创伤性脑组织匀浆对大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的影响

目的：骨髓间充质干细胞在脑组织匀浆诱导环境下可以转化为神经元样细胞，损伤脑组织匀浆的骨髓间充质干细胞培养液中，不仅有脑组织中提取的生长因子，而且有骨髓间充质干细胞分泌的多种生长因子，共同刺激骨髓间充质干细胞向神经元样细胞的分化。实验观察了创伤后24 h和正常脑组织匀浆诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的差别。 方法：实验于2007-03/08在河北医科大学解剖教研室细胞培养中心完成。①实验材料：体质量100~150 g的健康SD大鼠由河北医科大学实验动物中心提供，4~6周龄,清洁级。实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。②实验方法：取1只 SD大鼠，麻醉后分离股骨和胫骨，用培养基冲洗骨髓腔，离心弃上清液，加入含体积分数为0.10胎牛血清的L-DMEM培养基重悬，接种于培养瓶培养并传代，于倒置显微镜下观察细胞形态。采用Gruncr改良法制作中度脑损伤大鼠模型，取伤后 24 h和正常大鼠脑组织匀浆，对体外培养的第3代骨髓间充质干细胞进行诱导。③实验评估：在倒置显微镜下观察细胞形态学变化，并应用免疫细胞化学技术检测细胞内神经元特异性烯醇化酶的表达，比较创伤后和正常脑组织匀浆两组诱导率差别。 结果：骨髓间充质干细胞经创伤性脑组织匀浆培养基诱导24 h后，细胞的胞体变大，36 h后部分细胞分化，回缩成圆形或梭形，48 h后部分细胞可见两个或多个突起伸出，类似神经元。免疫细胞化学技术检测显示，创伤性脑组织匀浆培养基诱导组神经元特异性烯醇化酶阳性表达为（54.28±6.03）%，正常脑组织匀浆诱导分化率较前者低，神经元特异性烯醇化酶阳性表达为（32.76±3.25）%，细胞生长状态略差。 结论：脑组织匀浆可诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化，创伤性脑组织匀浆可明显促进其分化。     

边缘系统的构成及功能

边缘系统起自Broca(1 878年 )提出的边缘叶(Limbiclobes)概念。边缘叶是半球内侧面围绕胼胝体的皮质 ,即扣带回、海马结构、隔区、梨状叶[1] 。Papez (1 937年 )提出边缘叶参与情绪和情绪体验与情绪表达的特异环路 ,称Papez环路 :海马下托→海马→海马伞→穹窿→下丘脑乳头体→     

黄芪诱导骨髓间充质干细胞分化进程中细胞内钙离子浓度的动态变化

目的:从细胞内钙离子浓度这一视角切入,验证黄芪提取物可诱导骨髓间充质干细胞向神经干细胞分化的作用,并观察黄芪注射液在骨髓间充质干细胞分化进程中的诱导效应。方法:实验于2007-03/05在河北北方学院中心实验室完成。①实验方法:取1只Wistar大鼠,麻醉后分离股骨和胫骨,D-Hanks液冲洗骨髓腔,离心弃上清,加入含体积分数为0.15胎牛血清的L-DMEM培养基重悬,调整细胞浓度为1×109L-1接种,达80%～90%融合后消化传代。取第4代骨髓间充质干细胞,加入黄芪注射液至终浓度为100mg/L进行诱导分化。②实验评估:观察细胞形态学变化。以免疫细胞化学技术检测诱导5h后细胞巢蛋白的表达。使用流式细胞仪检测诱导前及诱导后10,30,60,120,300min钙离子探针fluo-3-AM的平均荧光强度。结果:①诱导后细胞形态变化:诱导5h后细胞体积增大,胞核固缩,核质比减小,有细长突起形成。②诱导后细胞内巢蛋白的表达:免疫细胞化学检测诱导后可见巢蛋白阳性细胞。③诱导不同时相细胞内钙离子浓度的变化:与诱导前比较,诱导10,30min后细胞内钙离子浓度均明显下降(P<0.01);诱导60min后有所上升,虽然仍低于诱导前浓度但差异无显著性意义(P>0.05);诱导120min后达最高点(P<0.01);诱导300min后胞内钙离子浓度下降至诱导前水平(P>0.05)。结论:黄芪注射液可诱导骨髓间充质干细胞向神经干细胞分化,且细胞内钙离子浓度伴随分化过程出现曲线波动,提示钙离子介导的信号通路可能参与细胞分化。     

