APRIL及其受体在结直肠癌变过程中表达水平的改变

目的探讨APRIL及其受体表达水平在结直肠癌变过程中的作用.方法采用实时荧光定量PCR(RFQ-PCR) 技术检测大肠癌发生各阶段组织中APRIL及其受体mRNA水平,并以靶基因和内参β2-M mRNA含量的比值作为评价靶基因表达水平的指标.结果 APRIL在中、重度异型增生肠组织及原位癌、浸润癌组织中表达水平显著高于正常肠黏膜(P＜0.05),APRIL在癌组织中表达水平显著高于中、重度异型增生肠组织(P<0.05),而其受体BCMA和TACI在结直肠癌发生各阶段的表达水平无统计学意义(P>0.05).结论 APRIL在结直肠癌的病变演进过程中呈现累积和渐进趋势,可能在结直肠癌发生、发展过程中起了重要作用,有可能成为结直肠癌早期诊断和抗癌治疗的靶分子.     

两探针荧光定量检测HCV RNA的应用和探析

目的 评价两探针荧光定量聚合酶链反应检测丙型肝炎病毒在临床中的应用价值.方法 对89例抗HCV抗体阳性和220例阴性样本,用荧光定量两探针法和两种商品试剂荧光定量方法进行检测,并对检测结果进行比较分析.结果 荧光定量两探针法阳性率分别为91.01%(81例)和2.27%(5例).两种商品试剂荧光定量方法阳性率分别为82.02%(73例)和0.45%(1例);79.78%(71例)和1.82%(4例).结论 荧光定量两探针法提高了HCV RNA检测的灵敏度和特异性.     

G蛋白偶联受体激酶4基因变异与原发性高血压的相关性

目的探讨G蛋白偶联受体激酶4基因变异与原发性高血压的关联。方法应用等位基因特异性PCR结合实时荧光分析的方法,对中国江苏南通地区102例健康人,93例原发性高血压患者的CRK 4多态位点A 486V进行基因分型,并进行关联分析。结果V等位基因频率原发性高血压组(56.9%)显著高于正常血压对照组(44.1%),差别有统计学意义(P<0.05),高血压组中V/V基因型频率(32.4%)明显高于对照组(18.3%,P<0.05)。结论在中国江苏南通地区汉族人中,GRK 4多态位点A 486V可能与原发性高血压的发病有关,V/V基因型是遗传易患因子。     

增殖诱导配体基因的克隆、表达及生物学活性分析

目的克隆人增殖诱导配体(APRIL)基因,分析APRIL蛋白的生物学活性。方法采用RT2PCR技术,从肿瘤细胞株总RNA中克隆了APRIL全长编码基因;构建了APRIL胞外可溶性片段(sAPRIL)的原核表达载体,对表达的蛋白初步纯化后进行生物学活性检测;构建了APRIL编码区的真核表达载体,经脂质体转染转化细胞株,流式细胞仪和MTT法分析表达产物对细胞周期及细胞生长的影响。结果sAPRIL原核表达载体经IPTG诱导后,发现在相对分子质量(Mr)20×103处有一明显的表达条带,纯化蛋白进行初步活性测定显示其可以剂量依赖方式促进细胞的生长;细胞转染实验证实APRIL能促进多种转化细胞的增殖,但对细胞周期无明显影响。结论成功克隆了人APRIL基因,并将其可溶性胞外区片段在大肠杆菌进行了表达;构建了APRIL真核表达载体,初步分析了APRIL的生物学活性,提示APRIL在肿瘤细胞增殖过程中可能起了重要作用,为进一步进行APRIL基因的功能研究及其临床应用奠定了实验基础。     

双探针实时荧光定量检测HCV RNA的研究

目的建立双探针荧光定量HCV RNA检测方法,探讨解决HCV RNA定量灵敏度和特异性问题。方法对89例抗HCV抗体阳性和220例阴性样本用双探针荧光定量法和两种商品荧光定量试剂方法进行检测。结果双探针荧光定量法阳性率分别为91.0%(81例)和2.72%(6例)。两种商品荧光定量试剂方法阳性率分别为82.0%(73例)和0.9%(2例);79.7%(71例)和2.27%(5例)。结论双探针荧光定量提高了HCV RNA检测的灵敏度和特异性。     

丙型肝炎病毒核酸的荧光定量检测及其临床意义

目的:建立实时荧光定量RT-PCR(RFQ-RT-PCR)检测HCV-RNA含量方法的临床应用价值。方法:在HCV基因组5’非编码区(5’-UTR)设计特异性引物和一对杂交探针,PCR扩增目的片段并构建相应基因片段载体,体外转录RNA作为标准品,根据其建立的标准曲线对血清HCV RNA进行定量,同时用传统的巢式RT-PCR进行定性分析。结果:138例样本在HCV抗体阳性患者中,肝硬化和肝癌患者的HCV RNA含量显著高于慢性肝炎患者(P<0.05),而且HCV RNA含量与ALT水平呈正相关(r=0.91)。结论:RFQ-RT-PCR检测HCV-RNA含量比ELISA法具有更好的灵敏度和特异性,能准确反映HCV在体内的复制情况。     

血清同型半胱氨酸水平与脑梗死关系的探讨

目的:实验研究同型半胱氨酸水平和脑梗死的关系。方法:用HITACHI7600-020生化分析仪器对113例脑梗死者和50例对照者血液中Hcy、LDL、HDL﹑LPa﹑TG﹑TC等指标进行检测。结果:脑梗死组的Hcy、TG、Lpa水平明显高于对照组(P<0.01),Hcy水平与发生脑梗死的危险性有关。结论:同型半胱氨酸是脑梗死重要的危险因素。     

荧光定量两探针法检测HCV RNA的研究

目的 建立荧光定量两探针检测HCV RNA方法.方法 对105例抗HCV抗体阳性和220例阴性样本,用荧光定量两探针法和2种商品荧光定量试剂进行检测,并对检测结果进行比较.结果 荧光定量两探针法阳性率分别为89.5%（94/105）和2.3%（5/220）.两种商品荧光定量试剂阳性率分别为71.4%（75/105）和0.45%（1/220）;69.5%（73/105）和1.8%（4/220）.结论 荧光定量两探针法检测HCV RNA有较高的敏感性和特异性.     

血管紧张素原及载脂蛋白E基因多态性与冠心病关系的研究

目的：研究血管紧张素原(AGT)基因M235T多态性及载脂蛋白E(ApoE)基因多态性与中国人群冠心病的关联。方法:分别用PCR—RFLP技术检测了129例冠心病患者及90例健康人AGT及ApoE基因型。结果：(1)冠心病组ε3/4基因型及ε4等位基因频率显著高于健康对照组，ε3/3基因型及ε3等位基因频率则显著低于对照组;(2)AGT各基因型及等位基因频率在两组间无显著差异;(3)携带ε4等位基因的不同AGT基因型在两组间也无显著差异。结论:(1)ε4等位基因是冠心病的遗传易患因子；(2)AGT基因与冠心病发病无显著关联，与ApoE基因间也无协同作用。     

GRK4基因多态A486V与原发性高血压关联研究

我们采用等位基因特异性PCR结合实时荧光分析的方法,对中国江苏南通地区326例健康人和342例高血压患者的GRK4基因多态位点A486V进行基因分型,探讨GRK4基因多态与原发性高血压的相关性.