成肌细胞培养的重复肌块法

【目的】改进体外成肌细胞培养方法。【方法】取 2 0只小鼠分 4组 ,取股骨肌用肌块法进行成肌细胞原代培养 ,并重复利用肌块 6次。对培养的成肌细胞进行生长状态观察及免疫的组化鉴定。【结果】重复 6次使用肌块培养的成肌细胞生长、分化良好 ;一次差速贴壁纯化后 ,经免疫组化方法鉴定 ,96 %以上的细胞呈肌细胞特异抗体阳性反应。【结论】重复肌块法培养成肌细胞 ,省略了重复组织获取、消化等烦琐步骤 ,培养效率明显提高 ,并可获得高纯度的成肌细胞     

不同放疗剂量对肌营养不良鼠骨髓干细胞移植的影响

目的　使用不同剂量γ射线对Duchenne型肌营养不良鼠 (mdx鼠 )照射 ,研究骨髓干细胞移植后mdx鼠缺失蛋白表达的情况。方法　将 18只 7～ 8周mdx鼠随机平均分为A、B、C 3组 ,依次给予 7Gy、7.5Gy、8Gyγ射线预处理 ;3天后行骨髓干细胞移植。移植骨髓干细胞取自 4～ 5周的C5 7BL/6鼠 ,体外培养 3d ,按 1 2× 10 7个细胞 /每只剂量移植给 3组预处理后的mdx鼠。连续观察受体鼠的移植物抗宿主病 (GVHD)程度 ;移植 12周后 ,检测受体鼠体内抗肌萎缩蛋白表达情况。结果　C组GVHD反应较明显 ;A、B、C 3组的股骨肌肌纤维dystrophin蛋白表达率分别为 8%、9%和 13 %。各组间缺失蛋白表达率有显著差异。结论　对 7～ 8周mdx鼠 ,给予不同剂量的γ射线预处理 ,骨髓干细胞移植后 ,8Gyγ射线表达最多 ,7Gy射线照射表达量最少 ;但 8Gyγ射线照射GVHD反应较明显。     

亚致死量放疗对Duchenne型肌营养不良鼠骨髓干细胞移植的影响

[目的]研究7 Gy γ射线放疗对Duchenne型肌营养不良鼠(mdx鼠)骨髓干细胞移植的效果。[方法]获取4~5周昆明鼠的骨髓干细胞,体外培养3 d,移植给7 Gy剂量放疗的7~8周的mdx鼠。22只7 Gy剂量放疗的肌营养不良鼠鼠,随机分为A、B、C、D 4组;A、B、C每组6只,静脉移植骨髓干细胞数为A组:1.2×106/只、B组4.8×106/只、C组1.2×107/只。D组4只作空白移植对照。观察受体鼠存活率,临床监测移植物抗宿主病(GVHD)情况;移植12周后,检测受体鼠肌组织抗肌萎缩蛋白表达情况。[结果]移植3个月后,22只实验鼠全部存活,18只移植鼠有近9％肌纤维表达dystrophin蛋白。[结论]移植前给予7 Gy γ射线放疗照射mdx鼠,部分破坏受体骨髓造血系统后,静脉注射移植同种、非同系鼠的骨髓干细胞,3个月之后,受照射鼠实现了100％存活;且移植鼠均有抗肌萎缩蛋白表达。     

骨髓干细胞移植治疗Duchenne型肌营养不良鼠的实验研究

目的　研究骨髓干细胞移植治疗Duchenne型肌营养不良鼠 (mdx鼠 )的效果。方法　取 4～ 5周龄昆明鼠骨髓干细胞 ,体外培养 3d ,静脉移植到 7Gyγ射线预处理 7～ 8周龄mdx鼠体内。临床监测受体鼠移植物抗宿主病 (GVHD)表现 ,并对移植 12周mdx鼠的运动功能、肌电生理、dystrophin蛋白表达情况进行检测。 结果　 5只 7Gy剂量放疗mdx鼠 ,静脉移植 4 8× 10 6骨髓干细胞 ,3个月后 ,肌电图指标有了部分改善 ;10 %肌纤维表达了dystrophin蛋白。结论　静脉移植同种非同系鼠骨髓干细胞治疗mdx鼠有效 ,显示骨髓干细胞移植治疗DMD有着理想的前景。     

mdx小鼠与C57小鼠骨髓基质细胞体外分化能力的比较**

背景：肌营养不良症是一种渐进性致死性X连锁隐性遗传性肌肉疾病,目前无特效治疗。肌营养不良症模型鼠(mdx小鼠)的骨髓基质细胞增殖及定向分化能力是否正常,自身骨髓移植是否合适还有待研究。 目的：观察mdx小鼠骨髓基质细胞体外培养时的增殖及多向分化能力。 方法：取mdx小鼠与C57小鼠胫股骨骨髓基质细胞体外培养,经吉姆萨染色后观察其形成成纤维细胞集落形成单位的能力;通过不同诱导液使骨髓基质细胞定向分化为成骨、成脂、成肌细胞,观察其形态学特性;并分别用Von kossa 染色、油红O染色、免疫荧光检测desmin阳性细胞对已分化细胞进行鉴定和分化率比较;培养1周时,提取分化细胞总RNA,反转录后,用real-time PCR检测各分化细胞相关基因表达。 结果与结论：mdx小鼠骨髓基质细胞形成的成纤维细胞集落形成单位数目和体积均小于C57小鼠。其成骨、成肌分化的效率均明显低于C57小鼠(P < 0.01),两种小鼠的骨髓基质细胞成脂分化效率差异无显著性(P > 0.05)。real-time PCR检测结果显示,与C57小鼠相比,mdx小鼠的骨髓基质细胞成骨、成肌基因表达均有不同程度下降,而成脂基因表达无明显差异。结果提示,mdx小鼠的骨髓基质细胞体外培养时的增殖及定向分化能力较C57小鼠下降,与Dystrophin 基因缺失有关,mdx小鼠自体骨髓移植将会受限。     

