高渗透压环境下OREBP对AQP5的调控

目的:探讨高渗透压环境下OREBP对AQP5的调控作用.方法:利用qRT-PCR和Western Blot,研究高渗透压刺激下,MLE-15细胞OREBP和AQP5的mRNA和蛋白水平的变化规律;运用RNAi技术抑制OREBP表达后,观察AQP5 mRNA及蛋白水平随高渗刺激的变化;探讨AQP5基因上游不同区域对Luciferase表达的启动及高渗环境下表达增强作用,用RNAi技术研究这种增强表达作用对OREBP的依赖性.结果:高渗透压刺激下,OREBP和AQP5的mRNA水平在12, 18 h达到峰值,两者蛋白水平也分别在12, 18 h达到峰值,RNAi抑制OREBP的表达后,AQP5对高渗的反应性消失.Luciferase实验表明在-593至-144区域内存在启动子,-2563至-2055区域存在ORE.结论:高渗透压环境下,OREBP通过与AQP5基因上游的ORE结合,调控AQP5的表达.     

轻型链球菌缓解铜绿假单胞菌感染小鼠模型的 炎症反应及机制的初步探讨

目的：探讨轻型链球菌（Streptococcus mitis,S.mitis）在铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa,PAO1）感染小鼠模型中缓解炎症作用及可能机制。方法：将野生型和TLR2基因缺陷型小鼠随机分为4组,每组20只,通过气管内注入铜绿假单胞菌（PAO1组）、轻型链球菌（S.mitis组）、铜绿假单胞菌+轻型链球菌混合菌液（PAO1+S.mitis组）和生理盐水（PBS组）建立模型,HE染色观察肺组织病理学改变,ELISA检测肺泡灌洗液中炎症因子白细胞介素-6（interleukin-6,IL-6）和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）的表达,计数肺泡灌洗液细胞总数及细胞分类。结果：野生型小鼠中肺组织病理学显示：PAO1组肺泡间隙增宽明显,有大量炎症细胞浸润,PAO1+S.mitis组炎症较PAO1组稍轻;S.mitis组和PBS组肺组织结构正常,基本未见炎症细胞浸润;肺泡灌洗液中PAO1组IL-6和TNF-α的含量高于PAO1+S.mitis组（P=0.032,P=0.007）,S.mitis组和PBS组仅有少量表达;PAO1组BALF细胞总数及中性粒细胞计数均较PAO1+S.mitis组、S.mitis组和PBS组增加（均P＜0.05）。TLR2基因缺陷型小鼠中肺组织病理学显示：PAO1组和PAO1+S.mitis组均有肺泡间隙增宽,炎症细胞浸润,肺泡灌洗液中PAO1组和PAO1+S.mitis组IL-6和TNF-α的表达没有统计学差异（P=1.000,P=1.000）,S.mitis组和PBS组仅有少量表达;PAO1组和PAO1+S.mi－tis组支气管肺泡灌洗液细胞总数及中性粒细胞计数没有统计学差异（P=1.000,P=1.000）。结论：轻型链球菌可缓解铜绿假单胞菌炎症反应与TLR2有关。     

将科研思维和实践引入研究生蛋白质组学教学的尝试

为了将理论知识内容与实际研究工作相结合,授课教师将科研思维和实践引入研究生的蛋白质组学课程教学中。如,为让学生真正了解2-DE蛋白分离技术,在讲授经典的2-DE技术基础上,结合实例用图示指出经典2-DE技术存在的问题和局限,再用改进的2-DE蛋白分离图谱,剖析如何在实际工作中加以应用;为提高研究生的科研思维能力,以肿瘤为实例,要求各专业的研究生查阅相关文献、提出科学问题、设计课题、寻求答案。通过这些教学尝试,探索能力型医学人才培养路径。     

在检验专业综合课程实行课程负责人制的探索与实践*

为适应检验医学教育的改革与发展,重庆医科大学检验医学院在前期课程建设和改革的基础上,针对检验专业教学组织过程中存在的问题,对检验专业综合课程的教学实行专职教师课程负责人制。实施3年来,该课程的教学组织更加有序,学生的学习兴趣增加,师生交流增多,教学效果明显。专职教师课程负责人制值得进一步完善和推广。     

用绿色荧光蛋白报告肺炎链球菌的体内转化

目的: 了解肺炎链球菌(S.pn)在宿主体内转化发生的情况,以便于深入研究体内细菌转化对其毒力的影响. 方法: 通过基因重组和转化构建绿色荧光报告细菌转化发生的S.pn菌株22G;通过酶切、转化实验、RT-PCR、测序等多种方法鉴定菌株构建成功;通过荧光显微镜观察荧光. 结果: 荧光蛋白可以报告细菌转化的发生;体内实验表明,细菌在宿主体内能够发生转化. 结论: 利用荧光报告细菌转化发生可以用于观察细菌体内转化发生的研究.     

