高效液相色谱法测定土壤和河底泥中的15种邻苯二甲酸酯

目的 建立土壤和底泥中15种邻苯二甲酸酯的高效液相色谱测定方法,并用于成都市土壤和河底泥中邻苯二甲酸酯(PAEs)的污染调查。方法 样品经二氯甲烷提取、离心后,取上清液氮吹至干,乙腈复溶后,进样测定。以Gemini C18（250 mm×4.6 mm,5 μm）为分离柱,乙腈-水为流动相梯度洗脱。结果 DBZP、DIBP、DEHP和DNP 的线性范围为0.01～10.0 mg/L, 其他PAEs 的线性范围为0.005～10.0 mg/L,相关系数均大于0.9998。土壤的检出限（LOD）和定量限（LOQ）分别为1.22～5.56 μg/kg和4.08～18.5 μg/kg,加标回收率和相对标准偏差（RSD）分别为76.4%～111%和1.28%～16.2%;底泥的检出限和定量限分别为0.987～4.35 μg/kg和3.29～14.5 μg/kg,加标回收率和相对标准偏差分别为80.0%～116%和2.11%～11.1%。结论 建立的方法具有简便、快速、灵敏、溶剂用量少等优点,适用于土壤和底泥中15种PAEs的同时测定。     

自体脂肪干细胞修复猪膝关节负重区软骨缺损的初步研究

目的初步探索自体脂肪干细胞（ADSCs）修复猪膝关节负重区软骨缺损的可行性。方法从猪颈背部脂肪组织中获取ADSCs，体外培养至第2代，微团块培养法对其进行成软骨诱导2周，分别使用免疫荧光和逆转录聚合酶链反应的方法检测软骨分化表型。以5×10^7／mL的浓度将第2代ADSCs接种于聚乙醇酸／聚乳酸材料，体外成软骨诱导培养2周。在猪膝关节软骨负重区制造两个直径8mm的全层软骨缺损，实验组植入细胞材料复合物，对照组植入单纯支架材料。术后3个月取材，行大体观察、组织学及免疫组织化学检测。结果成软骨诱导2周的微团块有软骨特异性的CollagenⅡ、Aggrecan及Sox-9的表达；术后3个月取材，发现实验组缺损区被软骨组织样填充修复。HE染色显示有典型的透明软骨结构，但细胞密度较正常软骨组织高。甲苯胺蓝染色显示修复组织有葡糖氨基聚糖的表达。对照组关节软骨缺损则未能修复，表面充填纤维组织。结论自体ADSCs可以作为软骨组织工程种子细胞修复猪膝关节负重区软骨缺损。     

口腔黏膜细胞与膀胱黏膜下脱细胞基质复合物构建组织工程化尿道的实验研究

目的 探讨以兔口腔黏膜细胞与同种异体膀胱黏膜下脱细胞基质(BAMG)复合物构建组织工程化尿道的可行性.方法 新西兰雄性兔24只,距尿道外口2.0 cm剥离尿道黏膜(2.0 cm×0.8 cm)后,随机分实验组和对照组,每组12只.切取实验组兔口腔黏膜组织分离细胞,在有灭活的3T3细胞培养皿上进行培养扩增,将培养获得的第2代口腔黏膜细胞种植于BAMG(2.2 cm×1.0 cm)上,植入实验组兔尿道缺损区域;对照组单纯采用无细胞植入的BAMG修复尿道.分别于术后1、2、6个月观察动物排尿情况,行尿道造影,8 F尿管插管确定有无狭窄;随后处死实验兔,取修复段尿道黏膜组织行组织学检查.结果 细胞培养获得的口腔黏膜细胞形态均一,生长良好;组织形态学、扫描电镜观察见口腔黏膜细胞与BAMG具有良好的相容性.实验组兔术后1、2、6个月伤口愈合良好、排尿通畅,无尿瘘发生,组织学和尿道造影检查显示带细胞修复的尿道形态完整、清晰宽敞,无狭窄发生;术后6个月植入的口腔黏膜细胞仍然存在,并明显扩增.对照组兔则出现排尿困难、尿道狭窄,光镜下发现黏膜及黏膜下存在严重的炎症反应.结论 兔口腔黏膜细胞与同种异体BAMG复合后,可成功用于尿道缺损的修复,构建组织工程化尿道.     

