Wnt2、Wnt5b和Wnt9a在先天性巨结肠症和肛门直肠畸形中的表达及意义

目的 研究Wnt2、Wnt5b和Wnt9a在先天性巨结肠症(Hirschsprung disease,HD)和肛门直肠畸形中(anorectal malformations,ARMs)的表达情况,以期探讨其在HD和ARMs发生发展中的作用.方法 利用荧光实时定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)和蛋白质印迹(western blot)技术检测HD狭窄肠段和正常肠段肠管组织及ARMs直肠末端(高位、中位和低位组)和死于非胃肠道疾病(正常对照组)患儿各30例中Wnt2、Wnt5b和Wnt9a表达,对其表达进行定位和定量,并比较分析.结果 Wnt2、Wnt5b和Wnt9a在HD狭窄段肠管中mRNA转录水平的表达分别为(10.19±0.27、10.38±0.19和11.43±0.51),均低于正常段肠管的相应表达水平(18.06±1.07、17.98±1.12、19.99±0.76)(P＜0.05);Wnt2、Wnt5b和Wnt9a在ARMs高位组中mRNA转录水平的表达分别为(14.27±0.31、13.69±0.45、13.07±0.67),均低于正常对照组(24.98±2.03、26.43±1.77、28.11±1.44)(P＜0.05),中位组和低位组之间mRNA转录水平比较无统计学意义.western b1ot结果显示,Wnt2、Wnt5b和Wnt9a在HD狭窄段肠管中蛋白表达水平分别为0.19±0.09、0.26±0.07、0.23±0.06,明显低于正常段肠管0.43±0.13、0.57±0.08、0.62±0.06,P＜0.05;Wnt2,Wnt5b和Wnt9a在ARMs高位组中蛋白表达水平分别为0.15±0.11、0.17±0.04、0.13±0.05明显低于正常对照组0.51±0.03、0.63±0.05、0.59±0.05,P＜0.05,而中位组和低位组之间蛋白表达水平无明显差异且与正常对照组比较无统计学意义(P＞0.05).结论 Wnt2、Wnt5b和Wnt9a在HD狭窄段和ARMs的高位组表达水平减低,可能在先天性消化道畸形的肠道发育中具有重要作用.

Abstract：

Objective To investigate the expressions of Wnt2,WntSb and Wnt9a in tissue samples from the patients with Hirschsprung disease (HD) and anorectal malformations (ARMs).Methods Ninety individuals were recruited in this study,including 30 with HD,30 with ARMs,and 30 controls died of non-gastrointestinal diseases.According to the position of malformations,the 30 ARMs patients were subgrouped into high,intermediate and low ARMs groups.The terminal rectum from the ARMs group and the stenotic and normal appearance intestines from HD patients were collected during operation.The expression levels of Wnt2,Wnt5b and Wnt9a were studied using quantitative Real-time PCR (qRT-PCR) and western blotting.Results In the HD patients,the mRNA of Wnt2,Wnt5b and Wnt9a in stenotic intestine were significantly lower than those in the normal intestine ( the relative quantification of mRNA 10.19 ± 0.27,10.38 ± 0.19,11.43 ± 0.51 vs 18.06 ± 1.07,17.98 ± 1.12,19.99 ± 0.76,P＜0.05).In the ARMs patients,the mRNA of Wnt2,Wnt5b and Wnt9a in high ARMs patients were significantly lower than those in control patients (the relative quantification of mRNA 14.27 ± 0.31,13.69 ± 0.45,13.07 ± 0.67 vs 24.98 ± 2.03,26.43 ± 1.77,28.11 ± 1.44,P＜0.05).No significant difference of the mRNA expression was found between the low ARMs patients and intermediate ARMs patients (P＞0.05).The protein expressions of Wnt2,Wnt5b and Wnt9a in these patients changed in the same manners with what were found in the mRNA studies,in which Wnt2,Wnt5b and Wnt9a were decreased in the stenotic intestine of HD patients and high ARMs patients.Conclusions The expression of Wnt2,Wnt5b and Wnt9a changes in the tissue samples from the patients with HD and ARMs,which may play a role in the pathogenesis of congenital malformation of the alimentary tract.     

男性尿道断裂167例治疗分析

男性尿道损伤是泌尿系统常见损伤,多发生于青壮年,因男性尿道球部,膜部较固定,故损伤多发生于球处.而尿道损伤未及时处理或处理不当,可发生尿道狭窄闭锁甚至死亡等并发症.景谷县人民医院外科1985年至2008年间共收治男性尿道断裂167例,现就治疗情况报告如下.     

