分泌蛋白MPT64鉴定结核分枝杆菌复合群的应用研究

v、牛分枝杆菌和非洲分枝杆菌为阳性,24株非MTB均为阴性;mpt64基因扩增的结果与ELISA法检测结果完全相符.ELISA法检测MTB临床分离株的敏感度为97.3%(110/113),57株非MTB均未检出MPT64蛋白,检测特异度为100.0%.基因扩增MTB中2株为阴性,非MTB均为阴性.结论 采用ELISA法检测分泌蛋白MPT64来鉴定MTB复合群,是一种准确、快速和简便的方法,值得临床推广应用.     

医院供应室人员的职业暴露危险因素及防护对策

医院的职业暴露是指医务人员从事诊疗、护理等工作过程中意外被含有致病微生物的血液、体液污染了皮肤或黏膜,或者被含有致病的血液、体液污染了针头及其他锐器刺破皮肤,有可能被感染的情况。供应室人员一方面向全院各科室提供灭菌物品,另一方面肩负着回收及处理各科室污染器械及物品,是病菌比较集中、污染比较严重的部门。如何避免     

结核分支杆菌异烟肼耐药基因突变微通道电泳检测方法的建立

目的 建立一种用微通道电泳芯片分析系统检测结核分支杆菌异烟肼耐药基因突变的方法。方法 以丙烯酰胺及其衍生物的聚合物溶液作为筛分介质，溶液中掺入微量的吖啶橙作为荧光标记物，对结核分支杆菌的异烟肼耐药相关的katG和inhA基因进行单链构象多态性(SSCP)分析，检测其与耐药性相关的突变。对于突变部位附近没有二级结构的inhA基因，设计了特别的引物使扩增产物增加一个能与突变部位配对的区域，从而使野生型片段呈现独特的构象。结果 此方法可实现对katG基因野生型片段与315位密码子突变型片段的区分，以及对inhA基因调节序列野生型与突变型片段的区分。30个临床分离株中的23个耐药株有22个被检出，效率达95％。结论 微通道电泳方法用于结核杆菌耐药基因突变检测，具有快速、灵敏的优点，可望将之应用于临床耐药性检测。     

CYP2C19基因多态性对肺结核患者利福平血药浓度的影响及个体化用药的研究

目的探讨肺结核患者给予利福平(RFP)后血药浓度的个体差异与肝药酶P450 2C19(CYP2C19)基因多态性的关系,为临床合理用药提供参考。方法 HPLC检测142例肺结核患者利福平的血药浓度。运用PCR-RFLP方法对所有患者的CYP2C19*2和CYP2C19*3位点进行基因型分型,分析基因多态性与RFP血药浓度的相关性。结果不同基因型的肺结核患者RFP血药浓度在个体间存在很大差异,其中CYP2C19*2位点的AA基因型与GG基因型的患者相比,给药后2、4、8 h前者RFP血药浓度明显高于后者,差异有统计学意义(P<0.05);CYP2C19*3位点的AA基因型与GG基因型的患者相比,给药后8 h前者RFP血药浓度明显高于后者,差异有统计学意义(P<0.05),其他基因型之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论本研究结果证实CYP2C19基因多态性影响RFP血药浓度,说明药物遗传学因素对RFP临床合理用药有指导意义。     

核黄素光化学作用对淋巴细胞分泌细胞因子的影响研究

目的探讨用核黄素光化学法预防输血相关移植物抗宿主病(TA-GVHD)的可行性。方法随机从的全血中收集淋巴细胞,将淋巴细胞悬浮于核黄素终浓度为50μmol/L的1640培养液中,注入440 nm处透光率为80%的PVC透光塑料袋内。用400—500 nm的可见光照射,照射量为8.8 J/ml。对照组为相同来源、悬浮于不含核黄素的1640培养液中,未接受光照处理的淋巴细胞。以植物血凝素(PHA)、CD3单抗、CD28单抗等同步刺激实验组和对照组淋巴细胞,用酶标方法检测细胞因子分泌量。结果经过核黄素光化学法处理后的淋巴细胞,接受PHA刺激后,实验组淋巴细胞IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α和INF-γ的分泌量比对照组细胞分别降低了(99.47±0.80)%、(99.81±0.46)%、(84.26±24.20)%、(99.86±1.23)%、(92.30±11.04)%、(89.50±15.66)%、(99.98±0.06)%和100%;接受CD3单抗刺激后,实验组淋巴细胞IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α和INF-γ的分泌量比对照组细胞分别降低了(99.32±1.30)%、(99.37±1.16)%、(93.31±7.86)%、(93.04±14.16)%、(84.70±10.22)%和100%。接受CD3单抗和CD28单抗联合刺激后,实验组淋巴细胞IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α和INF-γ的分泌量比对照组细胞分别降低了(96.88±7.25)%、(98.55±3.61)%、(94.35±4.93)%、(88.69±10.42)%和100%。结论核黄素光化学法处理可使淋巴细胞失去生成GVHD相关细胞因子的能力,初步证明核黄素光化学法能在细胞水平有效阻断淋巴细胞通过接受抗原诱导表达细胞因子参与TA-GVHD病理改变的通路。     

