BNIP3干扰质粒的构建及鉴定

目的 构建大鼠Bcl-2/E1B-19K-interacting protein 3(BNIP3)干扰质粒,研究其对BNIP3蛋白表达水平的影响.方法 利用Invitrogen公司在线软件设计大鼠BNIP3(NM053420)干扰片段,合成互补的单链寡核苷酸,蒋退火后形成的双链克隆人pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR表达载体,连接产物转化感受态细胞,增菌,质粒小量提取并测序.将构建的干扰质粒与大鼠BNIP3表达质粒共转染到HEK293细胞中,采用实时荧光定量PCR和Westem blotting检测对目的 基因的干扰情况.结果 构建的2个干扰质粒经测序证实序列正确,与BNIP3表达质粒共转染后显著抑制外源性BNIP3的mRNA和蛋白表达.结论 成功构建了大鼠BNIP3干扰质粒,为进一步研究BNIP3的功能打下了基础.     

人表皮生长因子受体Ⅲ型突变体胞外区的克隆表达和鉴定

目的 构建含表皮生长因子(EGF)受体Ⅲ型突变体胞外区基因(vⅢECD)的重组质粒并进行表达和鉴定.方法 应用PCR方法扩增EGFRvⅢECD片段,将其T-A克隆和测序.再将目的基因插入GST融合表达载体pGEX-4T-1中进行表达.采用双酶切鉴定插入序列的正确性,用SDS-PAGE及Western blotting分析融合蛋白的表达.结果 测序结果证实插入DNA序列与EGFR胞外区序列完全一致;双酶切鉴定表明,EGFRvⅢ ECD序列已经正确克隆到GST融合表达载体中.SDS-PAGE电泳显示融合蛋白在E.coli BL21(DE3)中以包涵体形式表达.重组融合蛋白GST-vⅢ ECD的表达量占菌体总蛋白的15%以上.Western blotting分析证实重组融合蛋白可以被EGFR特异性抗体所识别.结论 成功构建了融合表达载体(pGEX-4T-1/vⅢECD),并进行了融合蛋白的诱导表达和鉴定,可进一步用于EGFRvⅢ功能及免疫学研究.     

应用亲和层析分离纯化人小脑乙酰胆碱酯酶的初步研究

目的分离纯化人小脑乙酰胆碱酯酶（ＡＣｈＥ）。材料和方法采用ＣｏｎＡ和民Ｂ１０亲和层析法纯化人小脑ＡＣｈＥ。以纯化的人小脑ＡＣｈＥ为免疫原，免疫６只ＢＡＬＢ／ｃ小鼠制备小鼠抗人小脑ＡＣｈＥ抗血清，并检测其与电鳐ＡＣｈＥ和人红细胞膜ＡＣｈＥ。Ｅ的交叉免疫反应性。结果ＳＤＳ－ＰＡＧＥ还原状态下呈一条主带，相对分子质量为６７０００，比活性为３７３Ｕ／ｍｇ。结论免疫亲和层析法操作简单，可快速纯化人小脑ＡＣｈＥ。     

听觉诱发电位和靶控输注丙泊酚复合瑞芬太尼静脉麻醉在神经外科术中唤醒的应用

目的研究听觉诱发电位（AEP）和靶控输注（TCI）丙泊酚复合瑞芬太尼静脉麻醉在神经外科术中进行唤醒的安全性和可控性。方法 21例美国麻醉医师协会（ASA）Ⅰ或Ⅱ级拟脑功能区择期手术者,在丙泊酚复合瑞芬太尼静脉麻醉下行脑功能区手术时实行唤醒。结果 19例患者成功唤醒,对手术过程无回忆。唤醒过程中听觉诱发指数（AAI）值与平均动脉压（MAP）无相关,而与丙泊酚靶控输注（TCI）浓度有较好的相关性（P〈0.05）。结论利用AEP监测和TCI丙泊酚复合瑞芬太尼静脉麻醉能准确实施术中唤醒。     