高压氧治疗72例偏头痛的疗效分析

目的探讨高压氧(HBO)治疗偏头痛的疗程与临床疗效。方法采用HBO合并药物治疗偏头痛,观察头痛缓解率及治疗疗程。结果HBO治疗组总有效率明显高于对照组。结论HBO治疗偏头痛疗效显著,对顽固性偏头痛可适当延长疗程。     

进行性核上性麻痹的临床特点以及MRI和PET-CT分析

目的总结临床诊断为进行性核上性麻痹(PSP)病例,分析PSP的临床特点以及MRI和PET-CT表现,以探索PSP的诊断及治疗方法。方法回顾性分析5例PSP患者的临床资料,总结该病的MRI和PET-CT表现及临床特点。结果 5例患者均呈慢性隐匿性起病,进行性加重,中晚期出现核上性凝视麻痹、头后仰、轴性肌张力增高、动作迟缓和反复跌倒。头颅MRI可见中脑萎缩明显,脚间池扩大,中脑和脑桥长轴的垂直线比值在0.35~0.43区间,脑桥与中脑的面积比值在0.10~0.15区间,5例患者磁共振帕金森综合征指数(MRPI)均13.55。PET-CT示双侧额叶、中脑、丘脑、纹状体等部位可有不同程度的葡萄糖代谢减低,5例患者均有双侧纹状体多巴胺代谢减低。唑吡坦对患者运动障碍改善似有帮助。结论 PSP的诊断仍以临床表现为主,影像学特异性改变有助诊断。目前尚无确切有效的治疗。     

过量运动对肌营养不良模型鼠骨骼肌的损害作用

目的:观察过量运动对Duchenne型肌营养不良症模型鼠(mdx鼠)骨骼肌组织的影响。方法: 让成年和老年mdx小鼠、成年和老年C57小鼠连续进行游泳和提尾倒立运动试验(对照mdx不作运动), 每天1次, 每次13min, 连续3d后, 鼠尾静脉注谢Evans蓝, 次日杀小鼠, 剥去皮肤, 观察mdx鼠、C57鼠全身骨骼肌颜色改变, 对比照相后, 取腓肠肌、膈肌作冰冻切片, 荧光显微镜下, 观察Evans蓝的染色范围, 再作常规HE染色, 光学显微镜下, 观察骨骼肌细胞的组织学改变。结果:肉眼可见运动后的mdx鼠骨骼肌许多部位呈纵形条状蓝色, 而对照mdx鼠和C57鼠几乎无Evans蓝染色;荧光显微镜下, 运动后的mdx鼠骨骼肌可见Evans蓝荧光, 对照mdx鼠偶见此荧光, 而C57鼠无此荧光。光学显微镜下, 可见mdx鼠骨骼肌细胞变大、变圆, 伊红浓染, 胞核致密粗大, 坏死的肌细胞胞内结构降解, 呈无定型结构。膈肌中可见变性坏死的肌纤维居多, 而C57鼠无此改变。结论:过量运动造成了mdx鼠骨骼肌的损害;Evans蓝染色有助于鉴别变性坏死的肌纤维和研究dystrophin缺乏的肌肉的变性过程。     

运动神经元病的单纤维肌电图的研究

目的研究单纤维肌电图（ＳＦＥＭＧ）对运动神经元病的辅助诊断价值及探讨单纤维肌电图异常率与其病型、病情的关系。方法应用单纤维肌电图技术对４８例运动神经元病（ＭＮＤ）患者，２４例颈椎性脊髓病（ＣＳＭ）患者及４２名健康正常受试者进行研究。结果ＭＮＤ患者的ＳＦＥＭＧ阳性率为７３％，ＣＳＭ患者的ＳＦＥＭＧ阳性率为４％。结论ＳＦＥＭＧ有助于鉴别ＭＮＤ与ＣＳＭ。ＳＦＥＭＧ异常率与病型无关，与病情有关，提示ＭＮＤ存在明显的神经肌肉接头传递功能障碍。     

补肾方辅助骨髓干细胞移植治疗DMD的实验研究

目的:观察补肾方辅助骨髓干细胞移植治疗mdx小鼠的效果。方法:体外培养正常C57BL/6小鼠骨髓细胞对放疗后mdx小鼠尾静脉移植,用补肾方水提液灌胃实验鼠,观察实验小鼠存活率和移植物抗宿主病(GVHD)症状;移植后4个月/8个月取小鼠骨骼肌以HE染色观察病理状况,以免疫荧光方法检测细胞骨架蛋白(DYS蛋白)表达。结果:补肾方能不同程度降低mdx鼠核中心移位比例和提高DYS蛋白表达量;同时能明显减轻GVHD症状。结论:补肾方能提高骨髓干细胞移植治疗mdx小鼠的效果。