RNA干扰沉默EZH2基因对人膀胱癌EJ细胞增殖的影响

目的:研究RNA干扰沉默EZH2基因对人膀胱癌EJ细胞周期和增殖的影响.方法:体外构建EZH2基因的shRNA的表达载体,Lipofectamin 2000介导转染膀胱癌EJ细胞,采用RT-PCR和Western Blot方法检测特异性shRNA对EZH2基因沉默效果,转染后采用MTT法检测shRNA对细胞增殖的作用;应用PI单染流式细胞术分析对细胞周期的改变.结果:EZH2基因的shRNA表达载体有效下调EZH2基因的表达(P<0.05).与对照组比较,细胞增殖明显抑制(P<0.05);同时引起细胞G1期阻滞,RNA干扰后,G1期细胞增加[(84.0±8.7)% vs (52.0±6.8)%, P<0.05],S期细胞减少[(11.0±1.1)% vs (43.0±4.9)%, P<0.05].结论:EZH2基因有望成为应用RNAi技术探索膀胱癌基因治疗的潜在靶基因.     

缺血预适应在大鼠肢体缺血再灌注后胃粘膜损伤中的作用

目的:观察肢体缺血再灌注(LIR)对胃粘膜的损伤,探讨肢体缺血再灌注对胃粘膜损伤的作用及其部分机制,以及短暂多次肢体缺血在胃粘膜损伤发生中的作用。方法:按Rosenthal方法复制大鼠LIR模型,观察并测定肢体缺血4h再灌注4h后以及应用缺血预适应干预对胃粘膜损伤的影响:取各组胃粘膜制作切片于光学显微镜和电子显微镜下进行观察,测定各组胃粘膜损伤指数、胃粘膜血流量(GMBF)、胃结合粘液量、胃粘液中磷脂、氨基己糖的含量、血浆和胃组织一氧化氮含量以及胃粘膜一氧化氮合酶(NOS)活性。结果:光学显微镜和电子显微镜观察结果显示大鼠LIR后胃粘膜损伤严重,IPC组各类细胞损伤较LIR组轻;LIR后GMBF及胃结合粘液量、胃粘液中磷脂、氨基己糖的含量均低于对照组,虽然IPC组大部分指标与对照组有差异,但与LIR组对比GMBF及胃结合粘液量、胃粘液中磷脂、氨基己糖的含量均较高于LIR组;LIR组血浆与胃粘膜组织NO含量及NOS活性显著高于对照组,而IPC组血浆与胃粘膜组织NO含量和胃粘膜的NOS活性又显著高于LIR组。结论:肢体缺血再灌注可导致胃粘膜损伤;缺血预适应可减轻肢体缺血再灌注后的胃粘膜损伤。     

一氧化氮在止血带休克发病学中的意义

（1）目的：探讨一氧化氮（NO）在止血带休克发病学中的意义。（2）方法：本实验采用了Rosenthal法复制大鼠止血带休克（tourniquet shock,ToS）模型,观察一氧化氮合酶（NOS）抑制剂氨基胍（AG）及一氧化氮（NO）合成前体物质L－精氨酸（L-Arg)对ToS的影响。（3）结果：ToS时,平均动脉压（MAP）进行性降低,局部骨骼肌组织NOS活性增强,血浆NO含量增高;给予AG后虽能增强动物血压松带后血压早期的回升,但晚期血压迅速下降,骨骼肌组织W／D比值,组织髓过氧化物酶（MPO）的含量、血浆乳酸脱氢酶（LDH）、组织蛋白酶D（CD）活性增高,而给予L－Arg能减轻ToS晚期血压降低,并能减轻组织及血浆的上述损伤变化。（4）结论：ToS时内源性一氧化氮升高对机体具有适应保护意义。     

肢体缺血再灌注后肺损伤变化及牛磺酸对其的影响

目的　观察大鼠肢体缺血再灌注 (LIR)后肺的损伤性变化及牛磺酸 (Tau)对其的影响。方法　实验采用大鼠LIR损伤模型 ,将Wistar大鼠随机分为对照组、缺血再灌注组 (IR组 )、Tau +IR组 ,分别测定 p(O2 )和 p(CO2 )、肺系数 (LI)和肺通透指数 (LPI) ,光镜和透射电镜观察肺组织形态学变化。结果　Tau +IR组在改善肺呼吸功能、减轻组织水肿及中性粒细胞的聚集方面均显著优于其他两组。结论　Tau对大鼠止血带休克后继发的肺损伤具有保护作用。     