ApoE4在U87细胞中可增加GSK-3β的表达及Tau的磷酸化

目的探讨ApoE4 与GSK-3β及Tau 蛋白超磷酸化之间的关系,为研究ApoE4 在阿尔茨海默病（AD）中的作用机制提供 实验依据。方法分别将对照质粒载体pIRES-EGFP、重组质粒ApoE4/pIRES-EGFP 和ApoE3/pIRES-EGFP 转染U87 脑星形 胶质细胞系,用免疫蛋白印迹法（Western blotting）检测p-Tau/Tau 及GSK-3β蛋白水平的变化。在U87 细胞中转入干扰ApoE 表达的siRNA（ApoE-siRNA）及对照siRNA,检测p-Tau/Tau 及GSK-3β蛋白的改变情况。将质粒转染前后及siRNA干扰前后 目标蛋白的含量或磷酸化水平的改变进行统计学比较。结果与对照组相比,GSK-3β蛋白水平的相对值分别为：ApoE4 组 （1.819±0.130,P<0.01,n=3）和ApoE3 组（1.336±0.130,P<0.01,n=3）,差异具显著差异,且ApoE4 和ApoE3 组比较也具有显 著性差异（P<0.01）。同样,相对于对照组,ApoE4 和ApoE3 组的磷酸化Tau 蛋白（p-Tau）的相对值分别为1.587±0.027（P< 0.01,n=3）和1.436±0.026（P<0.01,n=3）,均具显著差异;且ApoE4 组较ApoE3 组的促进作用更强,两组间具显著差异（P< 0.01)。此外,用ApoE-siRNA 干扰后,U87 细胞中GSK-3β的表达和p-Tau 水平均较对照组显著降低,分别为0.544±0.058（P< 0.001,n=3）和0.474±0.060（P<0.01,n=3）。结论AD危险因子ApoE4 可能通过上调GSK-3β的表达而促进Tau 的磷酸化。     

运动员腱止点末端病的研究进展

目的:就近年来有关腱止点末端病的研究报道,对腱止点末端病的研究现状进行阐述。资料来源:应用计算机检索Medline数据库1990-01/2006-12期间的相关文章,检索词为“Enthesopathy”和“tendinopathy”,限定文章语言种类为英文。同时计算机检索万方数据资源系统与中国期刊全文数据库1994-01/2005-12期间的相关文章,检索词“腱止点,末端病,腱病”,限定文章语言种类为中文。资料选择:选取与腱止点末端病的基础和临床相关的文献,排除重复性实验研究。资料提炼:共收集到20篇关于细胞因子在肌腱损伤愈合方面的基础和临床相关实验文章,16篇实验文章纳入标准。排除的4篇实验均为重复的同一研究。资料综合:①腱止点末端结构主要由4部分组成,其结构特点比较复杂;主要功能是传导和缓冲应力。②腱止点末端病的病因、病理目前还不清楚;一般认为其病因主要是末端结构失代偿,病理主要是胶原和软骨的退行性变。③通过各种理疗手段,能够改善腱止点末端的临床症状;但不能从根本上消除病因。结论:目前对腱止点末端结构的研究比较透彻,对末端病的病因、病理及与细胞凋亡的关系还了解较少,同时对于末端病的治疗目前还缺少可靠的科学方法,因此有必要对目前的治疗方法进行严密设计,随机研究其效果,同时还应积极开展对其他治疗方法(基因疗法、细胞因子疗法)的探索和研究。     