胆道闭锁15例

目的探讨胆道闭锁(BA)的临床特点、治疗与预后的关系。方法回顾性分析经中国医科大学附属盛京医院小儿外科近2 a来诊治的15例BA患儿的临床症状、体征、实验室检查结果,诊断、治疗经过及预后,并结合文献报道,对其发病原因、治疗经验、疾病转归及预后进行综合分析。结果男9例,女6例;年龄28~90 d。胆总管闭锁型(Ⅰ型)、肝管闭锁型(Ⅱ型)各3例,肝门区胆管闭锁型(Ⅲ型)8例,胆总管闭锁并先天性肠旋转不良1例。11例生后即出现黄疸,4例出生1周内逐渐发生黄疸。大便进行性变浅或表现为陶土样便13例,2例生后2 d即排陶土样便。15例胆红素水平均有升高,且排泄性肝胆超声均表现为胆囊收缩不良。并巨细胞病毒感染14例,感染率为93%。患儿均行手术治疗,术后病理结果均表现为胆汁淤积性肝硬化。10例患儿术后6~28 d出院,5例患儿术后2 d家属放弃治疗出院。目前随访患儿共12例,随访时间1个月~1.5 a,生长发育均良好,9例有黄疸,10例有黄绿色便排出,2例排陶土样便,4例Ⅰ型和3例Ⅱ型的BA患儿胆红素水平术后可降至正常水平,2例Ⅲ型BA患儿胆红素在术后1个月左右降至正常水平,但反复发生毛细胆管炎。结论BA的病因与病毒感染...     

胆道闭锁中上皮间充质转化机制的探讨

胆道闭锁是婴儿期引起胆汁淤积性黄疸的一种常见疾病,发病原因不清,治疗效果不理想,术后持续肝纤维化是影响其预后的主要原因.最近认为上皮细胞间充质转化(EMT)可能是参与胆道闭锁中持续硬化性胆管炎、肝纤维化的一种病理机制,这一过程涉及一系列信号传导通路,其中较为重要的为TGF-β、cadherin、Snail/Slug等,并伴随一系列胚胎期传导通路如Shh信号、Wnt信号、Notch信号通路的激活.     

胃癌nm23和P53蛋白表达及癌浸润转移的关系

目的探讨胃癌淋巴结增生转移与Ｐ５３,ｎｍ２３蛋白表达的关系．方法应用ＳＰ免疫组织化学方法,检测８７例伴有淋巴结反应性增生和（或）癌转移的胃癌进行Ｐ５３,ｎｍ２３蛋白表达．结果Ｐ５３蛋白阳性表达５２９％,淋巴结反应性增生比淋巴结伴有癌转移者阳性表达率低,差异有显著性（Ｐ＜００１）．ｎｍ２３蛋白阳性表达７７％,淋巴结反应性增生者比淋巴结伴有癌转移者阳性表达率高,差异有显著性（Ｐ＜００１）．结论Ｐ５３和ｎｍ２３蛋白阳性表达均与胃癌的淋巴结增生有关,多有相反的阳性表达,呈显著的负相关关系     

双向等位基因特异性PCR快速区分纯合子和杂合子SNP分型的新方法

目的 建立一种基于单碱基改变基因分型的快速检测等位基因特异性双向PCR原理的改良SNP分型新方法:双向等位基因特异性PCR(Bi-PASA)在一次PCR反应中区分纯合子和杂合子的方法.方法 以SNP位点rs11293201和rs57148397为例,设计两个外部引物(F与R)和两个内部等位基因特异性引物(P与Q).同时与测序方法对比检测突变.结果 两个内部引物(P和Q)包含一个相对短的完全匹配区域和一个富含Gc的10核苷酸5'尾.当基因组DNA被先期扩增出的模板DNA取代时内引物完成从低效扩增到高效扩增的转变,其结果与直接测序完全一致.利用Bi-PASA参数的优化在人类SIP1基因常见突变的外显子中详细研究先天性巨结肠病,3种额外的Bi-PASA分析被快速优化.结论 Bi-PASA是一种简单快速而有效的SNP分型新方法,是在一个PCR反应中检测已知突变的方法.     