核黄素光化学作用灭活大肠杆菌的研究

目的研究核黄素光化学反应对细菌的灭活作用,探讨分析核黄素光化学灭活病原体的机理。方法将含有细菌的培养液4.950ml注入5ml血袋中,再加入10mmol/L的核黄素溶液50μl使其终浓度为100μmol/L,将血袋置控温光照仪中接受400—500nm波段可见光双侧照射[剂量(8.0—32.0)J/cm2],照射时温度为(4±2)℃;照射后标本通过细菌培养,透射电镜影像、核酸检测(LacZ基因片段)等方法观察核黄素光化学作用灭活大肠杆菌的效果。结果400—500nm可见光激发的核黄素光化学作用可以有效灭活大肠杆菌达6log;透射电镜影像示经核黄素光化学处理的大肠杆菌其拟核所在区域出现多个空泡;PCR显示经核黄素光化学处理的大肠杆菌其LacZ基因片段的复制被完全阻止。结论可见光激发的核黄素光化学作用可以有效灭活大肠杆菌,核酸是核黄素光化学产生病原体灭活作用的主要靶点。     

RNA恒温扩增实时检测技术快速鉴定偶发分枝杆菌的研究

目的建立RNA恒温扩增实时检测技术快速鉴定偶发分枝杆菌(RIARD-MF)的方法,评估其在鉴定分枝杆菌临床分离株中的应用效果。方法将偶发分枝杆菌的16SrRNA特异序列作为目的靶标进行检测,设计含T7启动子逆转录扩增引物和RNA探针,分别对5种非分枝杆菌细菌、20种分枝杆菌标准株和259株临床分枝杆菌分离株进行42℃恒温扩增实时检测,参考标准为PCR基因测序结果。结果RIARD-MF方法学检测灵敏度可达60CFU/mL。在25种细菌的RIARD-MF特异性检测中:只有偶发分枝杆菌检测结果为阳性,其余24种细菌均为阴性,与测序检测结果一致。在检测分枝杆菌临床分离菌株时,RIARD-MF鉴定偶发分枝杆菌5株,其余为非偶发分枝杆菌,与测序结果一致,检测灵敏度和特异度均为100%。结论 RIARD-MF鉴定偶发分枝杆菌具有较高的特异度、灵敏度和准确性,且检测快速,有望成为一种新的偶发分枝杆菌临床分离菌株鉴定方法。     

三省市医疗卫生机构工作人员结核病患病及影响因素分析

目的 了解医疗卫生机构工作人员结核病患病情况及影响因素。 方法 于2010年10月至12月,采用《医务人员结核感染控制调查问卷》,按照目的抽样方法,对抽取的北京市、内蒙古自治区和上海市22家医疗卫生机构的5235名医疗卫生机构工作人员进行调查,收集相关信息并分析。 结果 参加调查的5235名医疗卫生机构工作人员肺结核的年均患病率为664.76/10万(174/26 175),涂阳肺结核的年均患病率191.02/10万(50/26 175)。经多元素分析,可认为男性（调整OR=1.9, 95%CI=1.3~2.7, P<0.05）、单位为结核病防治机构（调整OR=1.8, 95%CI=1.1~2.8,P<0.05）或专科医院（调整OR=2.5,95%CI=1.1~3.6,P<0.05）、科室为结核门诊（调整OR=2.3, 95%CI=1.3~4.1,P<0.05）、与结核病患者近距离接触时间15 h及以上（调整OR=2.2, 95%CI=1.1~4.3,P<0.05）、科室无结核病感染控制制度（调整OR=1.7, 95%CI=1.2~2.3,P<0.05）、吸烟（调整OR=2.8, 95%CI=1.2~2.9,P<0.05）可增加医疗卫生机构工作人员患结核病风险。 结论 所调查医疗卫生机构工作人员结核病患病率高,结核感染控制工作不到位,需加强落实结核病感染控制措施,减少结核分枝杆菌感染。     

结核分枝杆菌Rv3671c基因的克隆表达及免疫印迹检测

摘要：目的:构建结核分枝杆菌Rv3671c蛋白的重组质粒,在大肠埃希菌中表达并纯化重组蛋白Rv3671c,并评价结核分枝杆菌Rv3671c结构域多肽的免疫学特性。 方法：将编码结核分枝杆菌Rv3671c蛋白的基因克隆到pET-28a载体,并在大肠埃希菌中表达,镍亲和层析和离子层析法纯化重组Rv3671c蛋白,透析复性和Lowry法测定蛋白质浓度。对蛋白质悬液进行SDS-PAGE分析并进行免疫印迹检测。 结果：结核分枝杆菌Rv3671c蛋白在大肠埃希菌中成功表达,层析纯化获得纯度为95.0％的重组Rv3671c蛋白,免疫印迹检测显示重组表达蛋白与结核病患者混合血清具有良好亲和性。 结论：Rv3671c结构域多肽可作为新的结核病血清学检测方法的候选抗原肽组分。     

结核分枝杆菌CFP10和MPT48及TB8.4融合蛋白的表达与临床应用

目的 构建结核分枝杆菌CFP10、MPT48和TB8.4融合蛋白,评价其用于结核病血清学检测的价值.方法 选取2008年上海市肺科医院肺结核患者150例,非结核肺部疾病患者70例,健康体检者103名,采集血清标本共323份.构建结核分枝杆菌CFP10、MPT48和TB8.4融合表达载体.融合蛋白经免疫印迹分析后,采用酶联免疫吸附试验检测血清标本,运用Medcale11.5对结果进行统计学分析.结果 成功构建重组质粒pET21a-cfp10-mpt48-tb8.4,获得95％以上纯度的融合蛋白.免疫印迹法发现融合蛋白与血清抗体发生免疫反应.融合蛋白检测血清抗体敏感度56.7％(85/150),特异度90.8％(157/173),其中非结核病患者特异度为85.7％ (60/70),健康体检者特异度为94.2％(97/103).结论 CFP10-MPT48-TB8.4融合蛋白所具有的免疫反应性,有可能成为结核病血清学诊断的候选抗原.