动脉栓塞治疗兔肝VX2肿瘤疗效的超声观察

目的探讨二维超声、能量多普勒超声造影及免疫组化方法观察肝动脉三氧化二砷(As2O3)碘油栓塞对兔肝移植瘤生长、血管形成的影响。方法32只家兔肝内肿瘤种植后2周,随机分为4组(每组8只):生理盐水灌注组、As2O3灌注组、单纯碘油栓塞组、As2O3碘油栓塞组,As2O3的用量为2 mg/kg。治疗后1周,超声观察肿瘤大小,计算肿瘤生长率,能量多普勒超声造影监测肿瘤内血流,根据造影前后血流的丰富程度计算肿瘤内血管平均密度(MCVD)。病理切片观察肿瘤的坏死面积,计算坏死率。免疫组化方法测定肿瘤区的微血管密度(MVD)。结果经肝动脉治疗后1周,各栓塞治疗组肿瘤生长受到明显抑制,与非栓塞组间差异具有显著性意义(P<0.05)。As2O3碘油栓塞组肿瘤坏死率大于其他组(P<0.05)。造影前后超声显示栓塞组肿瘤区血流较未栓塞组明显减少(P<0.05),造影前栓塞组间血流显示差异无显著性意义(P>0.05),造影后As2O3碘油栓塞组残余肿瘤区血流低于单纯碘油栓塞组(P<0.05)。单纯碘油栓塞后,残余肿瘤区的MVD略有升高(23.4±4.7),与生理盐水对照组MVD(21.8±6.3)相比,差异无显著性意义(P>0.05)。As2O3碘油栓塞组残余瘤区的MVD减低,为15.1±3.2(P<0.05)。结论As2O3碘油栓塞可抑制肿瘤生长,增加肿瘤的坏死率,抑制肿瘤血管新生。能量多普勒超声造影有利于发现栓塞后残余肿瘤血流。     

骨髓间充质干细胞向神经元样细胞的分化及其在细胞移植中的应用

学术背景:骨髓间充质干细胞主要存在于骨髓基质中,具有横向分化潜能,在适当的条件下可以向3个胚层的细胞进行分化.目的:文章就骨髓间充质干细胞生物学特性、神经元诱导分化及其机制、细胞移植方面的最新进展进行综述.检索策略:应用计算机检索PubMed1999/2007年相关文章,检索词为"bone marrow mesenchymal stem cells",并限定文章语言种类为English.同时计算机检索中国期刊全文数据库1999/2007年相关文章,检索词为"骨髓间充质干细胞",并限定文章语言种类为中文.对资料进行初审,并查看每篇文章后的引文.纳入标准:文章所述内容与骨髓间充质干细胞的发展现状及神经元诱导分化及机制和移植研究相关.排除标准:重复研究或较陈旧的文献.文献评价:共收集到230篇相关文献,72篇文献符合纳入标准,排除的158篇文献为内容陈旧或重复文献.选取29篇文献进行分析,分别涉及骨髓间充质干细胞的分离培养和鉴定8篇、神经元细胞方向分化及其机制17篇、细胞移植治疗各种神经损伤的实验研究4篇.资料综合:由于尚未找到骨髓间充质干细胞特异性标记物,其在体内的细胞生物学和分子生物学作用机制仍不清楚,如何限定体内外诱导条件使其向所需细胞或组织定向分化以及移植时机、是否具有致瘤性等问题尚需深入研究.但近来在骨髓间充质干细胞向神经细胞方向分化的诱导方法和机制,以及骨髓间充质干细胞移植治疗神经损伤方面取得很多成果.结论:骨髓间充质干细胞具有易获得、易培养、低免疫原性等特性,已成为具有细胞治疗和基因治疗临床疾病潜在实用价值的有效载体.     

原代培养海马神经元Drebrin和Synaptophysin的表达与动态变化

目的:观察原代海马神经元不同时期树突棘的变化以及树突棘蛋白Drebrin和突触囊泡膜蛋白SYN的表达水平。方法:光镜观察原代培养7、14和20 d的海马神经元的形态改变。应用免疫荧光对Drebrin和SYN进行染色,观察树突棘形态和数量的改变。进一步应用Western Blot检测Drebrin和SYN蛋白的表达变化。结果:培养7 d的海马神经元,未见树突棘结构,SYN斑点状阳性产物较少。随着海马神经元培养时间的加长,突起数量逐渐增加,14 d和20 d的树突棘数量和SYN阳性产物均显著增加。Drebrin和SYN蛋白表达水平也随培养时间的加长而显著增加。结论:原代培养的海马神经元在14 d已有树突棘形成,20 d显示出成熟树突棘的形态和数量。Drebrin和SYN的蛋白表达水平反映了树突棘和突触的形成和功能状态。     