兔脂肪干细胞复合PLGA支架的生物相容性研究

背景种子细胞和支架材料是角膜组织工程研究的主要课题。脂肪干细胞具有来源广泛、增生和分化能力强的特点而成为目前组织工程种子细胞的研究热点,聚羟基乙醇（PLGA）作为高分子可降解支架材料已成功用于构建多种组织器官。目的探讨兔脂肪干细胞的生物学特性及其复合多孔支架材料聚羟基乙醇（PLGA）的生物相容性,为进一步构建脂肪干细胞组织工程化角膜基质提供实验基础。方法取雌性新西兰大白兔颈背部脂肪组织,采用消化法分离培养兔脂肪细胞,传至第4代。将传代细胞分别以3×10^4／cm^2、3×10^4／cm^2、3×10^6／cm^2的密度接种于6孔板中,分别用成骨诱导培养液、成脂诱导培养液及成软骨诱导液进行诱导培养,并分别以质量分数1％茜素红-Tris-盐酸溶液、质量分数0．6％油红染液和免疫荧光法鉴定培养细胞的多向分化能力。将第4代细胞用稀释的DiO荧光染液重悬的脂肪干细胞按1×10^7／ml的密度接种于自制的多孔PLGA支架形成细胞-生物材料复合物,Hoechst法定量检测细胞在支架上的生长情况,并分别于接种后第1、3、7天对细胞-生物材料复合物行共焦显微镜和扫描电子显微镜检测,观察细胞在该支架上的黏附生长和基质分泌情况,评价PLGA的生物相容性。结果原代培养的脂肪细胞7～8d后可达80％～90％融合,呈成纤维细胞样外观。传代第4代的细胞成骨诱导2周后茜素红染色显示矿化结节及周围细胞着深红色;成脂诱导2周后油红0染色显示细胞质内布满红色脂滴颗粒;微团培养成软骨诱导2周后,免疫荧光染色结果显示Ⅱ型胶原表达阳性。细胞接种至PLGA支架材料第7天增生达到高峰期,扫描电子显微镜和共焦显微镜检测显示细胞在支架上贴附生长良好,能够在支架表面及孔隙内壁得到充分伸展和生长,细胞外基质分泌旺盛。结论培养的兔脂肪细胞具有脂肪干细胞的多向分化功能,与多孔PLGA支架复合具有良好的生物相容性,可作为构建组织工程化角膜基质的种子细胞和支架材料。     

高效液相色谱法同时测定乳制品中的泛酸和生物素

目的 建立乳制品中泛酸和生物素的高效液相色谱同时测定方法。方法 样品经硫酸钠沉淀蛋白后,采用C18柱分离,以0.005 mol/L己烷磺酸钠（用磷酸pH值 2.3）:乙腈为流动相,流速为1.0 ml/min,柱温为40℃,检测波长为200 nm。以保留时间定性,峰面积定量。结果 所测2种物质的线性范围为0.10～2.0 μg/ml;相关系数均大于0.999;泛酸检出限为0.082 μg/kg（牛奶）和0.75 μg/kg（奶粉）,生物素检出限为0.047 μg/kg（牛奶）和0.43 μg/kg（奶粉）;泛酸测定限为0.27 mg/kg（牛奶）和2.5 mg/kg（奶粉）,生物素测定限为0.16 mg/kg（牛奶）和1.4 mg/kg（奶粉）。方法的日内精密度为1.86%～3.79%,日间精密度为2.01%～3.28%。回收率范围为70.9%～106%（奶粉）和72.8%～108%（牛奶）。结论 建立的方法具有简便、快速、重现性好等特点,可用于牛奶和奶粉中泛酸和生物素的同时快速测定。     