宫腔镜手术治疗黏膜下子宫肌瘤的效果观察及对患者并发症的影响分析

目的探讨宫腔镜手术治疗黏膜下子宫肌瘤的效果及对患者并发症的影响。方法选取2019年2月至2020年3月因黏膜下子宫肌瘤于本院妇科进行手术治疗的患者82例,按手术方式不同分为常规组和实验组,每组41例。常规组采用腹腔镜手术方式,实验组采用宫腔镜手术方式。比较两组术中情况、术后恢复情况、临床疗效、并发症发生情况及子宫功能恢复情况。结果实验组并发症发生率低于常规组,差异有统计学意义(P<0.05);实验组治疗总有效率高于常规组,差异有统计学意义(P<0.05);实验组手术时间、术后下床活动时间、住院时间及月经恢复时间均短于常规组,术中出血量少于常规组,差异有统计学意义(P<0.05);术前及术后3个月,两组患者E2水平比较差异无统计学意义;术后3个月,实验组FSH水平低于常规组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论对黏膜下子宫肌瘤患者实施宫腔镜手术,能够降低手术并发症发生率,同时还能够提升临床疗效,缩短手术时间及术后恢复时间,提升子宫功能恢复效果,值得在黏膜下子宫肌瘤患者的临床治疗工作中推广实施。     

不同强度他汀对中青年冠心病患者支架植入术后血脂水平的影响及安全性

目的:探讨不同强度他汀对中青年冠心病支架植入术后患者血脂水平的影响及安全性。方法:回顾性分析我科2013年12月至2014年6月住院治疗的中青年冠心病支架植入术后服用瑞舒伐他汀(可定)的168例患者的相关情况,其中应用瑞舒伐他汀10 mg/d治疗的81例(中强度组),应用瑞舒伐他汀20mg/d治疗的87例(高强度组),治疗6~8周后,比较两组患者治疗前后总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)以及谷丙转氨酶(alanine transaminase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate transaminase,AST)、超敏C反应蛋白(hypersensitive3 C-reactive protein,hs-CRP)、肌酸肌酶(creatine kinase,CK)的变化水平和不良反应。结果:治疗6~8周后,2组患者的TC、TG、LDL-C及hs-CRP均较治疗前明显下降(高强度组:5.42±1.09、2.85±0.71,P=0.000;1.69±0.73、1.14±0.31,P=0.000;3.56±0.95、1.79±0.54,P=0.000;2.64±1.22、1.04±0.63,P=0.000;中强度组:5.31±1.29、3.18±0.85,P=0.000;1.63±0.58、1.22±0.25,P=0.000;3.39±0.66、2.00±0.76,P=0.000;2.42±1.40、1.33±0.68,P=0.000),HDL-C较治疗前升高(高强度组:1.23±0.29、1.42±0.30,P=0.000;中强度组:1.19±0.35、1.37±0.42,P=0.003)。高强度治疗组的TC、LDL-C及hs-CRP下降较中强度组明显(2.85±0.71、3.18±0.85,P=0.006;1.79±0.54、2.00±0.76,P=0.036;1.04±0.63、1.33±0.68,P=0.005)。治疗期间所有患者均未发生转氨酶及肌酶异常。结论:高强度他汀(瑞舒伐他汀20 mg/d)较中强度他汀(瑞舒伐他汀10 mg/d)降低LDL-C的效果更佳,且安全性较好。     

以患者安全为导向的延续护理测评工具系统评价

目的 ：系统评价以患者安全为导向的延续护理测评工具的测量属性和方法学质量,为医疗卫生保健专业人员选择最佳的测评工具提供借鉴。方法 ：检索中、英文数据库中有关延续护理测评工具的文献,检索时限为建库至2022年10月27日。由两位研究者采用COSMIN独立测评,对纳入的测评工具的内容效度、结构效度、内部一致性、稳定性、假设检验等进行详细分析。结果 ：共纳入27篇文献,9种测评工具。内容效度方面,1种工具评价结果为“充分”,8种工具质量评价为“不确定”或“未提及”。结构效度方面,1种工具评价为“充分”,8种工具评价为“不确定”。就内部一致性而言,1种工具评价为“不充分”,1种工具评价为“不确定”,7种工具评价为“充分”。稳定性方面,1种工具评价为“不充分”,1种工具评价为“不确定”,7种工具为“未提及”。假设检验方面,4种工具评价为“充分”,5种工具评价为“不确定”或“未提及”。结论 ：鉴于评价结果及证据分级,延续护理测评量表被评为A类工具,其余8种量表被评为B类工具,无C类工具。因此推荐延续护理测评量表,其具有较好的信度、效度,但是否能够在国内得到广泛应用,还需要进一步研究。