髋臼骨折不同内固定生物力学研究及临床应用

目的对三种内固定方法治疗髋臼骨折进行生物力学比较,为临床选择内固定方法提供可靠的实验依据。方法将12个半骨盆随机编号,分成A、B、C三组。A组给予后柱表面张力带钢丝内固定;B组给予经髋臼顶至前柱拉力螺丝钉内固定;C组给予后柱骨盆重建单钢板固定。在CSS-44020型电子万能试验机上进行该试验。结果将三组生物力学测定的最后结果进行统计学分析,将三组所测的最后结果(-x±s,KN):张力带0.436±0.067,螺钉0.406±0.068,钢板0.670±0.158,经SAS6.12(Stata4.0)进行统计学分析。结论实验结果和临床效果疗效分析相一致,证明骨盆骨折内固定生物力学测试实验具有较高的精确度,同时说明实验结果有参考的价值。     

兔VX2 肝癌模型的建立及超声观察

目的比较不同种植方法兔VX2肝癌模型的生长特点，评价琼脂糖针道内注射减少肿瘤异位种植的效果及超声观测肿瘤生长的价值。方法45只新西兰白兔随机分为3组，每组15只。第1组，将VX2瘤组织块悬液(约含10^7～10^8个瘤细胞／ml)超声引导下注入兔肝左叶，拔针时压迫针道3min；第2组，注射方法同1组，拔针前注入0．2ml加热的琼脂糖封堵针道；第3组，将VX2瘤组织块(1mm^3大小3块)，经剖腹途径埋植于兔肝左叶。比较不同植瘤方式肿瘤的生长特点，超声监测肿瘤生长并与病理检查进行相关性分析。结果①三组植瘤成功率分别为20．0％(3／15)、80．0％(12／15)和73．3％(11／15)，肿瘤的异位种植率分别为80．0％(12／15)、20．0％(3／15)和15．4％(2／13)，第1组与2、3组相比，差异有显著性意义；②肿瘤超声表现为等回声、低回声及略高回声，以等回声居多，周围可见声晕；彩色多普勒和能量多普勒均可检出血流信号；③肿瘤与肝实质无明显边界，可见多个核分裂相；④超声与病理下测定肿瘤的最大切面直径的相关系数r=0．946，P=0．000。结论超声引导下成功建立了兔VX2肝癌模型，瘤组织块悬液种植加琼脂糖封堵针道方式可有效减少肿瘤的异位种植。超声能有效监测肿瘤生长。     

大鼠松果体内生长抑素免疫反应阳性细胞和纤维

哺乳动物松果体除了分泌胺类激素(如褪黑素)外,在松果体内也发现了多种肽类物质,如生长抑素等[1-4].但是,关于生长抑素是存在于有突起的松果体细胞内,还是位于支配松果体的神经纤维内,以及数量的多少,不同研究者间的报道差异较大[5-6].因此,本研究对大鼠松果体进行生长抑素的免疫组织化学显色观察,以探讨松果体合成与分泌生长抑素的情况.     

As2O3-碘油混悬剂与乳剂缓释性能的实验研究

目的探讨三氧化二砷(Arsenictrioxide,As2O3)在40%的普通碘油和超液化碘油混悬剂和乳剂中的物理性状与缓释性能,以指导临床药物的应用。方法分别将40%的普通碘油(LIP)和超液化碘油(UFL)与As2O3用“泵法”制成几种不同的乳剂和混悬剂,肉眼与显微镜观察各种制剂的物理稳定性,并将各种制剂分别经透析带,在37℃±0.5℃恒温条件下,于磷酸盐缓冲液中进行透析,测定不同时间释放到透析液中As2O3的浓度,计算释放率。结果40%的普通碘油和超液化碘油As2O3混悬剂静置后出现As2O3的分离沉淀,超液化碘油As2O3混悬剂的分离速度更快;2种As2O3碘油普通乳剂静置后均立即出现油水分层,加乳化剂的乳剂稳定性好;As2O3在普通碘油和超液化碘油乳剂中,具有缓释性,加乳化剂的乳剂药物缓释效应更好,而在其混悬剂中释放较快。结论40%的普通碘油和超液化碘油均可作为肝癌等的化疗栓塞剂和As2O3的载体,使用其乳剂能更好地发挥其缓释效应,增加药物剂量而不至于增加其副作用。