescribedtodatebelongtotheBush group2orAmbl…     

应用CD4+Vα9-J27/Vβ29-D1-J2四聚体检测结核分枝杆菌感染的初步研究

目的 初步探讨CD4+ Vα9-J27/Vβ29-D1-J2 TCR四聚体对结核分枝杆菌感染检测的特异性.方法 应用果蝇S2恒定细胞株表达、纯化获得生物素化TCR复合物单体制备四聚体.流式检测PE-四聚体与细胞株膜结核抗原肽/HLA-DR复合物以及肺结核患者外周血的单核细胞的结合百分率,并设立病例对照组.激光共聚焦倒置显微镜观察肺结核病理组织及对照组织中四聚体与结核抗原双染阳性的细胞及四聚体与CD14双染阳性细胞.结果 四聚体对表达C14/HLA-DRB1 *1504的细胞株结合能力最强.四聚体与结核患者外周血单核细胞结合率显著高于各对照组.结核组织标本可观察到四聚体与CD14双染阳性及四聚体与结核抗原双染阳性的细胞;而对照组织均为阴性.结论 CD4+ TCR四聚体对结核检测有一定的特异性,为TCR四聚体应用于结核的诊断和免疫机制研究提供了一定的实验资料.     

21世纪治疗肺部感染性疾病面临的挑战

１引言 呼吸系统疾病是危害人类健康的主要疾病之一,愿望２１世纪。吸吸系统疾病仍将在各种死亡病因中位居前列。临床医学男２１世纪治疗呼吸系统疾病所面临的挑战主要来自以下四穴疾病：①肺部感染性疾病;②慢性阴塞性肺部疾病和支气管哮喘;③肺部种瘤性疾病;④间质性肺部疾病。本文只对２１世纪治疗肺部感染性疾病面临的挑战进行简要阐述。２２１世纪肺部感染性,疾病的治疗面临着病原微生物变迁的挑战 ２０世纪７０年代以来,肺部感染的病原微生物较之以往已经发生了很大的变化,不断有新的病原体被发现。近３０年来,ＷＨＯ宣布发现…     

不同抗生素对革兰阴性杆菌肺炎患者血浆内毒素的影响

对肺炎患者使用不同抗生素后,比较其血浆游离内毒素和临床参数,并结合体外实验和细菌形态学检查探讨其和抗生素作用位点、细菌形态学改变的关系。材料和方法　选择经临床确诊的肺炎患者３３例,男２０例,女１３例,年龄１８～６８岁,痰培养均为革兰阴性杆菌,血培养阴性。３天内未使用过抗菌药物。患者随机分为亚胺培南西司他丁组（每８小时服用０５ｇ）１６例,头孢他啶组（每天２次,每次２ｇ）１７例。两组患者年龄、性别、病情和病程有可比性。抗生素治疗前和治疗后４、８小时取无菌血浆,用偶氮显色法测定其内毒素。同时记录患…     

多发性骨髓瘤误诊为肺癌一例

男性,67岁,教师。因右侧胸痛1年,加重伴气促2ｄ于1999年5月入院。患者于1年前起无明显诱因出现右侧胸部隐痛,为阵发性,咳嗽时胸痛加剧,无放射痛。一直在当地医院按肋间神经痛治疗,无效。疼痛逐渐加剧,并有轻微咳嗽,咳白痰,无咯血及脓臭痰,无发热。2个月前到外院行胸片及ＣＴ检查发现右侧肺部肿块,疑为右侧肺癌,但纤支镜及肺部肿块穿刺活检均未找到癌细胞,未行特殊治疗出院。近2ｄ因胸痛加剧,伴低热,气促,且咳白痰,活动后明显,故来我院。起病后无骨、关节疼痛,近2个月体重下降约5ｋｇ,大小便无异常。既往史无特殊,吸烟40余年,每天20支。查体:…     

N—乙酰半胱氨酸对缓解期肺心病的抗氧化和免疫调节作用

目的：研究Ｎ－乙酰半胱氨酸（ＮＡＣ）对缓解期肺心病的抗氧化和免疫调节作用。方法：３８例肺心病缓解期患者予ＮＡＣ ６００ ｍｇ．ｐｏ,ｑｄ,共６ｍｏ。比较治疗前和治疗后１,３,６ｍｏ血清ＭＤＡ,ＣＤ３,ＣＤ４,ＣＤ８水平,并与健康志愿者（对照组）比较。结果：与对照组比较肺心病缓解期ＭＤＡ明显升高（Ｐ＜０．０５）,而ＣＤ４显著降低（Ｐ＜０．０１）;经ＮＡＣ治疗后ＭＤＡ、ＣＤ４分别于１,３ｍｏ月恢复正常。结论：ＮＡＣ能降低肺心病缓解期患者的过氧化物水平,捉高免疫力,有可能减少急性加重的发生。