微课联合问题引导式教学在麻醉生理学教学中的应用设计——以呼吸麻醉生理为例

麻醉生理学是麻醉学专业必修的基础课程,但传统麻醉生理学教学枯燥乏味、晦涩难懂且与临床脱节严重,故教学效果并不理想,因此,建立一种通俗易懂且趣味横生的教学模式对麻醉生理学教学非常重要。"问题引导式教学"的优点是可调动学生的主动性和积极性,但却存在系统性弱,不利于整体教学质量的提高。"微课"教学更具直观性和趣味性,但这种教学却因为缺少学生互动而不利于调动学生的积极性和主动性。因此,我们尝试将两种教学方法联合起来应用于麻醉生理学的教学中,这样即可形成取长补短、优势互补的适应麻醉生理学特点的新教学模式。     

p16基因启动子甲基化与乳腺癌临床病理特征的关系

目的探讨p16基因在乳腺癌组织中的表达及其启动子区域甲基化情况,并分析p16基因启动子甲基化与临床病理特征的关系。方法采用免疫组织化学SP方法和甲基化PCR(MSP)方法检测47例乳腺癌和20例乳腺增生组织p16蛋白表达及其启动子甲基化情况。结果乳腺癌组织p16蛋白阳性表达率低于乳腺增生组织(48.9%vs.70.0%),启动子甲基化率高于乳腺增生组织(38.3%vs.20.0%),但差异均无统计学意义(P>0.05);p16基因表达下降与其高甲基化呈负相关(r=-0.33,P=0.02);p16基因启动子甲基化与年龄、肿瘤直径、临床分期、雌激素受体(ER)以及孕激素受体(PR)无关(P>0.05),而与组织分级、淋巴结转移有关(P<0.05)。结论p16基因启动子甲基化诱导p16蛋白低表达在乳腺癌早期发生过程中作用有限,但在乳腺癌发展过程中发挥作用。     

转移抑制基因MRP1/CD9的研究进展

MRP1/CD9属于TM4SF家族的成员,结构为细胞膜糖蛋白,有4个高度保守的跨膜结构域。研究表明MRP1/CD9对多种肿瘤的转移有抑制作用,高转移潜能肿瘤细胞MRP1/CD9低表达或不表达,低转移潜能肿瘤细胞呈相对高表达。MRP1/CD9可以作为肿瘤预后判定的一个指标,为肿瘤治疗提供了新途径。     

HO-1对肝硬化导致的糖代谢紊乱的影响及机制初探

目的 探讨血红素加氧酶-1（HO-1）对肝硬化导致的糖代谢紊乱的影响及机制。方法 50只雄性SD大鼠随机分4组:假手术组、肝硬化组、锌原卟啉-IX（ZnPP-IX）组、氯高铁血红素（Hemin）组。除假手术组外,其余3组造肝硬化模型,于造模成功后,向ZnPP-IX组大鼠隔日一次（qod)腹腔注射ZnPP-IX 10 μmol/kg,Hemin组大鼠同时点腹腔注射Hemin 30 μmol/kg,肝硬化组和假手术组大鼠同时点腹腔注射等量生理盐水,共干预4周。于4周末做葡萄糖耐量实验,测各组糖代谢相关指标。采用免疫组化和Western blot检测HO-1蛋白在肝组织中的表达情况。结果 肝硬化组大鼠肝组织HO-1蛋白表达高于假手术组和ZnPP-IX组（P<0.05）,低于Hemin组（P<0.05）。各组间空腹血糖（FPG）差异无统计学意义（P>0.05）。与假手术组比,肝硬化组大鼠2 h血糖（PPG）、空腹胰岛素（FINS）、2 h胰岛素（PINS）、胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）均增高（P均＜0.05）,胰岛素敏感指数（ISI）则降低（P<0.05）。ZnPP-IX组较肝硬化组PPG、FINS、PINS、HOMA-IR进一步增高（P均＜0.05）,ISI进一步降低（P<0.05）。Hemin组相比肝硬化组各指标变化与ZnPP-IX组相反（P均＜0.05）。结论 提高HO-1在肝脏的表达能改善肝硬化大鼠的糖代谢紊乱,其作用机制可能与HO-1代谢产物所具备的保护作用有关。     

MRP1/CD9在肺癌组织中的表达及临床意义

采用免疫组化S-P法和RT-PCR法检测53例肺癌患者癌组织中MRP1/CD9蛋白和mRNA的表达,并与12例正常组织比较。结果 癌组织MRP1/CD9蛋白和mRNA阳性表达率分别为60%和66%,正常肺组织二者表达阳性率分别为92%、100%,P均〈0.05。癌组织中MRP1/CD9的表达与组织病理类型无关,与肿瘤病理分级和临床分期有关,高分化肿瘤组织和临床分期低肿瘤组织MRP1/CD9呈高表达。认为MRP1/CD9低表达与肺癌的发生、发展及转移有关。     

人膀胱癌EJ细胞EZH2基因表达降低后基因表达谱的差异分析

目的 利用基因芯片技术筛选膀胱癌EJ细胞EZH2基因RNA干扰后的差异表达基因,探讨EZH2基因在肿瘤中作用机制。方法 构建EZH2基因的shRNA表达载体,转染膀胱癌EJ细胞,基因芯片筛选差异表达基因并上传passway miner服务器（http:// www. biorag. org. /passway. htm）进行功能分类。结果 差异表达基因436条,下调179条,上调257条,功能聚类分析显示115个差异表达基因定位于已知的生物通路中,有EGF信号传导通路、p53传导通路、细胞增殖、细胞周期通路、Notch、Wnt 通路等。EZH2靶基因WNT1、MYT1、CNR1、WT1表达上调,部分通路及基因与肿瘤干细胞和细胞分化有关。结论 EZH2基因通过多个基因介导参与细胞分化,对EZH2相关基因的研究有助于明确EZH2在细胞癌变过程中的作用机制