尿源性干细胞外泌体对高糖诱导内皮细胞损伤的保护作用

 目的 探究尿源性干细胞外泌体（urine-derived stem cell exosomes,USC-Exo）对高浓度葡萄糖诱导的人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）损伤模型的保护作用。方法 采用酶灌注法、超速离心法获取HUVEC和USC-Exo。以高糖诱导的HUVEC损伤模型为研究对象,设立空白对照组、造模组和给药实验组。采用CCK-8测定各组细胞增殖活力,挑选最适合给药浓度;观察药物影响下各组细胞在划痕迁移、成管实验以及低密度脂蛋白（low-density lipoprotein,LDL）摄取中的表现差异;采用qRT-PCR方法检测B细胞淋巴瘤因子-2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein,BAX）、超氧化物歧化酶2（superoxide dismutase-2,SOD2）等基因的表达。结果 本实验获取了高质量的HUVEC以及USC-Exo;在高糖影响下内皮细胞的增殖活力、迁移成管能力、摄取LDL的功能相比对照组均有所下降（P<0.05）,而USC-Exo则可以实现逆转,优化内皮细胞功能,逆转凋亡基因的表达,增强抗氧化能力（P<0.05）。结论 USC-Exo可在一定程度上保护内皮细胞,缓解高糖造成的细胞损伤。     

组织工程角膜基质的构建

学术背景:角膜供体来源的匮乏及高危角膜移植术后的高排斥率限制了角膜移植的临床应用。构建具有良好生物学活性且能满足一定生理功能要求的组织工程角膜是近年来眼科的研究热点,而角膜基质组织的构建则是利用组织工程技术构建角膜的主要任务、难点和关键所在。目的:总结构建组织工程化角膜基质种子细胞及支架材料的研究进展。检索策略:应用计算机检索Pubmed数据库1980-01/2007-06的相关文献,检索词"cornealstroma;tissueengineering",限定文章语言种类为English。同时计算机检索中国期刊全文数据库、万方数据库1997-01/2007-06期间的相关文章,检索词"组织工程;角膜基质",限定文章语言种类为中文。共检索到59篇文献,对资料进行初审,纳入标准:①与构建组织工程角膜基质密切相关。②同一领域选择近期发表或在权威杂志上发表的文章。排除标准:重复性研究。文献评价:文献的来源主要是构建组织工程角膜基质的实验。所选用的30篇文献中,5篇为综述,其余均为临床或基础实验研究。资料综合:①国内角膜盲患者众多,临床上对供体角膜的需求越发迫切。构建具有良好生物学活性且能满足一定生理功能要求的组织工程角膜具有重大的探索价值与临床实际应用意义。②自体或异体角膜基质细胞不仅是最早采用的而且是应用最为广泛的种子细胞。皮肤成纤维细胞应用于构建组织工程角膜基质的文献已见诸于报道。③作为支架材料,胶原、明胶及壳聚糖均有报道用于构建组织工程角膜基质。研究表明人工合成可降解高分子材料聚羟基乙酸材料与角膜基质细胞有较好的亲和力。④随着干细胞研究、材料科学及生物工程学等多学科的发展,组织工程角膜基质的构建越来越凸现其优越性,但它仍然面临许多挑战,比如:如何定向诱导多能干细胞分化为角膜基质细胞;角膜基质支架材料如何改良以保证良好的透明性;支架材料的生物学特性及理化性质需进一步研究。结论:组织工程角膜基质是构建组织工程角膜的重要基础,也预示着临床应用组织工程技术治疗角膜盲时代的到来。它将为解决异体角膜来源匮乏、高危角膜移植成功率低等临床问题提供新的思路。     

