网织红细胞质控物的制备和评价

<正>目前网织红细胞计数常采用手工操作,影响因素较多,极需对网织红细胞计数进行质量控制。由于网织红细胞计数质控物市场难以购买,我们采用抗凝HBsAg阴性正常人静脉血,煌焦油蓝ACD染液染色,福尔马林固定的质控物,在干燥器内保存法。并对其稳定性,均一性等问题进行了实验和探讨,现报道如下。     

DNA芯片检测乙型肝炎病毒基因多态性

目的　建立DNA芯片检测乙型肝炎病毒 (hepatitisBvirus,HBV)基因多态性的研究方法并对实验条件进行优化。方法　设计多条寡核苷酸探针 ,在硅烷化芯片的特定位置上 ,用点样仪将探针固定 ,并与PCR扩增的HBV基因相应区段杂交 ,杂交结果影印至硝酸纤维素膜 ,经BCIP NBT避光显色 ,用放大镜观察杂交信号呈暗紫色圆点 ,根据特定位置上杂交信号的有无和与之相应的探针序列来判定基因突变的类型。结果　通过 1次杂交反应可检测HBV前C C区 (nt 1896 1814 )、BCP区 (nt1762 1764)和P区 (nt 52 8 552 )等多个位点的变异 ,与测序分析结果完全一致 ,具有较好的检测灵敏度和重复性。结论　DNA芯片检测HBV基因常见突变位点多态性 ,操作简便易行 ,技术要求不高 ,具有临床推广应用价值 ,而且可以方便地通过向寡核苷酸探针阵列中添加相应探针 ,扩大基因芯片的检测应用范围 ,为临床检测提供了新的方法     

双探针实时荧光定量法检测HCV RNA的临床意义

目的建立双探针荧光定量HCV RNA检测方法,探讨解决HCV RNA定量灵敏度和特异性问题。方法对89例抗HCV抗体阳性和220例阴性样本用双探针荧光定量法和两种商品荧光定量试剂方法进行检测。结果双探针荧光定量法阳性率分别为91.0%（81例）和2.72%（6例）。两种商品荧光定量试剂方法阳性率分别为82.0%（73例）和0.9%（2例）;79.7%（71例）和2.27%（5例）。结论双探针荧光定量提高了HCV RNA检测的灵敏度和特异性。     

结直肠癌细胞株增殖诱导配体基因的克隆、表达及生物学活性分析

目的克隆结直肠癌细胞株增殖诱导配体(APRIL)基因,并测定APRIL胞外可溶性片段(sAPRIL)重组蛋白的生物学活性。方法采用RT-PCR技术,从肿瘤细胞株总RNA扩增APRIL全长及其胞外可溶性片段(sAPRIL)编码基因,PCR产物直接克隆于pGEM-T载体。将sAPRIL亚克隆到原核表达载体pET101/D-TOPOR○中,阳性克隆经IPTG诱导,SDS-PAGE分析sAPRIL的表达,对表达的蛋白初步纯化后进行生物学活性检测。结果 RT-PCR扩增出一个753bpDNA片段,酶切和测序证实该片段为编码人sAPRIL的全长cDNA,将sAPRIL克隆到表达载体经诱导后发现在20kDa处多显示出一条条带,纯化蛋白进行初步活性测定显示其可以剂量依赖方式促进细胞的生长。结论成功克隆了APRIL基因,并将其可溶性胞外区片段在大肠杆菌进行了表达。纯化的重组蛋白可促进细胞生长,为进一步进行April基因的功能研究及其开发和临床应用奠定了基础。     

实时荧光定量酶联免疫吸附试验检测HBV-DNA的临床意义

目的:探讨实时荧光定量PCR检测HBV- DNA在乙型肝炎的诊断、治疗及判断病情、预防等方面的临床应用价值。方法:运用实时荧光定量PCR和EL ISA法同时检测了乙型肝炎180例和正常献血员5 6例血清中HBV - DNA的含量及其免疫标志物,并对结果进行对比分析。结果:乙肝大三阳95例HBV - DNA阳性达95例(10 0 .0 0 % ) ,显著高于其它各组(P<0 .0 5 ) ,HBV- DNA含量为4 .8×10 7copies·ml- 1 ;小三阳患者HBV- DNA阳性率低于大三阳组(P<0 .0 5 ) ,但平均病毒含量与大三阳组差异无显著性(P>0 .0 5 ) ,高达2 .1×10 7copies·ml- 1 ;单独HBs Ag阳性和单独HBs Ab阳性组HBV- DNA阳性率分别为5 3.85 %、33.33% ,平均病毒含量分别为5 .6×10 5copies·ml- 1、3.8×10 4 copies·ml- 1 ;献血员5 6例血清HBV- DNA阳性3例,其病毒含量低于其它组。结论:实时荧光定量PCR检测HBV- DNA含量比EL ISA法具有更好的灵敏度和特异性,能准确反映HBV在体内的复制情况,这对临床上抗病毒药物的选择和判断疾病的预后意义重大。     

线粒体DNA3161-3610片断基因突变与糖尿病的关系

104例糖尿病（DM）患者和50名正常无DM家族史对照者的基因测序研究显示，线粒体DNA3316G→A伴随3290 T→C、3421G→A点突变；3497C→T和3571C→T同时基因突变可能与DM发生有关。     

线粒体基因异常糖尿病临床预报的研究

目的建立糖尿病临床预报可能。方法对103例糖尿病(DM)患者和50例正常无糖尿病家族史对照者的线粒体DNA(mtDNA)基因突变情况进行研究。结果糖尿病组有20例分别出现1～3处点突变,突变点有13处。结论通过基因突变特点和临床资料,用聚合酶链反应扩增3161～3610基因片段直接测序,为糖尿病临床预报提供了可能。     

丙氨酸氨基转移酶快速测定法

目的 建立双波长微板法快速检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)的方法。方法 采用酶标仪及两种ALT检测试剂，检测无偿献血者的ALT含量，并与赖氏法进行比较。结果 快速法测定的阳性率高于赖氏法，且可消除轻度脂血的影响。结论 双波长微板法快速测定ALT可用于无偿献血的初筛检验中，可大大减少初复检ALT阳性而造成的浪费。     

血红蛋白AHD－575测定法

本文建立了ＡＨＤ－５７５测定血红蛋白法，标准用高纯度氯化血红素或摩尔吸光系数标化的二级血样品标准。与ＨＩＣＮ法、Ｃｏｕｌｔｅｒ血细胞计数分析仪法比较Ｐ＜０．０５，结果准确可靠。