Dickkopfl在肛门直肠畸形大鼠泄殖腔发育中的差异表达研究CSCD

目的 研究Wnt信号通路的细胞外拮抗物Dickkopf1（Dkk1）在正常胎鼠和肛门直肠畸形胎鼠的泄殖腔及后肠组织中的差异表达水平,探讨Dkk1与肛门直肠畸形（anorectal malformations,ARM）发生的相关关系。方法 用乙烯硫脲（ethylenethiourea,ETU）致畸Wistar孕鼠24只,制成ARM动物模型,根据切片观察,组成畸形组（n＝96）,胎龄在12～17、19、21 d。取相同胎龄的正常对照组孕鼠16只,对应胎龄胎鼠作为正常对照组（n＝96）。常规制备胎鼠冰冻切片,解剖显微镜下手工显微切割方法准确切取泄殖腔及后肠组织。实时定量聚合酶链反应（real-time polymerase chain reaction,RT-PCR）方法和蛋白印迹（Western blot）方法,检测正常和ARM不同胎龄胎鼠的泄殖腔及后肠组织中Dkk1的mRNA表达情况和蛋白水平。应用随机区组设计的两因素方差分析,比较正常和肛门直肠畸形胎鼠泄殖腔和后肠组织的Dkk1表达水平的差异。结果 在对照组和畸形组大鼠胚胎泄殖腔及后肠组织中均能检测出Dkk1 mRNA和蛋白表达。对照组Dkk1 mRNA及Dkk1蛋白表达在胎龄16 d的大鼠中表达达到峰值分别为2.77±0.06和3.20±0.76。畸形组泄殖腔及后肠组织Dkk1 mRNA及Dkk1蛋白表达呈波动态势,平均水平分别为0.96±0.14和0.87±0.14,与对照组2.00±0.52和1.98±0.65比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 Dkk1在胎鼠的泄殖腔及后肠组织中的低表达可能与ARM的发生有关,可能在ARM的发生中具有重作用。     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤AQP4表达及bFGF治疗效果的研究

目的探讨新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage, HIBD)后脑组织水通道蛋白-4(AQP4)的表达变化及碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)对其治疗效果的影响.方法结扎阻断左侧颈总动脉,仓内N2浓度95%、O2浓度9±1%,缺氧持续20min,建立脑缺氧缺血模型,用RT-PCR方法检测出脑缺氧缺血后不同时间段AQP4 mRNA基因的表达.并对7日龄HIBD后新生大鼠进行bFGF治疗(4μ/g体重,腹腔注射,连续15d).观察治疗后5h、3d、7d、15d、17d后AQP4 mRNA表达的变化.结果 HIBD后5h,脑组织AQP4 mRNA表达增加;HIBD后7日达到高峰(1.93±0.11),15d后仍高于正常组织(1.41±0.23);HIBD后腹腔注射bFGF,3d脑组织AQP4 mRNA有明显变化(0.79±0.15),15d明显降低(0.47±0.06).结论 AQP4与HIBD的形成密切相关;bFGF对HIBD后有明显的改善作用,可能与其保护作用有关.     

腔内导管射频消融联合TACE治疗原发性肝细胞癌门静脉癌栓的疗效观察

目的评价采用Habib~(TM) VesOpen血管内射频消融导管行经皮穿刺射频消融联合TACE治疗原发性肝细胞癌门静脉癌栓的疗效和安全性。方法选择原发性肝细胞癌合并门静脉主干或主要分支内癌栓患者39例,采用Habib~(TM) VesOpen腔内导管射频消融联合TACE治疗,评价手术成功率、术后并发症、血液指标、甲胎蛋白、门静脉通畅及癌栓的影像学变化情况。结果 39例患者手术均顺利完成,未发生血管穿孔、感染、肝脓肿、腹腔出血等与手术相关的并发症;术后2周、4周血常规(白细胞、红细胞、血小板计数)与术前比较差异无统计学意义(P均0.05);肝功能除总胆红素外,丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、血清白蛋白手术前后比较差异有统计学意义(P均0.05);甲胎蛋白手术前后比较差异有统计学意义(P0.05)。术后4周多普勒超声检查提示原堵塞门静脉均有血流通过;术后8周行上腹部增强CT检查或MR检查,提示患者癌栓有不同程度变小或消失。结论采用Habib~(TM) VesOpen血管内射频消融导管经皮穿刺门静脉内癌栓射频消融具有可行性,有望成为治疗原发性肝细胞癌门静脉癌栓的有效手段。     

大鼠骨髓间充质干细胞分化成肝细胞过程中差异基因的功能研究

目的探寻大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)分化成肝细胞过程中的核心调控机制。方法利用芯片检测结果,筛选大鼠骨髓MSCs诱导分化成肝细胞样细胞(hepatocytelike cells,HLCs)、正常肝细胞(normal liver cells,NLCs)动态发展过程中差异表达的基因,利用基因的表达变化进行表达趋势聚类,筛选出显著性的表达趋势。集中分析具有相同趋势的共表达基因,构建基因的共表达调控网络,从中筛选在动态变化过程中的核心基因。结果从MSCs分化成NLCs的动态过程中,通过筛选得到4 938个差异表达基因,Fas、G6pc、IL1b、S100a1、Ndufa7等基因为关键基因。结论 MSCs最终分化成NLCs的过程中,与细胞周期调控、增殖、分化相关基因及糖、脂肪酸、胆固醇的代谢、解毒相关基因表达密切相关。