猪脂肪干细胞体外多向分化潜能的实验研究

目的探讨猪脂肪干细胞(Adipose-Derived Stem Cells,ADSCs)在体外是否具有多向分化潜能。方法从猪项背部皮下脂肪组织中获取ADSCs,经过体外培养扩增至第2代分别进行成软骨细胞、成骨细胞和成脂肪细胞诱导分化,通过免疫荧光和RT-PCR对其相关表型进行检测。结果猪ADSCs在体外成软骨诱导分化2周后有特异软骨基质Ⅱ型胶原和Aggrecan表达,RT-PCR检测显示有Ⅱ型胶原、Aggrecan和Sox-9mRNA的表达;体外成骨诱导分化2周后有与成骨相关的OPN、OCN和ONN表达;体外成脂肪诱导2周后,经油红染色显示细胞内有脂滴形成。结论猪ADSCs在体外具有向成软骨细胞、成骨细胞和成脂肪细胞分化的潜能。     

兔舌黏膜细胞的体外培养及生物学特性研究

目的 探讨舌黏膜细胞的培养方法,为进一步以舌黏膜细胞作为种子细胞构建组织工程化角膜上皮提供实验依据.方法 体外切取舌侧面和底面黏膜组织,经0.25%Dispase分离上皮层后,再经0.05%的胰酶分离为单个细胞,接种在无血清角质细胞培养液(KSFM)中,进行体外培养,并对其形态学以及生长曲线、传代特点、各代生长特点进行观察.同时,对体外培养获得的舌黏膜细胞进行广谱角蛋白免疫荧光鉴定.结果 舌黏膜细胞能够在无血清角质细胞培养液中稳定生长,呈现典型的"铺路石"状,细胞形态单一,可传至3～4代.细胞免疫荧光显示,体外培养获得的舌黏膜细胞AE1/AE3免疫荧光染色阳性.结论 应用无血清角质细胞培养液,可在短期内获得大量具有增殖能力的舌黏膜细胞,为进一步将其作为种子细胞构建组织工程化角膜上皮奠定了良好的基础.     

脂肪干细胞向血管平滑肌细胞诱导的实验研究

目的 研究人脂肪干细胞(adipose derived stem cells,ADSCs)在体外单层培养条件下诱导为血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)的可行性.方法 应用酶消化法消化人脂肪组织获得ADSCs,基础培养液培养传代,取第1代细胞用于诱导分化实验.实验分两组,ADSCs以含5 ng/mL TGF-a1及50 ng/mL PDGF-BB的M-199诱导液联合诱导,作为诱导组;以含10?S的M-199培养液培养ADSCs作为未诱导组.镜下观察细胞生长情况免疫荧光和RT-PCR方法 检测平滑肌细胞特异标记的表达情况;流式细胞仪检测诱导阳性率.结果 诱导组细胞形态形成平滑肌细胞特有的"峰-谷"生长模式,未诱导组细胞形态未发生改变,与原代ADSCs相似呈成纤维细胞样生长.诱导培养14 d,诱导组细胞体外扩增能力较未诱导组显著降低(P＜0.01).免疫荧光检测诱导组表达平滑肌特异标记a平滑肌肌动蛋白(a-smooth muscle actin,a-SMA)、平滑肌肌球蛋白重链(smooth muscle-myosin heavy chain,SMMHC)和Calponin,未诱导组无表达.细胞诱导前a-SMA、SM-MHC及Calponin阳性表达率分别为3.26%±1.31%、3.55%±1.60%、4.02%±1.81%;诱导组阳性表达率分别为48.13%±8.31%、45.33%±10.68%、39.13%±9.42%;诱导前、后差异有统计学意义(P＜0.01).RT-PCR检测诱导组表达平滑肌特异标记a-SMA、SM-MHC、Calponin和SM-22a,未诱导组无表达.结论 脂肪干细胞经体外培养及诱导后,呈明显的VSMCs特性,有可能成为血管组织工程新的种子细胞来源.