盐酸小檗碱对表皮葡萄球菌生物被膜形成及相关基因表达的抑制作用

目的 通过检测盐酸小檗碱单用或联合抗菌药物对表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis,Se.)形成生物被膜及所需基因的抑制作用.方法 体外构建表皮葡萄球菌生物被膜模型,盐酸小檗碱单用或联合万古霉素、环丙沙星、红霉素分别干预生物被膜的形成,采用CRA平板法检测药物对Se.生物被膜的抑制作用,荧光定量RT-PCR方法检测约物作用前后表皮葡萄球菌icaA基因和agr基因的表达变化.结粜盐酸小檗碱对icaA基因和agr基因的影响作用不及万古霉素、环丙沙星、红霉素;当不同浓度的盐酸小檗碱分别与万古霉素、环丙沙星、红霉素联用时,随着盐酸小檗碱的浓度增加,联合用药对icaA基因和agr基因的抑制作用逐渐减弱.结论 中药单体(盐酸小檗碱)对Se.形成生物被膜及所需关键基因的表达有一定的抑制作用,但抑制作用不及抗生索(万古霉素、环丙沙星、红霉素),并且不能与抗生索(万占霉素、环丙沙星、红霉素)联合用药,它们之间存在拮扰作用.     

clpP基因缺陷对肺炎链球菌毒力表达降低的研究

目的 探索clpP基因缺陷对肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)毒力的影响.方法 用长臂同源多聚酶链式反应(LFH-PCR)方法 失活clpP基因,用PCR、Western blot鉴定缺陷菌株,通过RT-PCR分析白溶素(major autoly-sin A,lytA)、表面黏附A(pneumococcal surface adhesion A,psaA)、溶血素(pneumolysin,ply)和胆碱结合蛋白A(cholinebinding protein A,cbpA)的表达,并通过动物实验观察clpP基因缺陷株毒力改变情况.结果 RT-PCR显示clpP缺陷株的4个毒力因子mRNA表达水平均低于野生菌,两者比较有统计学差异(P<0.05);小鼠毒力实验表明野生菌株半数致死时间为22 h,而缺陷株半数致死时间为8 d,两者比较有统计学差异(P<0.01);缺陷菌在小鼠体内被清除速度也显著快于野生菌株(P<0.05).结论 clpP基因缺陷使S.pn多种毒力因子表达减弱,毒力降低.     

“检验与临床“课程建设的实践和探索

“检验与临床”是医学检验专业开设的专业课程。该课程以病例分析为中心,以实验室数据为依据,以疾病为主线;采用启发、讨论为主的教学方法,培养学生合理地评价检验结果,使检验数据转化为有价值的临床信息,有利于培养学生临床思维和咨询能力、推动检验医师岗位建设、促进学科领域的观念更新。     

一个中国Bardet-Biedle综合症家系与BBS5位点连锁

[目的]对一个中国Bardet-Biedl综合症(Bardet-Biedl Syndrome, BBS)家系进行已知12个BBS位点/基因的基因型遗传连锁分析,找出与之连锁的位点.[方法]对中国四川省的一个Bardet-Biedl综合症家系进行临床检查并对其进行抽血提取DNA,然后用荧光标记的微卫星标记(STR遗传标记物)进行12个BBS位点的遗传连锁分析.[结果]经临床的检查后,本Bardet-Biedl综合症家系有1男性患有Bardet-Biedl综合症,临床症状包括视网膜营养不良(视网膜色素变性),多指,智力低下和肥胖,缺乏第二性征,患者睾丸和生殖器小.基因型分析和纯合子遗传连锁分析发现该家系的致病基因位点与BBS5完全连锁,而与其他已知的11个BBS位点/基因无连锁.[结论]发现了一个中国Bardet-Biedl综合症家系,经基因型分析和纯合子遗传连锁分析,发现该家系的疾病基因连锁在BBS5位点.现在正对该家系的BBS5基因进行序列分析.